鸭肠炎病毒UL41、UL42基因的克隆与分析

依据GenBank登录的鸭肠炎病毒(DEV)核苷酸序列设计引物,利用长片段PCR技术扩增了DEV基因组UL36与UL43基因之间的未知序列,扩增所得片段长度约为15 kb.经EcoRV单酶切,将其中的3.9 kb片段克隆到pUC18中.序列分析表明该3.9 kb EcoR V片段含有2个完整的转录方向相反的与单纯疱疹病毒(HSV)UL41和UL42基因同源的ORF,命名为DEV UL41和ULA2基因.通过氨基酸序列比对发现:DEV UL41基因含有5个高度保守位点,而UL42含有2个,进化树分析表明DEV与疱疹病毒科a疱疹病毒亚科的马立克病毒、火鸡疱疹病毒的进化关系非常相近,为DEV的分类提供了参考依据.     

H5亚型禽流感病毒A/Duck/Anhui/1/2006(Clade 2.3)密码子优化HA基因DNA疫苗的免疫保护效力研究

为了进一步评价基于HA基因的DNA疫苗的开发应用前景,本研究将表达H5亚型禽流感水禽群代表株A/Duck/Anhui/1/2006(H5N1)[DKAH/1/06(H5N1)]HA基因的DNA疫苗pCAGGoAHHA的免疫保护效力进行了评估,以5μg、10μg、20μg、50μg和100μg剂量免疫3周龄SPF鸡,首次免疫后3周再加强免疫一次,加强免疫后2周用106EID50的高致病力禽流感病毒(HPAIV)A/Duck/Fujian/31/2007(H5N1)[DKFJ/31/07(H5N1)]鼻腔途径进行攻毒,观察发病与死亡情况。分别于攻毒后第3d、5d、7d天采集喉头及泄殖腔拭子进行病毒分离、滴定检测攻毒鸡排毒情况,同时检测免疫及攻毒后血清HI抗体、NT抗体的动态变化。结果,20μg、50μg、100μg组的pCAGGoAHHA均可对免疫鸡产生100%完全保护(不发病、不致死、不排毒),而5μg和10μg剂量组则可对免疫鸡分别形成25%和75%的保护。结果表明,H5亚型禽流感水禽群DNA疫苗质粒pCAGGoAHHA具有良好的免疫保护性,有望成为预防H5亚型HPAIV的技术储备候选疫苗。     

H9N2亚型禽流感流行株灭活疫苗种毒的筛选

为筛选出具有良好免疫原性的禽流感病毒(AIV)H9N2亚型灭活流行株种毒,选择2008年中国大陆8个省份15株H9N2亚型AIV分离株进行抗原性分析,选取代表流行株进行鉴定并制备灭活疫苗,进行免疫效力评估。实验结果显示,2008年分离株之间抗原性比较接近,与2000年前分离株的抗原性相差较大;2008年分离的8株病毒HA基因核苷酸同源率在93.2%～98.6%之间,而CK/SH/10/01毒株与这8株病毒的同源率仅在91.9%～93.5%之间;CK/ZJ/17/08、CK/SD/2CZ/08、DK/FJ/560/08、CK/FJ/521/08、CK/HuN/174/08和CK/HuN/33/08候选株病毒在SPF鸡胚上连续传15代HA价及致病性等均未改变,SPF鸡鼻腔感染106EID50各毒株后均无任何症状和死亡出现;候选株灭活疫苗免疫SPF鸡3周时,产生针对疫苗株抗原检测的HI抗体介于10.35log2～11.811log2,以106EID50剂量鼻腔感染途径攻毒后,只有CK/HuN/174/08和CK/HuN/33/08株灭活疫苗免疫鸡不仅可以对同源毒株的攻击提供良好的免疫保护,而且对2008年分离的异源毒株的攻击也能提供比较理想的免疫保护,可作为适合我国大部分地区应用的H9N2亚型禽流感灭活疫苗种毒株。     

禽流感综合防控

高致病性禽流感是世界动物卫生组织（OIE）规定的必须报告的动物疫病,我国将其列为一类动物疫病。该病的暴发和流行不仅会给养禽业造成巨大的经济损失,而且还严重威胁着人类健康和社会稳定。     

一株H10N7亚型禽流感病毒的分离鉴定及生物学特性研究

2013年,从秦皇岛野鸟林鹬体内分离到一株H10N7亚型禽流感病毒(AIV),命名为A/Wood Sandpiper/Qinhuangdao/660-662/2013(H10N7)[简称WSP/QHD/660-662/2013(H10N7)]。本研究对该分离株的全基因序列进行测定,并对其进行致病性研究。基因组序列分析表明:该病毒的HA蛋白裂解位点为334PELMQGRGL343,属于低致病性AIV的分子特征,其HA基因与A/Duck/Hunan/S11205/2012(H10N3)的相似性达到97.90%,NA基因与A/Domestic Duck/Republic of Georgia/1/2010(H10N7)的相似性达到97.46%,内部基因与H9N2等多亚型AIV的相应基因节段具有较高的相似性,推测该分离株可能为一株多亚型流感病毒的重组株。对动物致病性试验结果显示:该病毒可以感染哺乳动物模型BALB/c小鼠,并且仅能够在鼠的肺脏和鼻甲骨粘膜上皮细胞中复制,表明该病毒分离株对小鼠也呈现低致病性。     

高致病性禽流感免疫预防风险因素的确定及层次分析模型的建立

2003年底和2004年初，亚洲一些国家和地区暴发高致病性禽流感，各个国家和地区采取了不同的防控措施。在实践的工作中，国内外禽病工作者越来越认识到，单靠扑杀控制禽流感所付出的代价太昂贵，特别是发展中国家更缺乏这种经济实力。墨西哥、意大利将扑杀和免疫预防措施相结合的预防策略已经取得国际上的认可，因此，多种预防禽流感的疫苗在国内外市场上如雨后春笋。     

禽流感疫苗的选择及正确使用方法

首先是必须选择国家农业部批准的定点企业生产的合法疫苗，不仅企业要是合法的企业，其产品也必须是合法产品。比如说某个企业被允许生产H5N2亚型禽流感单苗，那么这个企业生产的其他禽流感单苗或联苗都是非法的。若使用了非法疫苗，不仅在免疫效果上得不到保证，而且还可能会出现疫苗的安全问题，更有甚者可能由于注射疫苗本身就会造成鸡群发病甚至死亡。其次是明确要预防的禽流感亚型。     

禽流感致病的分子基础及强弱毒鉴别诊断

高致病力禽流感(HPAI)被国际兽疫局列为Ⅰ类烈性传染病.我国农业部也将该病列为一类烈性传染病.高致病性禽流感一旦暴发会给养禽业带来毁灭性的危害,1983年美国禽流感和1995年墨西哥禽流感造成相当于现今10多亿美元的经济损失.     

微生态制剂在养猪业中的应用

微生态制剂是在微生态理论指导下发展起来的一种新型活菌制剂。在饲料中添加适量的微生态制剂，可提高仔猪成活率，防止仔猪腹泻，加快猪的生长速度，改善饲料利用率，同时还可防治疾病。     

禽流感高免球蛋白的制备及应用研究

应用H9N2亚型禽流感病毒(AIV)油乳剂灭活苗6个不同剂量免疫30周龄SPF蛋鸡,通过血凝抑制(HI)和琼脂免疫扩散(AGP)试验监测血清及卵黄抗体消长规律,确定2.0 mL为最适免疫剂量。首免后第18天血清与卵黄中抗体同时升至第一高峰,此时加强免疫。二免后1周,效价达到第二高峰,用常规抽提法从高抗体滴度卵黄中提取高免球蛋白(IgY)。中和试验(NT)表明:IgY具有中和病毒感染的作用,且中和抗体滴度随HI滴度的降低而降低;给鸡肌肉注射后6 h能检测出血清的HI抗体,24 h达到峰值,维持7 d,第13天血清中HI抗体消失。104个EID50的AIV(H9N2)攻毒,同时用HI价为214的IgY的10倍系列稀释物分5组进行保护试验,确定HI价为214的IgY保护范围在100倍稀释与10倍稀释之间。IgY系列保护试验表明HI价28为完全保护的最低滴度;在攻毒的前1天及至攻毒后第5天接种IgY均能100%保护。攻毒保存期试验证明,所制得的高免球蛋白4 ℃可以保存6个月,-20 ℃可保存1年。