广东徐闻珊瑚礁国家级自然保护区海域水质环境状况分析及评价

2017年10月对广东徐闻珊瑚礁国家级自然保护区内水质进行调查监测,共设置调查站位10个。监测指标包含pH值、水温、盐度、透明度、溶解氧、亚硝酸盐、氨氮、硝酸盐、活性磷酸盐、 COD、石油类、悬浮物等12个。采用单项水质指数法、有机体污染指数法以及水体富营养化指数法对监测海域水质进行分析与评价。结果显示:广东徐闻珊瑚礁国家级保护区内部分站位活性磷酸盐含量超标,导致对应站点水质评价指数1,有机污染指数1,但富营养化评价指标在10个站位均1,表明保护区内水质开始受到轻微污染。     

凡纳滨对虾WDS基因克隆及其表达分析

[目的]分析WDS基因在凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)各组织中的表达情况及应对不同病原感染时的表达变化,以揭示WDS在动物体除生殖外其他生理活动中的功能作用.[方法]采用RACE-PCR克隆凡纳滨对虾WDS基因(LvWDS)cDNA序列,利用在线生物信息学软件进行序列分析,并以实时荧光定量PCR分析LvWDS基因在凡纳滨对虾不同组织中的表达情况及不同病原感染后的表达变化.[结果]LvWDS基因(GenBank登录号MH330316)cDNA序列全长1880 bp,其中,开放阅读框(ORF)978 bp,5'端非编码区(5'UTR)183 bp,3'端非编码区(3'UTR)719 bp,编码325个氨基酸.LvWDS氨基酸序列含有7个WD40重复序列(保守结构域),与拟穴青蟹(Scylla paramamosain)WDS氨基酸序列的相似性最高,为99%,基于WDS氨基酸序列相似性构建的系统发育进化树也显示LvWDS与拟穴青蟹WDS的亲缘关系最近.LvWDS基因在凡纳滨对虾精囊中的相对表达量最高,在血细胞、鳃和肠道等免疫组织中处于较高表达水平,在肌肉组织中的表达水平最低.经白斑综合症病毒(WSSV)和副溶血弧菌(Vib-rio parahaemolyticus)感染后,凡纳滨对虾血细胞、鳃和肠道组织中LvWDS基因的相对表达量均不同程度发生变化.[结论]WDS进化十分保守,其在不同物种中的功能稳定.LvWDS除了在凡纳滨对虾生殖发育中发挥重要作用外,可能还与免疫相关,在凡纳滨对虾抗病免疫中发挥作用.     

水产养殖学专业饲料学课程的教学改革与实践

针对水产养殖学专业饲料学课程在教学内容、教材选用和考核方式等方面存在的问题,进行了较为全面的分析,并在改革实践中通过改革教学计划、优化教学内容、探索多种教学手段、增强学生实践能力培养和改革考核方式等措施,切实提高了课程教学质量,有利于提升人才培养质量。实践表明,水产养殖学专业的饲料学教学改革内容与措施取得较好的效果,值得在水产养殖学相关课程中进行推广与应用。     

不同盐度条件下葡萄糖对余氯等水质的影响

[目的]研究葡萄糖在不同盐度条件下对余氯的去除效果,水体中微生物的生长衰亡对水体中三氮的影响,以及余氯对水体pH的影响。[方法]在4个盐度梯度(0、10、20、30)条件下设置相同浓度的葡萄糖,研究葡萄糖对水中总余氯的去除效果,同时计算各个盐度7 d内的水体水质指标。[结果]在30 h时盐度为30的水体中总余氯浓度最先降至0,与其他3组显著差异(P<0.05)。盐度为0时,弧菌无法生长。4个不同盐度梯度下的总菌数目24 h后均不同程度的增长,此后细菌数量开始减少衰亡,4组之间差异显著(P<0.05)。在7个时间点内盐度为0的水体pH比其他3个盐度梯度的pH均高,盐度0与另外3组差异显著(P<0.05)。在7个时间内4个盐度梯度的氨氮先缓慢升高然后上升速度逐渐变快,最后快速下降。在7个时间内硝酸盐变化趋向于平缓,波动不大,4组之间差异不显著(P>0.05)。4个盐度梯度的亚硝酸盐含量在0～72 h出现微小波动,但72 h后开始略有升高且在升高后保持稳定。[结论]在消毒水体中加入葡萄糖作为中和余氯的碳源,不同盐度对葡萄糖中和余氯的效率有影响,盐度越高,中和效率越高,且水体中的三氮随着水体中细菌数量的增长衰亡呈现规律变化。     

响应面法优化蓝藻溶藻菌CZBC1发酵培养工艺

[目的]优化蓝藻溶藻菌——蜡样芽孢杆菌CZBC1的发酵培养工艺,为蓝藻溶藻菌制剂的工业化发酵生产提供技术支持.[方法]通过单因素试验筛选适合蜡样芽孢杆菌CZBC1生长的最适碳源和氮源,在单因素试验的基础上,采用中心组合试验设计(CCD)确定关键因子的最佳数量水平,并以Desig-Expert 8.0.5进行回归分析,通过响应面分析获得CZBC1的最佳发酵培养工艺参数.[结果]蜡样芽孢杆菌CZBC1的最佳碳源、氮源分别为麸皮+糖蜜(1:1)和酵母膏.以麸皮+糖蜜用量(A)、酵母膏用量(B)、pH(C)、培养时间(D)为因素变量,CZBC1芽孢数(lgN)为响应值,拟合得到二次多元回归方程为lgN=8.5019-0.2222A+0.0998B-0.1292C+0.3801D+0.2194AB-0.1133AC+0.1350AD+0.2049BC-0.0651BD+0.0638CD-0.1260A2-0.3152B2-0.0380C2-0.2533D2,其中,碳源(麸皮+糖蜜)用量与氮源(酵母膏)用量的交互作用、碳源用量与pH的交互作用、碳源用量与培养时间的交互作用、氮源用量与pH的交互作用对CZBC1芽孢数的影响均达极显著水平(P<0.01,下同).响应面分析优化得到的蜡样芽孢杆菌CZBC1最佳发酵培养参数:麸皮+糖蜜6.84 g/L,酵母膏3.36 g/L,pH 6.50,培养时间42 h.此条件下,CZBC1芽孢数的实际值为5.75×108 CFU/mL,与理论值(5.90×108 CFU/mL)间无显著差异(P>0.05),但极显著高于优化前采用营养肉汤发酵培养的芽孢数(1.28×107 CFU/mL).[结论]采用响应面法优化得出蜡样芽孢杆菌CZBC1最佳发酵培养工艺能有效提高菌株的芽孢数量,且模型拟合效果较好,可用于指导蓝藻溶藻菌制剂的工业化发酵生产.     

亚硝酸盐对凡纳滨对虾血细胞毒性及p53基因表达的影响

随着水产动物集约化养殖的迅猛发展,水质污染问题日益加剧,环境中亚硝酸盐的含量不断上升,成为水产养殖中诱发爆发性疾病的重要环境因子。为探讨亚硝酸盐对凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）血细胞的毒性以及 p53 mRNA 的影响,通过预试验以及前期资料获取亚硝酸盐对凡纳滨对虾的毒性效应,选取0 mg／L 对照组和20 mg／L 浓度组,用流式细胞术检测血细胞活性氧（ROS）、一氧化氮（NO）含量和非特异性酯酶活性,运用荧光定量 PCR 技术检测 p53基因表达量变化。结果显示,在亚硝酸盐应激12 h 后,对虾血细胞的 NO 含量与对照组相比有显著升高（P ＜0．05）,在应激24、48、72 h 后有极显著的升高（P ＜0．01）;ROS 含量在应激12、48、72 h 时有极显著升高（P ＜0．01）,在应激24 h 时与对照组相比有显著的升高（P ＜0．05）。非特异性酯酶活性在应激24、48、72 h 显著下降（P ＜0．05）,p53的表达水平在应激48 h 和72 h 后显著升高（P ＜0．05）。研究表明,亚硝酸盐应激诱导对虾血细胞产生了过量的 NO 和 ROS,造成氧化胁迫作用,诱导凋亡相关基因的表达,最终导致细胞凋亡。     

凡纳滨对虾群体杂交与自交 F1低溶氧与高氨氮耐受性比较

利用6个遗传背景不同的凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)群体,通过群体间自交与杂交建立了8个交配组合。对不同交配组合F1,在幼虾和成虾阶段,进行低溶氧与高氨氮48 h胁迫试验,比较不同交配组合群体在不同生长阶段的高氨氮与低溶氧耐受性。结果显示,低溶氧胁迫,YH♀×ZX♂、SS♀×SS♂、HD♀×YH♂交配组合幼虾存活率分别为76.23%、74.61%、74.38%,显著高于其他交配组合存活率(P0.05),成虾的存活率分别为83.08%、65.57%、71.12%,可作为耐低溶氧优良品系选育的候选材料;高氨氮胁迫,YH♀×KN♂、HD♀×YH♂、YH♀×ZK♂交配组合幼虾存活率分别为97.71%、86.43%、80.01%,显著高于其他交配组合(P0.05),成虾存活率分别为85.53%、74.18%、69.23%,可作为耐高氨氮优良品系选育的候选材料;HD♀×YH♂交配组合低溶氧与氨氮耐受性均较好,但不同交配组合低溶氧与氨氮耐受性间相关性检验不显著(P0.05)。研究发现,亲本中雌虾来源为YH,子代低溶氧耐受性优良,推断抗低溶氧性状为母系主导遗传;对虾低溶氧的耐受性随着生长发育的进行而降低,高氨氮耐受性随着生长发育的进行而增强;各交配组合高氨氮和低溶氧耐受性,在幼虾阶段和成虾阶段均呈极显著相关(P0.01),表明凡纳滨对虾低溶氧与高氨氮耐受性适宜在幼虾阶段进行遗传评估。     

温度与比重互作对施獭蛤稚贝成活与生长的影响

在室内条件下,采用2因素5水平的正交试验方法研究了温度(16.0℃、20.0℃、24.0℃、28.0℃和32.0℃)与海水比重(1.016 0、1.020 0、1.024 0、1.028 0和1.032 0)互作对施獭蛤(Lutraria sieboldii)稚贝成活与生长的影响。结果表明:1)在最适宜的比重范围内,稚贝的适宜成活温度是17.0~32.7℃,最适宜成活温度是24.0~28.0℃;适宜生长温度是16.4~32.7℃,最适宜生长温度是24.0~30.0℃;2)在最适宜温度范围内,稚贝适宜的成活比重是1.016 5~1.031 8,最适宜的成活比重是1.024 0;适宜生长比重是1.016 3~1.031 8,最适宜的生长比重是1.021 3~1.028 6;3)温度与比重对稚贝成活与生长存在联合效应,适宜和最适宜的温度、比重随着比重与温度向2个极端移动而逐渐变小。     

侧孢短芽孢杆菌(Brevibacillus laterosporus)溶藻活性代谢产物对虾池颤藻(Oscillatoria sp.)溶藻效果研究

颤藻(Oscillatoria sp.)为对虾养殖池塘中的一种常见的有害蓝藻。本实验以侧孢短芽孢杆菌(Brevibacillus laterosporus)的除菌体滤液和颤藻为基础,研究各自在不同阶段的溶藻效果,通过测定藻体干重、叶绿素a含量以及藻蓝蛋白含量,探究溶藻效果的最佳作用阶段及其作用机理,为改善对虾养殖水环境提供一定的理论基础。实验结果表明：稳定期和衰亡期的除菌体滤液对颤藻的溶藻效果均影响极显著(P<0.01)：7天后颤藻干重分别减少了51.77%、47.04%,叶绿素a含量分别降低了67.60%、59.13%,藻蓝蛋白含量分别增加了33.51%、30.97%;溶藻细菌除菌体滤液对延滞期的颤藻溶藻效果影响极显著(P<0.01)：7天后颤藻干重减少了63.90%,叶绿素a含量下降了69.72%,藻蓝蛋白含量升高了54.17%。因此,本研究显示侧孢短芽孢杆菌培养至稳定期的除菌体滤液对延滞期颤藻的溶藻效果最好。     

水温、饲料蛋白及其互作效应对吉富罗非鱼生长与血清能源物质的影响

采用中心复合实验设计和响应曲面分析方法,在实验室条件下,探讨了温度(20~34℃)、饲料蛋白水平(25%~50%)及其互作效应对吉富罗非鱼(Oreochromis niloticus)幼鱼生长、饲料效率与血清能源物质(葡萄糖、甘油三酯和总蛋白)的影响。整个实验持续8周。结果表明,温度与饲料蛋白水平的一次效应对特定生长率和饲料效率有显著影响(P<0.05)。高温与饲料高蛋白水平会降低生长与饲料效率。温度的一次效应对血清葡萄糖、甘油三酯和总蛋白水平有显著影响(P<0.05)。饲料蛋白水平为37.5%时,随温度的升高,血清葡萄糖水平逐渐增加;甘油三酯和总蛋白水平呈先下降后上升的变化。饲料蛋白水平对血清葡萄糖有显著影响(P<0.05),但对甘油三酯和总蛋白水平无显著影响(P>0.05)。温度与饲料蛋白水平的互作效应对饲料效率、血清葡萄糖、甘油三酯和总蛋白有显著影响(P<0.05)。温度对生长、饲料效率和血清甘油三脂与总蛋白水平的影响较饲料蛋白明显,而对血清葡萄糖的效应则与之相反。因子与特定生长率、饲料效率、血清葡萄糖、甘油三酯及总蛋白水平这5项响应值间二次多项回归方程的决定系数分别达到0.958、0.955、0.971、0.977和0.870(P<0.01),可用于预测。综合以上实验结果,温度/饲料蛋白水平最优组合为29.9℃/40.3%,此时,特定生长率和饲料效率均较高,分别为2.748%/d和0.775,其可靠性达0.888。不同饲料蛋白水平下,水温对吉富罗非鱼血清代谢物质的影响也不同,增加水温有助于更好地利用饲料蛋白,提高血清中蛋白的分解与转化。