苏云金杆菌00-50-5发酵上清液对南方根结线虫杀虫活性研究

室内条件下,分别测定了苏云金杆菌Bt 00-50-5菌株液体和固体发酵物对南方根结线虫的毒力效果。结果显示,牛肉膏蛋白胨液体发酵法在72h所得上清液的毒性最高,南方根结线虫死亡率达到99.0%,而固体麸皮发酵物对线虫的最高毒性为发酵8h,南方根结线虫死亡率为89.0%。液体发酵上清液经葡聚糖凝胶G-75柱层析分离,柱下物在280nm处的吸收值呈现出4个峰I、II、III和IV,其值0.601,1.475,1.641和0.392,其中峰II、III、IV处收集的蛋白对南方根结线虫有毒杀作用,分子量最小的IV蛋白杀线虫活性最高。上清液天然聚丙烯酰胺凝胶电泳分离杀虫蛋白结果显示6条清晰蛋白带,其中37kDa蛋白含量最多。     

海南省象耳豆根结线虫的鉴定研究

象耳豆根结线虫寄主范围广、致病力强以及能在携带Mi抗性基因的作物上寄生繁殖,是热区最具危害性的病原根结线虫种类之一。应用比较形态学,结合mt DNA序列分析、IGS序列分析和进化发育树等分子生物学方法对海南省18个市县的根结线虫进行鉴定,确定象耳豆根结线虫在蔬菜、番石榴、哈密瓜和枣树等作物上广泛发生为害,其中枣树为首次发现的象耳豆根结线虫新寄主。研究结果表明,象耳豆根结线虫已成为海南省蔬菜作物上重要的病原根结线虫种,并有进一步扩散加重为害的趋势。     

温度与比重互作对施獭蛤稚贝成活与生长的影响

在室内条件下,采用2因素5水平的正交试验方法研究了温度(16.0℃、20.0℃、24.0℃、28.0℃和32.0℃)与海水比重(1.016 0、1.020 0、1.024 0、1.028 0和1.032 0)互作对施獭蛤(Lutraria sieboldii)稚贝成活与生长的影响。结果表明:1)在最适宜的比重范围内,稚贝的适宜成活温度是17.0~32.7℃,最适宜成活温度是24.0~28.0℃;适宜生长温度是16.4~32.7℃,最适宜生长温度是24.0~30.0℃;2)在最适宜温度范围内,稚贝适宜的成活比重是1.016 5~1.031 8,最适宜的成活比重是1.024 0;适宜生长比重是1.016 3~1.031 8,最适宜的生长比重是1.021 3~1.028 6;3)温度与比重对稚贝成活与生长存在联合效应,适宜和最适宜的温度、比重随着比重与温度向2个极端移动而逐渐变小。     

纯化的苏云金杆菌00-50-5晶体和芽孢对甘蓝尺蠖的杀虫活性

苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis，Bt)00-50-5 菌株可以高效地杀死多种鳞翅目昆虫害虫。为了深入研究该菌的治病机理和作用方式，首先需要分离和纯化晶体和孢子，研究它们的杀虫活性。本研究用纯化后的00-50-5菌株晶体和芽孢，比较它们对昆虫甘蓝尺蠖(Trichoplusia ni)的杀虫活性。初步的活性测定结果证实，在用100 μg/mL浓度处理48 h后，00-50-5菌株纯晶体以及晶体和孢子混合物都能够杀死二龄甘蓝尺蠖幼虫，死亡率达100%，纯芽孢则无毒杀效力。 致死中浓度(LC50)的测定结果表明，Bt 00-50-5菌株纯晶体的杀虫活性(LC50＝0.32 μg/mL)高于晶体和孢子的混合物(LC50＝0.48)，然而纯孢子的杀虫活性是非常低的(LC50大于500.00)。因此，00-50-5的晶体主要负责引起幼虫的死亡。     

苏云金芽孢杆菌的概况及其研究进展

苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis，Bt)杀虫剂是对人和环境友好的安全型细菌杀虫剂。目前Bt杀虫剂已被广泛应用，但因使用剂量较大，导致防治害虫时费用过高。若在生物防治中使用超高效的细菌杀虫剂，就可降低其使用剂量。Bt 00-50-5菌株是从美国引进的高效杀虫菌株，其晶体蛋白的特征分析尚未完成，其毒素的作用机理研究也未进行。本项目即将开展如下研究：(1)先用具有特异性杀虫功能的Bt 00-50-5菌株进行发酵，继续完成对防治中国害虫防治效果的评价；再分析细菌的编码杀虫毒素基因和毒素     

海口市郊菜地病虫害及其防治调研与Bt制剂应用

调查海南省海口市郊区菜地病虫害的发生情况及防治现状,并对采用生物农药Bt制剂防治白菜地害虫的效果进行初步研究。结果表明：龙头村蔬菜基地主要害虫为小菜蛾和斜纹夜蛾,主要蔬菜病害为白菜根肿病,其它病、虫害不明显。从龙头村白菜地分离到昆虫病原线虫,可以杀死害虫。野外试验结果证明,应用Bt制剂可有效防治白菜地害虫,此结果可为海南省蔬菜病虫害的防治提供一定的参考。     

苏云金芽孢杆菌的概况及其研究进展

苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)杀虫剂是对人和环境友好的安全型细菌杀虫剂。目前Bt杀虫剂已被广泛应用,但因使用剂量较大,导致防治害虫时费用过高。若在生物防治中使用超高效的细菌杀虫剂,就可降低其使用剂量。Bt 00-50-5菌株是从美国引进的高效杀虫菌株,其晶体蛋白的特征分析尚未完成,其毒素的作用机理研究也未进行。本项目即将开展如下研究:(1)先用具有特异性杀虫功能的Bt 00-50-5菌株进行发酵,继续完成对防治中国害虫防治效果的评价;再分析细菌的编码杀虫毒素基因和毒素的生化特征;然后混合荧光标记毒素和中肠细胞,加入昆虫中肠蛋白酶(或单独加入氨肽酶、碱性磷酸酶、ATP酶、枯草杆菌蛋白酶、钠或钾离子代之)反应,用荧光显微镜观察细胞变化;最后阐明杀虫毒素对靶标细胞作用机制。(2)通过研究毒素分子与受体分子的作用关系,拟在分子水平上阐明毒素的作用机制。     

海南省甘蔗寄生线虫调查与鉴定

2011~2014年,调查了海南省6个县市125份甘蔗根际土样的植物线虫发生情况。结果显示,海南甘蔗地每百克土壤中平均含有植物寄生线虫57条,其中沙性土壤中线虫平均含量达到143条,高于粘性土壤的42条。所分离出的线虫分布于13个属,包括矮化线虫属(Tylenchorhynchus spp.)、根结线虫属(Meloidogyne spp.)、短体线虫属(Pratylenchus spp.)、剑线虫属(Xiphenema spp.)、长针线虫属(Longidorus spp.)、毛刺线虫属(Trichodorus spp.)、拟毛刺线虫属(Paratrichodorus spp.)、拟长针线虫属(Paralongidorus spp.)、螺旋线虫属(Helicotylenchus spp.)、肾形线虫属(Rotylenchulus spp.)、垫刃线虫属(Tylenchus spp.)、滑刃线虫属(Aphelenchus spp.)和小环线虫属(Criconemella spp.)等。根据形态学特征及测量值,初步鉴定饰环矮化线虫(Tylenchorhynchus annulatus)及玉米短体线虫(Pratylenchus zeae)为海南甘蔗上的优势种类。     

象耳豆根结线虫初始种群密度对黄瓜生长的影响

通过室内接种方法测定土壤中接种象耳豆根结线虫(Meloidogyne enterolobii)二龄幼虫不同初始密度(0、0.125、0.25、0.5、1、2、4、8和16条/cm3)对黄瓜生长的影响。研究结果表明，黄瓜受损程度与象耳豆根结线虫初始接种密度呈正相关，随着接种密度的增加，形成的根结指数不断提高，而黄瓜植株高度和苗鲜重相比对照均表现为下降，即发病程度逐渐加重。当土壤中象耳豆根结线虫二龄幼虫的初始接种密度为0.25条/cm3，即可对黄瓜的株高和植株鲜重产生显著危害，初始密度为8条/cm3处理，则可导致黄瓜植株死亡。该研究结果可为制定象耳豆根结线虫的防治指标提供理论依据。     

昆虫病原线虫对南方根结线虫的抑制效果

为明确昆虫病原线虫、异小杆线虫(Heterorhabditis bacteriophora)Hb SD品系对南方根结线虫的生防潜力,在盆栽条件下,通过测定感染南方根结线虫的番茄苗施用昆虫病原线虫悬浮液后的根结指数、卵囊数和繁殖率等指标的变化来研究该Hb SD对南方根结线虫的抑制效果。结果表明:Hb SD 3个不同的接种时间和浓度对番茄根结指数、卵囊数和繁殖率的影响呈现出显著性差异(P﹤0.05),其中,Hb SD悬浮液施用量6 000头每盆并与南方根结线虫同时接种番茄苗的处理组根上的根结指数、卵囊数和繁殖率(2.67,53.8和19.77),与对照(3.5,82.2和26.81)相比均有很大程度的减少,对根结指数的防效可达31.40%。