应用属特异单抗和分属噬菌体鉴定沙门氏菌分离株的比较研究

本研究应用属特异单抗和分属噬菌体对102株疑似沙门氏菌分离株进行鉴定,并以标准程序作验证。结果表明,属特异单抗ELISA反应阳性的77株菌株中,76株为沙门氏菌,1株为弗劳地氏柠檬酸杆菌;而分属噬菌体O-I裂解阳性的74株细菌中,72株为沙门氏菌,2株为大肠杆菌,同时出现了漏检。这预示着属特异单抗试剂在沙门氏菌鉴定和快速检验中有很广阔的应用前景。     

多重PCR方法快速检测粪样中产气荚膜梭菌

建立了多重聚合酶链反应 (multiplexPCR)检测产气荚膜梭菌的α_毒素和肠毒素 (enterotoxin)基因。该方法可以检测猪粪便样品或小肠内容物中肠毒性产气荚膜梭菌。首先猪粪便样品经前处理后 ,接种选择性培养基 ,再挑取单个菌落溶于超纯水中 ,煮沸提抽 ,制备样品DNA ,进行PCR检测。从实验中我们成功的扩增出 32 4bp的α毒素基因片段和 2 33bp的肠毒素基因片段。以人工污染样品 10倍系例稀释后进行检测 ,该方法的检测灵敏度达到 1.0× 10 4 CFU/g并对 5 8份猪粪便样品检测 ,获得 5 3株产气荚膜梭菌 ,分离率为 91%,其中 4株为带有肠毒素的产气荚膜杆菌 ,占整个分离菌株的 7.5 %。因此多重PCR方法在检测粪样中的产气荚膜梭菌是一种非常有用的方法并可以快速检出肠毒素 ,从而避免了使用动物作定型试验。     

抗鸡白痢沙门氏菌单抗及其在鸡白痢病检疫中的应用研究

应用淋巴细胞杂交瘤技术制备了一组针对鸡白痢沙门氏菌O_9抗原的单抗。以单抗3-47-26酶结合物和鸡白痢沙门氏菌脂多糖抗原建立了一种抗体竞争ELISA试验以检疫鸡白痢病,该法通过样品抑制酶标单抗与LPS的结合,以检测鸡白痢抗体。试验结果表明,79份鸡白痢阳性血清具有显著抑制作用(95.0％±4.3％),而130份鸡白痢阴性     

鸡痘病毒基因组DNA复制非必需片段的鉴定

将中国鸡痘病毒鹌鹑化弱毒株（２８２Ｅ４）蚀斑纯化，在ＳＰＦ鸡胚成纤维细胞上增殖后，经超声波裂解，蔗糖梯度离心得到纯化病毒，以蛋白酶Ｋ消化，酚：氯仿、氯仿和水饱和乙醚抽捉，乙醇沉淀，得到ＦＰＶ基因组ＤＮＡ，后用ＥｃｏＲｌ消化，随机克隆到ｐＵＣ１８质粒中。限制性内切酶片段电泳分析结果表明，克隆到１０个不同大小的片段，根据酶切图谱分析，选取克隆或亚克隆后的单一酶切位点，插入标记基因（Ｐ１１一ＩａｃＤ筛选出３个复制非必需片段。为进一步构建表达外源片段重组质粒载体创造了良好的条件。     

鸡痘病毒ORF073基因克隆及原核表达

根据已经发表的鸡痘病毒(FPV)美国致病株的ORF073基因序列,设计1对引物,分别以282E4FPV、LP株FPV、102E6FPV为模板,扩增出目的片段,将其克隆到pGEM-TEasy载体中,经酶切鉴定证实,并进行序列测定。目的片段包含了大小为522 bp的ORF073基因,与GenBank上的AF198100(FPVUS)和AJ581527(FP9)序列进行序列比较分析表明:3种病毒株的ORF073基因与鸡痘病毒美国致病株(FPVUS)和英国弱毒株(FP9)完全一致。克隆的ORF073基因与原核表达载体pET-28a构建重组表达载体,经IPTG诱导,在BL21(DE3)细菌中表达了分子质量约32 ku的蛋白。     

快生型大豆根瘤菌的理化特性和共生效应(二)

对从辽宁省分离的快生型大豆根瘤菌的鉴定表明,其代时为2.5—4.0小时。对碳源的利用范围较广;13株快生型大豆根瘤菌除了可以利用已糖、五碳糖、三碳糖以外,而且能够利用乳糖、麦芽糖和蔗糖等双糖。在多数基质上产酸,在丙酮酸钠、苹果酸钠培养基上产碱。不利用菊糖。 快生型大豆根瘤菌不与三叶草、草木樨、紫云英、豌豆、菜甄、花生等豆科植物结瘤共生。可在豇豆、绿豆上结瘤。在与栽培大豆“开育八号”共生时,部分菌株接种后的植株干重、全氮量及固氮酶活性与慢生型大豆根瘤菌相当。所测菌株全部放氢。对三株快生型大豆根瘤菌接种大豆,其根瘤的豆血红蛋白含量不低于慢生型大豆根瘤菌。     

新城疫病毒F_（48）E_8株cDNA文库的构建

以ＳＰＦ鸡胚繁殖我国标准新城疫病毒Ｆ＿（４８）Ｅ＿８强毒株，经蔗糖密度梯度超速离心纯化病毒。再以酚－ＳＤＳ法提取病毒基因组ＲＮＡ，作为反应模板、采用Ｐｒｏｍｅｇａ公司商品试剂盒合成双股ｃＤＮＡ。以同聚物加尾的方法将ｃＤＮＡ克隆到质粒ｐＧＥＭ３Ｚｆ（一）中，经ＡＩＸ平板筛选，限制性内切酶分析和Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ标记的核酸探针检测，共获得插入外源片段大小在０．６～４．８ｋｂ的阳性克隆７５个，初步构建了Ｆ＿（４８）Ｅ＿８株的ｃＤＮＡ文库     

单克隆抗体夹心ELISA试验检测鸡新城疫病毒抗原的研究

从10株抗鸡新城疫病毒(NDV)特异性单克隆抗体(MAbs) 中筛选出2株MAbs—M22和F23,分别用作包被抗体和酶标抗体而建立的MAbs—夹心ELISA试验,对提纯NDV的最小检出量为25ng/ml病毒蛋白.NDV鸡阳性血清对本试验的特异性阻断作用和与其他禽类病毒交叉反应的阴性结果,证明本试验对NDV的特异性。从临床疑为鸡新城疫的724只病鸡的口腔棉试样品中共检出阳性502只,其中200个样品与病毒分离试验结果完全一致,两者均查出阳性鸡176只。     

沙门氏菌快速检测试剂盒的研制及其应用

在建立直接ＥＬＩＳＡ方法基础上，首次研制出检测沙门氏菌的单抗快速检测试剂盒。对现场分离菌株进行的双盲考核试验共做２８０个菌株，两种方法的总符合率为９４．６％。以２０％的脱脂乳为冻干保护剂，经冻干后，其效价和物理性状最佳，试剂盒批内和批间重复试验的变异系数小于１０％，试剂盒的稳定性较好。采用本试剂盒检测了３０５９份人的粪样，检测出１６６份阳性样品，比市站多检出７２份阳性样品。在对６１９份肉样、６８８份鱼粉、６００份奶样、６２０份蛋样检测中，比常规国标方法多检出１００株沙门氏菌。因此，以直接ＥＬＩＳＡ为基础构建的快速检测试剂盒在沙门氏菌检验中，具有重要实用价值。     

不同H5亚型禽流感灭活苗对鸡H5N1株的免疫效力试验

采用H5N2和H5N1两种类型的禽流感（AI）油乳灭活疫苗免疫鸡群对高致病性AI流行株H5N1AIV的攻毒保护效力进行了比较。结果表明：在同等免疫剂量条件下，H5N2和H5N3油乳灭活苗对鸡群具有相似或同等的免疫效力，均能抵抗对高致病性AIH5N1流行株的攻击；AI母源抗体对灭活苗免疫具有一定的干扰作用。