应用属特异单抗和分属噬菌体鉴定沙门氏菌分离株的比较研究

本研究应用属特异单抗和分属噬菌体对１０２株疑似沙门氏菌分离株进行了鉴定，并以标准程序作验证，结果表明，属特异单抗ＥＬＩＳＡ反应阳性的７７株菌株中，７６株为沙门氏菌１－株为弗劳地氏柠檬酸杆菌，而分属噬菌体Ｏ－Ｉ裂解阳性的７４株细菌中，７２株为沙门氏菌，２株大肠杆菌，同时出现了漏检。这预示着属特异单抗试剂的沙门氏菌鉴定和快速检验中有很广泛的应用前景。     

应用CSFV-E2基因噬菌体肽库筛选猪瘟病毒抗原表位

采用猪瘟单抗对猪瘟病毒石门株E2基因噬菌体随机肽库(SM-E2库)进行淘洗以研究猪瘟病毒E2抗原表位.运用猪瘟单克隆抗体WH303、WH211和M56对SM-E2库进行4轮生物淘洗,对阳性克隆再经噬菌体原位杂交、特异PCR测序分析,然后人工合成阳性多肽进行ELISA反应.经鉴定分析发现单抗WH303从SM-E2库中筛选得到一段CSFV特异的抗原多肽IECTAVSPTTLRTEVVKT,并且该段多肽与已知CSFV表位TAVSPTTLR极为相似;单抗WH211和M56未能筛选到包含CSFV序列的克隆.结果表明,利用靶基因噬菌体随机多肽库筛选抗原表位能够得到更接近于真实表位的抗原表位.     

应用噬菌体肽库技术定位沙门氏菌鞭毛蛋白上属特异性共同抗原表位

用生物素标记的沙门氏菌属特异性单克隆抗体de7作为分子探针，应用亲和筛选法从噬菌体肽库中筛选该单抗所针对的表位克隆，最终进行定位。经三轮筛选后，用斑点印迹法检测，得到良好的富集效果。通过免疫筛选法从第三轮筛选物中桃取了24个阳性克隆，再以斑点印迹、竞争ELISA进一步鉴定阳性克隆，证实已获得了沙门氏菌鞭毛属特异性共同抗原的模拟表位。测得的序列为SRRSFTTE，将其与沙门氏菌鞭毛蛋白氨基酸序列相比较，同源性较小，但在不同血清型沙门氏菌鞭毛蛋白氨基酸序列的Ⅰ区高度保守序列中，发现61-65位氨基酸的RSXXT序列与所得的线性表位有相同的排列，而大肠杆菌鞭毛蛋白氨基酸在此段的序列为RAXXT，且这种序列排列的几率为1/20^5，因此推断该单抗所针对的表位在该区段上。此外，以阳性克隆免疫Balb/c小鼠，并制备高免血清进行间接荧光检测和竞争ELISA鉴定，结果表明其具有优良的免疫原性和高度的特异性，这亦为模拟表位疫苗的研究提供了新思路。     

应用噬菌体快速检测沙门氏菌

应用沙门氏菌噬菌体O－I，对本实验室保存的100个肠科菌株进行了裂解试验，其中30株沙门氏菌4～6小时出现裂解斑，而其余的枸橼酸杆菌、大肠艾希氏杆菌、阴沟肠杆菌、产气肠杆菌及变形杆菌等表得反应全部为阴性。应用噬菌体和常规法对进出口动物产品鱼粉、肉骨粉、半年虫卵、蛤蚧及冻海鱼的20个样品进行检测，前者发现10个样品为沙门氏菌阳性，后者发现9个样品为沙门氏菌阳性，通过比较显示，应用噬菌体对进出口动物产品中沙门氏菌进行检测，具有快速、敏感、简便和经济的特点。     

应用噬菌体快速检测沙门氏菌

应用沙门氏菌噬菌体Ｏ－Ｉ，对本实验室保存的１００个肠科菌株进行了裂解试验，其中３０株沙门氏菌４－６小时出现裂解斑，而其余的枸橼酸杆菌，大肠艾希氏杆菌，阴沟肠杆菌，产气肠杆菌及变形杆菌等裂解反应全部为阴性。应用噬菌体和常规法对进出口动物产品鱼粉，肉骨粉，半年虫卵，蛤蚧及冻海鱼的２０个样品进行检测，前者发现１０个样品为沙门氏菌阳性，后者发现９个样品为沙门氏菌阳性，通过比较显示，应用噬菌体对进出口动物产     

宽裂解谱禽源沙门氏菌噬菌体的筛选及其裂解性能分析

为了筛选宽裂解谱禽源沙门氏菌噬菌体并分析其裂解性能,本试验首先对分离自不同年份、不同地区、不同宿主来源的238株禽源沙门氏菌(C01～C238株)进行药物敏感性检测和血清型鉴定,筛选出耐药率大于60.00%的抗生素;然后采用双层平板法测定50株沙门氏菌噬菌体(NP01～NP50)对238株禽源沙门氏菌的裂解谱并统计裂解率;最后选择裂解率最高的噬菌体,进一步统计其对筛选到的抗生素耐药的沙门氏菌菌株的裂解率及对不同分离年份、分离地区、宿主来源及血清型的沙门氏菌菌株的裂解率。结果表明：238株沙门氏菌对青霉素、阿莫西林、红霉素、利福平、复方新诺明的耐药率较高,均大于60.00%;其中对红霉素的耐药率最高,为88.24%;对头孢噻肟、氧氟沙星、庆大霉素、四环素的敏感率较高,为64.71%～86.13%。在238株被检沙门氏菌中,肠炎沙门氏菌有128株,鸡白痢沙门氏菌有95株,鼠伤寒沙门氏菌有6株,伤寒沙门氏菌有2株,甲型副伤寒沙门氏菌有1株,未定型沙门氏菌有6株。在50株沙门氏菌噬菌体中,有14株对238株沙门氏菌的裂解率在80.00%以上,有17株裂解率在20.00%以下;NP17的裂解率最...     

一株鼠伤寒沙门氏菌噬菌体的分离鉴定及对小鼠的防制效果研究

本研究旨在通过双层平板法从鸡粪中分离鼠伤寒沙门氏菌烈性噬菌体,并通过电镜观察、热稳定性、pH稳定性、最佳感染复数、一步生长曲线和在小鼠上的防制效果试验对噬菌体进行评估。结果显示,从鸡粪中成功分离出一株鼠伤寒沙门氏菌噬菌体(ФBLCC8-0050-3),该噬菌体有一个正多面体立体对称的头部,头径直径约65nm,无尾部结构,应属于盖噬菌体科(Tectiviridae)烈性噬菌体;噬菌斑成圆形空斑,周围有晕环,直径为2~3mm;温度耐受范围是30~50℃;pH耐受范围为3~10。当感染复数(multiplicity of infection,MOI)为0.0001时,子代噬菌体滴度最高;按照一步生长曲线结果,潜伏期为20 min左右,爆发时间为180 min左右,爆发量为43 333PFU/cell;从噬菌体对鼠伤寒沙门氏菌的防制效果来看,处理14d后,阳性对照组小鼠存活率为0,噬菌体预防组小鼠存活率为90%,噬菌体治疗组小鼠存活率为70%。说明与阳性对照组相比,预防组和治疗组都对小鼠抵抗沙门氏菌感染有一定的作用。结果表明,ΦBLCC8-0050-3是一株具有良好应用前景的噬菌体,可作为一种生物抑菌剂用于鼠伤寒沙门氏菌的防制。     

直接ELISA检测沙门氏菌方法的建立及其应用研究

从已获得的４株沙门氏菌属特异杂交瘤单克隆抗体中，筛选出ＣＢ８和Ｄｅ７两株单抗相合成酶标检测试剂，并建立了检测沙门氏菌的直接ＥＬＩＳＡ方法，它能检出沙门氏菌属９９％的菌株，而不与其他肠道杆菌反应（包括大肠杆菌，阴沟杆菌，产气杆菌，志贺氏菌，枸椽酸杆菌，克雷伯氏菌，变形杆菌和沙雷氏菌）。应用本方法检测粪样，鱼粉，奶样，其敏感性和特异性分别高达１００％和９７．６％，仅出现２．４％的假阳性率，该法不受各要     

一株鼠伤寒沙门氏菌噬菌体的分离鉴定及对小鼠的防制效果研究

本研究旨在通过双层平板法从鸡粪中分离鼠伤寒沙门氏菌烈性噬菌体，并通过电镜观察、热稳定性、pH稳定性、最佳感染复数、一步生长曲线和在小鼠上的防制效果试验对噬菌体进行评估。结果显示，从鸡粪中成功分离出一株鼠伤寒沙门氏菌噬菌体（φBLCC8-0050-3），该噬菌体有一个正多面体立体对称的头部，头径直径约65 nm，无尾部结构，应属于盖噬菌体科（Tectiviridae）烈性噬菌体；噬菌斑成圆形空斑，周围有晕环，直径为2~3 mm；温度耐受范围是30~50℃；pH耐受范围为3~10。当感染复数（multiplicity of infection，MOI）为0.0001时，子代噬菌体滴度最高；按照一步生长曲线结果，潜伏期为20 min左右，爆发时间为180 min左右，爆发量为43 333 PFU/cell；从噬菌体对鼠伤寒沙门氏菌的防制效果来看，处理14 d后，阳性对照组小鼠存活率为0，噬菌体预防组小鼠存活率为90%，噬菌体治疗组小鼠存活率为70%。说明与阳性对照组相比，预防组和治疗组都对小鼠抵抗沙门氏菌感染有一定的作用。结果表明，φBLCC8-0050-3是一株具有良好应用前景的噬菌体，可作为一种生物抑菌剂用于鼠伤寒沙门氏菌的防制。     

日本血吸虫保护性单克隆抗体SSj14识别模拟表位的筛选及其免疫原性分析

为分析日本血吸虫保护性单抗SSj14的模拟表位,观察其免疫保护作用,利用SSj14单抗筛选富集噬菌体的随机六肽库,应用免疫印迹法确定阳性克隆并分析其核苷酸序列,采用竞争ELISA法分析阳性克隆的抗原性,用筛选的阳性噬菌体克隆免疫小鼠进行日本血吸虫病免疫保护试验,计算减虫效果,并用ELISA法检测小鼠免疫前后的特异性抗体水平。结果显示,经3轮富集筛选后,免疫印迹法鉴定到4个阳性克隆,它们对SSj14单抗的抑制率分别为20.0%、40.8%、58.6%、61.5%,并分别在小鼠中诱导了7.42%、9.43%、11.74%、22.30%的减虫率。用噬菌体克隆免疫的小鼠均产生了较高水平的特异性抗体。结果表明,筛选到的阳性噬菌体克隆和SSj14单抗有较高的亲和力,并诱导了抗小鼠日本血吸虫的部分保护效果。     

应用沙门氏菌属O—I噬菌体对动物性饲料源性沙门氏菌的快速鉴定

早在1954年,Cherry就发现沙门氏菌属○—Ⅰ噬菌体在高浓度(100RTD)时,可裂解绝大部分沙门氏菌,具有属的特异性。近年来,国内已有应用这种噬菌体对沙门氏菌     

沙门氏菌属特异性单克隆抗体的验证试验

用间接ＥＬＩＳＡ测试了沙门氏菌特异单克隆抗体与１０７株肠杆菌科细菌的反应性，结果被试的１４个血清型的单相亚利桑那菌，３５株全国各地分离的鼠伤寒伤沙门氏菌及３血清型的其他沙门氏菌全部呈阳性反应，而５５株其他肠杆菌科细菌中仅有３株呈弱阳性反应，从而进一步证明了该试利较高的沙门氏菌属特异性和属内的广谱性，显示出其广阔的应用前景。     

沙门氏菌鞭毛蛋白共同抗原模拟表位的免疫生物学特性

为了探究沙门氏菌鞭毛蛋白共同抗原模拟表位阳性克隆生物学特性。用从噬菌体线性肽库及限制性库中筛选出的阳性克隆1和62分别免疫BALB／c小鼠，其高免血清对单抗de7的竞争－ELISA郊价达10^6以上，而其他血清则无抑制作用。在间接免疫荧光试验中，免疫血清均能与11株不同血清型的沙门氏菌反应，而不与大肠杆菌反应。以上结果表明，筛选获得的沙门氏菌鞭毛蛋白共同抗原模拟表位，不仅很好地模拟了天然表位，而且具有很好的抗原性。这为该表位分子基础及模拟表位疫苗的研究奠定了基础。     

四川和重庆地区鸭源沙门氏菌分离鉴定及血清型分析

为了解四川和重庆地区规模化种鸭场鸭源沙门氏菌流行情况,本研究从四川和重庆地区规模化种鸭场采集病料样品366份,分离出163株鸭源沙门氏菌。血清型鉴定结果显示163株沙门氏菌中有96株能够确定血清型,分属A、B、C1、C2、D及F共6个血清群;另有67株属于粗糙型菌落未能分型。优势菌株为伊鲁木沙门氏菌、甲型副伤寒沙门氏菌及奥雷宁堡沙门氏菌。其次为习志野沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、肠炎沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌、奥斯陆沙门氏菌、姆卡巴沙门氏菌及昌丹斯沙门氏菌。采用已确定血清型的7株鸭源沙门氏菌人工感染实验雏鸭,结果显示7株鸭源沙门氏菌均具有致病性,死亡率为20%~100%,平均死亡率77.14%。本研究为进一步研究鸭源沙门氏菌流行情况和血清型分布情况提供参考。     

食蟹猴志贺氏菌、沙门氏菌和小肠结肠炎耶尔森氏菌多重PCR检测方法的建立及初步应用

根据志贺氏菌属侵袭性质粒抗原H(ipa H)基因、沙门氏菌属特异性基因和小肠结肠炎耶尔森氏菌(ail)毒力基因,分别设计3对特异性引物,通过优化、调整PCR条件,建立了一种能同时检测食蟹猴3种致病菌的多重PCR检测方法。临床初步应用于检测137例食蟹猴肛拭子样品137份,检出志贺氏菌属阳性12株,沙门氏菌属阳性1株,小肠结肠炎耶尔森氏菌阳性1株,与传统细菌培养生化鉴定方法检测结果一致。本试验建立的多重PCR方法具有快速、准确、简便、灵敏、稳定性高等优点,具有较高的实际应用价值,为食蟹猴腹泻病原菌提供了新的快速检测方法。     

关于猪霍乱杆菌噬菌体的实验研究 第一报 猪霍乱杆菌噬菌体的分离及其特异性试验

我们曾从长春屠宰场屠杀的猪体中,先后分离出猪霍乱杆菌噬菌体21株,经过研究证明,其中有4株噬菌体的阴性菌落直径在2毫米左右(暂称为中型噬菌体),有17株噬菌体的阴性菌落直径在0.5毫米左右(暂称为小型噬菌体)。经研究证明,此中型噬菌体只对沙门氏 G族中带有“Ⅵ,Ⅻ”O-抗原的细菌发生特异的裂解作用,这种特异性作用可能与 O-抗原“Ⅶ”因子有关。但对其他各族沙门氏菌和大肠-产气杆菌,不发生裂解作用。经试验证明,此中型噬菌体对猪霍乱杆菌诊断上有用。     

应用噬菌体展示技术筛选兔出血症病毒抗原模拟表位

以抗兔出血症病毒(RHDV)的单克隆抗体A3c作为靶物质,应用噬菌体展示技术筛选RHDV抗原表位。将纯化的单抗A3c包被固相载体,经3轮亲和筛选后,挑取25株噬菌体单克隆并扩增,用ELISA测定后,提取阳性克隆单链DNA并测序,用阳性噬菌体克隆免疫小鼠制备高免血清,检测筛选抗原表位的免疫原性。结果表明:3轮亲和筛选后,特异性噬菌体克隆得到了有效富集,25株噬菌体单克隆中有19株为阳性克隆;测序结果表明,获得了与抗原高度同源的序列GTDDMDPGTTAA,即抗原的模拟表位,其中,氨基酸基序DXXDP为表位中的核心氨基酸;制备的小鼠高免血清与抗原具有较好的反应性,阳性噬菌体克隆与兔RHDV高免血清也具有较好的反应性。因此,该表位具有良好的免疫原性和反应原性。该研究为RHDV抗原表位的研究和新型疫苗的探索积累了资料。     

牛体内耻垢分枝杆菌噬菌体的分离与保存

鉴于体外分离噬菌体治疗价值的局限性,本研究从12份副结核血清学检测阳性的牛唾液和鼻黏液中成功分离纯化到不同牛体来源的4株耻垢分枝杆菌烈性噬菌体.电镜观察发现它们均属有尾病毒目,肌尾病毒科.为进一步研究和应用这些噬菌体,以其中一株为受试株,比较了16种保存方法,发现其中8种方法保存效果较好.     

某猪场腹泻仔猪沙门氏菌的分离鉴定与药敏试验

针对安徽某猪场腹泻仔猪,分别采集5头不同窝的肛拭子和肠道内容物样品,利用常规法结合PCR技术进行沙门氏菌的分离鉴定,玻片凝集试验和ERIC-PCR技术确定分离株的血清型与基因型,标准K-B纸片法进行20种抗生素敏感试验。结果显示,4头腹泻仔猪(4份肠道内容物样品、1份肛拭子样品)均分离到沙门氏菌,阳性检出率为80%,涉及明斯特沙门氏菌、纽兰沙门氏菌、新斯托夫沙门氏菌和乌干达沙门氏菌4种血清型,其中1头同时检出4种血清型沙门氏菌;8株沙门氏菌分离株为同一基因群,分属2个基因型,亲缘关系较近,对20种抗生素均敏感。结果表明,该猪场仔猪腹泻与不同血清型沙门氏菌的混合感染有一定的关系,母猪的清洁卫生与猪舍的消毒到位不容忽视,临床上常用抗生素可用于防治或减缓仔猪腹泻的发生。     

某猪场腹泻仔猪沙门氏菌能分离鉴定与药敏试验

针对安徽某猪场腹泻仔猪,分别采集5头不同窝的肛拭子和肠道内容物样品,利用常规法结合PCR技术进行沙门氏菌的分离鉴定,玻片凝集试验和ERIC-PCR技术确定分离株的血清型与基因型,标准K-B纸片法进行20种抗生素敏感试验。结果显示,4头腹泻仔猪（4份肠道内容物样品、1份肛拭子样品）均分离到沙门氏菌,阳性检出率为80％,涉及明斯特沙门氏菌、纽兰沙门氏菌、新斯托夫沙门氏菌和乌干达沙门氏菌4种血清型,其中1头同时检出4种血清型沙门氏菌;8株沙门氏菌分离株为同一基因群,分属2个基因型,亲缘关系较近,对20种抗生素均敏感。结果表明,该猪场仔猪腹泻与不同血清型沙门氏菌的混合感染有一定的关系,母猪的清洁卫生与猪舍的消毒到位不容忽视,临床上常用抗生素可用于防治或减缓仔猪腹泻的发生。