新烟草糖基转移酶原核表达质粒的构建及诱导

利用先期从烟草中克隆的一个糖基转移酶基因,通过PCR扩增得到该基因的ORF,将此片段与原核表达载体pTYB1连接,构建重组载体pT,然后转入大肠杆菌,并进行诱导表达,SDS-PAGE检测表达产物.结果表明,此基因的ORF可在大肠杆菌中表达,但表达产物以包涵体形式存在.     

β—环糊精及其衍生物对小麦种子萌发和幼苗生长的影响

β－环糊精（β－ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎ,β－ＣＤ）是由７个葡萄糖以α－１,４－糖苷键连接而成的低聚糖类化合物,它对大麦等种子的萌发具有抑制作用,但能增加萌发过程中的干物质重量,最终增加作物的产量［１］。以β－ＣＤ为母体进行化学修饰,合成的β－ＣＤ衍...     

水稻线粒体基因orf290功能的初步研究

从红莲型不育系粤泰A(YTA)线粒体基因组中克隆并鉴定了一个6.7kb的CMS相关片段HLsp1,序列预测发现了2个orf,其中一个编码290个氨基酸,暂命名为orf290。构建带有线粒体信号肽的超表达载体35S::Rf1b5'::orf290,通过农杆菌介导转化受体保持系粤泰B(YTB),以水稻的单拷贝基因蔗糖磷酸合成酶基因(SPS)作为内参基因,以潮霉素抗性基因(hpt)作为目的检测基因,基于实时荧光定量PCR鉴定转基因T0代植株中外源基因的拷贝数,并对阳性植株进行花粉镜检和结实率统计。结果显示获得了2株单拷贝转35S::Rf1b5′::orf290植株,并且都有orf290的表达。单拷贝超表达orf290植株的平均花粉可育度30.8%,平均套袋结实率41.6%。这些结果初步证实,线粒体基因orf290可能与水稻细胞质雄性不育相关。     

微量元素对籼稻品种愈伤组织诱导和褐化的影响

为了优化籼稻品种的组织培养特性,以N6培养基为基础,分析了微量元素3种不同浓度处理对籼稻品种粤泰B在组织培养中愈伤组织诱导率及褐化率的影响。结果表明:微量元素的浓度对愈伤组织的诱导率影响不大,而对褐化的控制有明显的影响,在1.2倍浓度下愈伤组织的褐化率最低为10.35%,并且愈伤组织致密、状态较好,0.8倍次之,褐化率为26.15%,而一般使用的1.0倍浓度下褐化率为44.55%,褐化情况是最严重的,并且愈伤组织软化,状态很差。     

水稻HL-CMS中orf216蛋白的原核表达和多克隆抗体制备

以常规基因重组技术,将orf216基因克隆入含有内含肽标签的原核表达载体pTYB1中,得到重组质粒pTYB1-orf216,经鉴定正确后,转化至大肠杆菌ER2566感受态细胞,15℃下0.8 mmol/L IPTG诱导15 h后,SDS-PAGE检测到大小约85 ku的特异性蛋白条带,融合蛋白以可溶组分形式存在.融合蛋白经亲和纯化后制备多克隆抗体,Western blot分析表明多克隆抗体具有较高的特异性,可与免疫原特异结合.     

拟南芥抗菌核病突变体275-7的初步研究

草酸是核盘菌致病过程中产生的毒素因子。以菌核病菌毒素草酸（3 mmol/L）为筛选压,从1 000个拟南芥T-DNA插入突变体中筛选出了1个草酸不敏感突变体,命名为275-7。通过拟南芥活体接种对突变体275-7进行菌核病抗性鉴定,与野生型相比,突变体275-7对菌核病的抗性显著增强（P<0.05）;荧光定量PCR检测结果表明,275-7中茉莉酸途径的标志基因PDF1.2的表达量是野生型的12倍,而水杨酸途径的标志基因PR1基因的表达量与野生型比较无差异。推测拟南芥突变体275-7可能通过增强水杨酸介导的防卫反应,从而表现出对菌核病的抗性。     

提高农杆菌介导的籼稻成熟胚愈伤组织再生频率研究

为了提高籼稻红莲型保持系粤泰B(YTB)成熟胚愈伤组织再生频率和遗传转化效率,利用培养基种类、菌液浓度、侵染方法、共培养方法、愈伤组织干燥处理方法、筛选剂浓度等6个方面设计农杆菌不同的培养条件进行试验。结果表明：LB和YEB培养基都可以作为农杆菌的培养方法;真空负压处理可以明显提高转化率;共培养时在共培养基上加滤纸有利于后续的除菌工作,能够提高转化效率;愈伤组织经过适当的干燥处理可以明显提高转化效率;适宜的潮霉素浓度在40~50 mg/L之间;采用V型筛选的方法,可以使转基因植株的阳性率有所提高。总之,通过对农杆菌培养条件的优化能有效地提高农杆菌介导的籼稻成熟胚愈伤组织再生频率。     

一种适用于油菜、大豆、花生、芝麻四种油料作物种子的RNA提取方法

本研究在商业化RNA提取试剂盒的基础上,通过以下3方面的改进使之成功应用于油菜、花生、芝麻和大豆的各个时期的种子RNA提取。1）增加抗氧化剂巯基乙醇和PVP;2）根据不同作物的油脂含量调整氯仿的比例;3）改进RNA沉淀方法。与常规的CTAB、TRIZOL及文献报道的RNA提取方法比较结果显示,本方法提取的RNA在完整性、得率及质量上都优于上述方法,并成功应用于后期荧光定量表达分析。FAD2基因在四种作物种子不同发育时期的差异表达结果进一步证明了此方法的有效性。     

稻瘟病新抗性基因Pita2候选基因的表达载体构建

为了验证稻瘟病新抗性基因Pita2的功能,利用长片段PCR技术从基因的供体品种PiNo.4中扩增了2个候选基因Pita2-1,Pita2-2,长度分别为6.1 kb和16.5 kb,电泳回收目的片段,然后利用双酶切分别克隆到植物表达载体pCAMBIA1300。对阳性克隆通过菌落PCR、酶切鉴定和测序分析,已成功地获得了2个候选基因的重组阳性克隆,为进一步研究Pita2基因的功能奠定了基础。     

糖基转移酶基因sm-Ngt1对水稻株高的影响

[目的]研究烟草中受甲基茉莉酸和水杨酸双重诱导的糖基转移酶基因sm-Ngt1过表达对水稻生长的影响。[方法]构建sm-Ngt1的植物表达载体,采用农杆菌浸染法转化籼稻粤泰B,对获得的阳性转基因植株进行高度检测。[结果]共获得117株阳性转sm-Ngt1植株。在成功转入sm-Ngt1基因后,水稻植株出现了不同程度的矮化,其中37%的转基因植株高度为（71.4±9.8）cm,27%的转基因植株高度为（65.1±4.6）cm,而未转基因的对照YTB平均高度为（130.0±4.3）cm。[结论]该研究为研究sm-Ngt1的功能奠定了基础。