GAPC和AT2G36580在油菜不同组织器官中的表达差异及其与雄性不育的关系

基于油菜纯合双显性雄性核不育恢复系的芯片表达谱分析结果,本文选择与糖代谢途径相关的两个基因GAPC和AT2G36580,采用荧光定量PCR方法对其在根、茎、叶、花、雌蕊、雄蕊、角果中的表达模式进行分析。结果表明,GAPC和AT2G36580在根、茎、叶、花和角果中均有表达,其中在根中表达量最高,花中表达量最低;GAPC在不育株花蕾发育的减数分裂至单核期被显著抑制,三核期表达量上升,而在可育株花蕾减数分裂至单核期表达量较高,四分体至单核期表达量最高(是减数分裂期的5.06倍),三核期表达量下降;AT2G36580在不育株花蕾发育中一直被抑制,但在可育株花蕾减数分裂至单核期表达量较高,四分体至单核期表达量最高（是减数分裂期的1.69倍）,三核期表达量显著下降。进一步对雌雄蕊中的表达量进行分析表明,这两个基因均在可育植株雄蕊中表达量高,分别是不育株雌蕊（参照）的9.11倍和4.47倍,在雌蕊中表达量比参照显著低;与参照比,在不育株雌雄蕊中表达被显著抑制。初步结果表明GAPC和AT2G36580在油菜恢复系J10中具有相似的表达模式,可能是通过影响雄蕊发育过程中的糖代谢而参与花蕾发育的调控,与不育有密切关系。     

分子标记辅助构建同质同核近等基因恢复系L-Rf5

红莲型水稻恢复系9311中有2个红莲型恢复基因Rf5和Rf6,不育系YTA中有2个不育基因orfH79和orf216;为了研究2个恢复基因与2个不育基因之间的互作关系,将红莲型水稻不育系YTA与恢复系9311杂交,杂种后代再以YTA为轮回亲本回交8代;根据Rf5基因序列设计特异分子标记,并对L-Rf5进行检测,结合花粉镜检结果,筛选出只含Rf5的纯合株系,多代自交后其表型一致,说明纯合株系L-Rf5构建成功;对近等基因恢复系的不育基因orfH79和orf216的表达量进行分析,结果显示:L-Rf5中orfH79的表达量较YTA明显下降;纯合的L-Rf5比杂合的L-Rf5不育基因orfH79的表达量稍低;L-Rf5中orf216的表达量较YTA下降并不明显。同时克隆了YTA、9311、近等基因恢复系中Rf1B序列,发现它们之间没有差异。     

武陵山区抗稻瘟病新组合长优72的选育及应用

[目的]探讨武陵山区抗稻瘟病新组合长优72的推广应用价值及开发潜力。[方法]介绍长优72的选育经过、特征特性、制种技术要点、栽培技术要点。[结果]长优72由中南民族大学生命科学院和福建省农业科学院水稻研究所合作以福建省农业科学院稻麦研究所培育的不育系长丰A与中南民族大学生命科学院选育的恢复系R01-72配组育成,是适用于武陵山区中低海拔(500～800m)的杂交迟熟中稻新组合,表现出生长势强,耐肥抗倒,米质较优,抗稻瘟病等特点,于2012年通过湖北省品种审定。[结论]该研究可为长优72的大面积推广应用奠定基础。     

稻瘟病新抗性基因Pita2候选基因的表达载体构建

为了验证稻瘟病新抗性基因Pita2的功能,利用长片段PCR技术从基因的供体品种PiNo.4中扩增了2个候选基因Pita2-1,Pita2-2,长度分别为6.1 kb和16.5 kb,电泳回收目的片段,然后利用双酶切分别克隆到植物表达载体pCAMBIA1300。对阳性克隆通过菌落PCR、酶切鉴定和测序分析,已成功地获得了2个候选基因的重组阳性克隆,为进一步研究Pita2基因的功能奠定了基础。     

糖基转移酶基因sm-Ngt1对水稻株高的影响

[目的]研究烟草中受甲基茉莉酸和水杨酸双重诱导的糖基转移酶基因sm-Ngt1过表达对水稻生长的影响。[方法]构建sm-Ngt1的植物表达载体,采用农杆菌浸染法转化籼稻粤泰B,对获得的阳性转基因植株进行高度检测。[结果]共获得117株阳性转sm-Ngt1植株。在成功转入sm-Ngt1基因后,水稻植株出现了不同程度的矮化,其中37%的转基因植株高度为（71.4±9.8）cm,27%的转基因植株高度为（65.1±4.6）cm,而未转基因的对照YTB平均高度为（130.0±4.3）cm。[结论]该研究为研究sm-Ngt1的功能奠定了基础。     

HL-CMS同质异核近等基因恢复系‘L-Rf6’的构建

为了研究红莲型水稻中2个恢复基因与2个不育基因的互作关系,用红莲型水稻不育系‘粤泰A’(‘YTA’)与恢复系‘9311’杂交,所得F1代再与保持系‘粤泰B’(‘YTB’)多次回交,最终构建了与不育系‘YTA’同质异核的近等基因恢复系‘L-Rf6’。根据Rf5和Rf6的基因序列设计了特异性分子标记,并对‘L-Rf6’进行检测。结果显示成功构建了近等基因恢复系‘L-Rf6’。对近等基因恢复系的不育基因orfh79的表达量进行分析,结果显示‘L-Rf6’中orfh79的表达量与‘YTA’比较明显下降。该近等基因恢复系的构建为阐述红莲型水稻多个恢复基因与多个不育基因的互作关系打下基础。     

一种适用于油菜、大豆、花生、芝麻四种油料作物种子的RNA提取方法

本研究在商业化RNA提取试剂盒的基础上,通过以下3方面的改进使之成功应用于油菜、花生、芝麻和大豆的各个时期的种子RNA提取。1）增加抗氧化剂巯基乙醇和PVP;2）根据不同作物的油脂含量调整氯仿的比例;3）改进RNA沉淀方法。与常规的CTAB、TRIZOL及文献报道的RNA提取方法比较结果显示,本方法提取的RNA在完整性、得率及质量上都优于上述方法,并成功应用于后期荧光定量表达分析。FAD2基因在四种作物种子不同发育时期的差异表达结果进一步证明了此方法的有效性。     

拟南芥抗菌核病突变体275-7的初步研究

草酸是核盘菌致病过程中产生的毒素因子。以菌核病菌毒素草酸（3 mmol/L）为筛选压,从1 000个拟南芥T-DNA插入突变体中筛选出了1个草酸不敏感突变体,命名为275-7。通过拟南芥活体接种对突变体275-7进行菌核病抗性鉴定,与野生型相比,突变体275-7对菌核病的抗性显著增强（P<0.05）;荧光定量PCR检测结果表明,275-7中茉莉酸途径的标志基因PDF1.2的表达量是野生型的12倍,而水杨酸途径的标志基因PR1基因的表达量与野生型比较无差异。推测拟南芥突变体275-7可能通过增强水杨酸介导的防卫反应,从而表现出对菌核病的抗性。     

提高农杆菌介导的籼稻成熟胚愈伤组织再生频率研究

为了提高籼稻红莲型保持系粤泰B(YTB)成熟胚愈伤组织再生频率和遗传转化效率,利用培养基种类、菌液浓度、侵染方法、共培养方法、愈伤组织干燥处理方法、筛选剂浓度等6个方面设计农杆菌不同的培养条件进行试验。结果表明：LB和YEB培养基都可以作为农杆菌的培养方法;真空负压处理可以明显提高转化率;共培养时在共培养基上加滤纸有利于后续的除菌工作,能够提高转化效率;愈伤组织经过适当的干燥处理可以明显提高转化效率;适宜的潮霉素浓度在40~50 mg/L之间;采用V型筛选的方法,可以使转基因植株的阳性率有所提高。总之,通过对农杆菌培养条件的优化能有效地提高农杆菌介导的籼稻成熟胚愈伤组织再生频率。     

水稻HL-CMS中orf216蛋白的原核表达和多克隆抗体制备

以常规基因重组技术,将orf216基因克隆入含有内含肽标签的原核表达载体pTYB1中,得到重组质粒pTYB1-orf216,经鉴定正确后,转化至大肠杆菌ER2566感受态细胞,15℃下0.8 mmol/L IPTG诱导15 h后,SDS-PAGE检测到大小约85 ku的特异性蛋白条带,融合蛋白以可溶组分形式存在.融合蛋白经亲和纯化后制备多克隆抗体,Western blot分析表明多克隆抗体具有较高的特异性,可与免疫原特异结合.