长筒石蒜花被片DNA的提取及ISSR体系的建立

以长筒石蒜为例,探讨了花被片DNA的提取方法。并在此基础上,确立其ISSR反应程序及体系。反应程序为: 94℃预变性3min,进入38个PCR循环( 94℃变性30s, 58℃复性30s, 72℃延伸90s),最后于72℃延伸7min。扩增反应总体积为20μL: 1×Taq酶扩增缓冲液, 1. 5mmol/LMg2+, 200μmol/LdNTP, 0. 5μmol/L随机引物, 0. 5UTaq聚合酶,DNA模板10~30ng。     

龙眼ISSR反应体系的建立和优化

对影响龙眼ISSR-PCR扩增反应的各个参数进行优化,建立适合龙眼的ISSR反应体系:PCR反应体积为20μl,其中模板DNA 25ng,引物0.2μmol/L,dNTP 100μmol/L,Taq DNA聚合酶0.5U,MgCl2 2.5mmol/L,10×PCR缓冲液2.0μl;扩增程序为94℃预变性5min;94℃变性1min,退火温度1min,72℃延伸90s,40个循环;72℃延伸7min。     

ISSR分子标记及其在树木遗传育种研究中的应用

在比较ISSR和其它分子标记的原理和特点的基础上,综述了ISSR分子标记在树木遗传多样性研究、亲缘关系及系谱分析、优良种质和品种鉴定及遗传连锁图谱的构建等领域的研究进展,指出了目前ISSR分子标记在树木遗传改良和辅助育种等研究领域存在的问题,并提出今后的研究方向。     

浙江仙居长叶榧自然居群遗传多样性的ISSR分析

采用ISSR分子标记技术,对中国特有树种长叶榧的遗传多样性和遗传分化进行分析.用10个引物对浙江省仙居县的5个长叶榧居群共100个样品进行扩增,共测到136个位点,其中多态位点72个,多态位点百分率（P）为52.97%.长叶榧总的Shannon信息指数(I)为0.269 1,Nei指数（h）为0.175 8,表明种水平的遗传多样性较高,而居群水平的遗传多样性较低,P平均为28.09%,I平均为0.138 9,h平均为0.091 2.AMOVA分子差异分析表明长叶榧居群间遗传分化程度高,45.72%的变异存在于居群间,54.28%的变异存在于居群内,居群间的基因分化系数（Gst）为0.489 1.长叶榧居群间的基因流很低,为0.522 4.瓶颈效应、居群隔离和遗传漂变可能是造成长叶榧居群低遗传多样性和居群间较高遗传分化的主要原因.5个居群间的平均遗传距离为0.128 0.利用算权平均数法（UPGMA）对长叶榧居群进行聚类,结果可分为两大类群:下辽和龙潭坑2个居群组成一个类群;石舍与石长坑居群先聚在一起,再与夹坟坑居群组成另一个类群.      

ISSR标记在侧耳属菌株分类学中的初步应用

基于重复序列(TATG)4,设计了7条引物P0~P6,对侧耳属的22个菌株和1株双孢蘑菇菌株的基因组DNA进行重复序列间区序列(ISSR)PCR扩增。引物P0、P1在23个菌株上扩增共得到120条带。聚类分析结果显示,在0.71水平将以上侧耳菌株分为5组:阿魏蘑、白阿魏蘑、杂交阿魏蘑位于第2组;凤尾831、16号秀珍菇位于第3组;鲍鱼菇位于第4组;其他供试菌株位于第1组。利用引物P1对17号日本秀珍菇扩增得到了1条约1.3 kb片段,经克隆和测序分析,验证了重复序列(TATG)4的存在,并达到了微卫星基序的最低重复次数。     

引物浓度与退火温度对ISSR扩增片段大小的选择性

用ISSR法,在不同浓度与不同退火温度下,对长豇豆中基因组的不同分子量片段进行扩增,结果表明,引物浓度对扩增片段大小具有强烈选择性,对退火温度也具有一定的选择性。     

紫色甘薯资源的形态学和ISSR荧光标记分析

【目的】分析紫色甘薯品种的遗传多样性,其遗传差异,为紫色甘薯遗传育种亲本选择提供理论依据。【方法】以引进的10份紫色甘薯为材料,利用形态学性状和ISSR 荧光标记毛细管电泳技术分析品种遗传多样性。【结果】基于20项形态学性状的聚类图,在欧式距离为9.97处,可分为两大类群,第一大类为宁紫1号、山东紫薯、渝紫2号、徐紫8号、越南紫薯 ;第二大类为鄂12、宁紫4号、渝紫3号、渝紫11、南紫018 。紫色甘薯种质资源的观测等位基因为(Na)为2个,平均有效等位基因数(Ne)为1.919 0,期望杂合度(He)为0.237 5,香农指数(I)为0.433 3,在遗传距离为0.96时,10份供试紫色甘薯材料可分为两大类。【结论】部分供试材料的ISSR标记聚类结果与形态学标记在遗传背景和类群划分上具有一致性,但是两种鉴定分类方法的聚类分析结果也存在一定差异。紫色甘薯种质材料遗传多样性丰富,将形态学及ISSR标记结合能有效提高品种间特异性的鉴定,更能客观、准确的确定种质资源的亲缘关系。     

7个秀珍菇菌株栽培特性及ISSR遗传分析

对收集的7个秀珍菇菌株栽培特性进行比较,结合ISSR分子标记鉴定,对它们的遗传多样性进行分析,结果表明:农艺性状优良的菌株为P817、P618;供试菌株间遗传相似系数为0.29~0.73,当遗传距离达到0.59水平时供试菌株分成4组,其中P817、P618分属不同组别,存在一定的遗传距离,为秀珍菇的种质资源评价提供理论依据。     

利用ISSR分子标记鉴定苦瓜杂交种纯度

[目的]采用 ISSR分子标记对苦瓜杂交一代品种秀玉1号纯度进行鉴定,为生产上提高苦瓜新品种纯度鉴定效率提供参考。[方法]利用ISSR技术和91条引物,对苦瓜品种秀玉1号及其亲本的DNA指纹进行分析。[结果]从91条引物中筛选出两条特征引物能同时扩增出F1代及其父母本的多态性条带,分别是ISSR-845和 ISSR-891,两个特异位点分别位于510和300 bp处。其中ISSR-891能够准确区分母本自交系与杂种 F1,经群体验证表明该标记与田间鉴定结果高度一致。[结论] ISSR技术具有准确、简便、高效和实用强等优点,可用于生产上苦瓜种子纯度的快速鉴定。     

蓝莓品种 ISSR 指纹图谱构建的初步研究

利用 ISSR 分子标记技术分析17个蓝莓品种的遗传多样性,并构建 DNA 指纹图谱。从60个 ISSR 引物中筛选出10个稳定的多态性引物。采用 NTSYS-PC 2．0软件进行聚类分析,17个蓝莓品种的遗传相似系数为0．66～0．86,在0．69的水平可分为4个品种群。引物 UBC825、UBC862可将17个蓝莓品种区分开,并依此建立了数字化的 DNA 指纹图谱,为蓝莓品种分类、快速鉴定提供依据。