利用性别决定基因(SRY)进行牛早期胚胎性别鉴定的研究

利用牛性别决定基因(SRY)和酪蛋白αs1基因(CSN1S1)分别设计雄性特异性引物和内标引物,两对引物均各设计一对嵌套式引物进行多重PCR和多重巢式PCR,用于牛早期胚胎性别鉴定。SRY基因和CSN1S1基因外、内引物扩增片断长度分别为357bp、232bp、528bp和367bp。实验结果表明,这两个引物组合建立的多重PCR扩增体系均有较高的扩增稳定性和准确率,但在常规PCR体系中,它们的灵敏度均不高(约50pg,相当于16个细胞的DNA量),这在一定程度上限制了其在胚胎性别鉴定中的应用。而由二者建立的巢式PCR灵敏度可达到5pg,故可以很好地满足胚胎性别鉴定的需要。     

猪肉与牛肉重组粘合效果的研究

根据猪肉与牛肉的质构,营养特点对其碎肉进行重组加工,通过试验得出,在温度4℃条件下腌制2h、添加2.0%食盐、2.0%蔗糖、0.5%酪蛋白酸钠、0.5%谷氨酰胺转胺酶,产生最佳粘合效果,而且也能提高肉制品的品质与风味。     

猪肉与牛肉重组粘合效果的研究

根据猪肉与牛肉的质构,营养特点对其碎肉进行重组加工,通过试验得出,在温度4℃条件下腌制2h、添加2.0%食盐、2.0%蔗糖、0.5%酪蛋白酸钠、0.5%谷氨酰胺转胺酶,产生最佳粘合效果,而且也能提高肉制品的品质与风味.     

奶牛β-酪蛋白基因的克隆及序列分析

利用高保真PCR技术扩增了黑白花奶牛β-酪蛋白基因(CSN2)5'和3'调控成分,纯化PCR产物与pMD19-TVector亚克隆后酶切鉴定和测序.结果表明:克隆片断与奶牛β-酪蛋白基因相应区域同源性分别为97.0%和99.0%,并且包含有大部分的CSN2表达核心调控序列和多个转录、翻译因子的结合位点,获得了黑白花奶牛β-酪蛋白基因调控区的克隆.为构建乳腺特异表达载体,指导外源基因在转基因动物乳腺内高效表达奠定了基础.     

NaCl对酪蛋白酸钠溶液流变学特性及结构变化的影响

采用流变仪,扩散光谱和FTIR相结合的方法研究了NaCl对酪蛋白酸钠溶液特性的影响.添加NaCl后,FTIR图谱的形状和波峰并未发生变化,但是强度发生变化,分析原因为:NaCl同蛋白质竞争吸水,间接增加了蛋白质浓度,并且降低了体系的扩散性能,表现在特征衰减时间r的增加上,但是NaCl并未影响酪蛋白酸钠溶液的2级结构.流变学特性研究表明:3％和7.5％的酪蛋白酸钠溶液为牛顿流体,15％的酪蛋白酸钠溶液为非牛顿流体,添加NaCl能够显著增加体系的黏度值.对15％的酪蛋白酸钠溶液进行时间依赖性和触变性研究的结果表明,此时的体系是负触变性体系.     

内切酶与端肽酶水解牛乳酪蛋白的研究

蛋白质经酶水解得到的多肽往往带有较明显的苦味,限制了其在食品中的应用.为优化牛乳酪蛋白的酶水解条件,采用枯草杆菌碱性蛋白酶Alcalase和风味蛋白酶Flavourzyme协同对牛乳酪蛋白进行水解,得到了Alcalase AF 2.4 L酶水解的最佳工艺条件是:底物浓度2％、pH值8.5、温度为55℃、加酶量为20μL...     

基于反相高效液相色谱技术测定市售羊乳粉中蛋白

为鉴别及检测不同地区市售羊乳粉的品质，基于反相高效液相色谱（reversed-phase high performance liquid chromatography，RP-HPLC）技术，将35 种市售羊乳粉根据陕西地区和非陕西地区、纯羊乳粉和配方羊乳粉进行分 类与检测，研究不同产地、不同种类羊乳粉的差异，对羊乳粉品质进行分析判别。结果表明：对市售羊乳粉乳蛋 白进行RP-HPLC测定发现，配方羊乳粉αs2-酪蛋白（αs2-casein，αs2-CN）和β-CN相对含量分别低于纯羊乳粉20%和 24%，κ-CN和乳清蛋白相对含量分别高于纯羊乳粉30%和50%；不同地区纯羊乳粉乳蛋白组成及含量相似。因此， 通过RP-HPLC可以实现对市售羊乳粉中乳蛋白的测定和质量评价。     

PDCD4对奶山羊乳腺上皮细胞的凋亡及β-酪蛋白和TG合成的影响

旨在探究奶山羊程序性细胞死亡因子4(programmed cell death 4,PDCD4)对乳腺上皮细胞(goat mammary epithelial cells, GMECs)凋亡及乳成分的调控作用。本研究通过双荧光素酶报告试验验证miR-21-5p与PDCD4的靶向关系，通过RT-qPCR、Western blot试验检测miR-21-5p对PDCD4的调控作用；将PDCD4干扰小RNA(si-PDCD4)与PDCD4过表达载体(pc3.1-PDCD4)转染进GMECs以探究PDCD4对GMECs的影响，通过EdU、CCK-8试验检测转染后对GMECs增殖的影响，利用流式细胞术检测转染后对GMECs凋亡的影响；利用ELISA试剂盒检测转染后GMECs中β-酪蛋白和甘油三酯(TG)的分泌情况；最后通过Western blot试验检测转染后GMECs中PI3K、mTOR、S6K、ERK、Bcl-2、Bax等蛋白的表达。双荧光素酶报告试验结果表明，PDCD4与miR-21-5p靶向结合；EdU、CCK-8及流式细胞术试验结果表明，过表达PDCD4后GMECs活力显著降低(P<...     

α-乳白蛋白与β-酪蛋白预防炎症的协同作用研究

牛乳中酪蛋白比例高,而母乳中乳清蛋白含量高,α-乳白蛋白、β-酪蛋白作为母乳中主要的乳清蛋白和酪蛋白,以α-乳白蛋白和β-酪蛋白为研究对象,利用脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞炎症反应,探究不同比例的组合蛋白对细胞炎症的预防作用,探索乳清蛋白和酪蛋白的最佳配比,使婴配粉更贴合母乳。结果表明,添加α-乳白蛋白和β-酪蛋白单体能改变炎症因子mRNA和蛋白水平的表达,然而当混合比例为1:0.17时效果最佳,能显著降低白介素6(IL-6)、白介素10(IL-10)、髓样分化基因88(MyD88)、Toll样受体4(TLR4)在mRNA水平的表达,在蛋白水平降低IL-6 1.99倍、白介素1β(IL-1β)3.91倍、肿瘤坏死因子α(TNF-α)2.72倍。通过抑制非TLR4介导炎症信号通路关键蛋白NF-κB p65的磷酸化抑制炎症的发生。本研究明确了α-乳白蛋白和β-酪蛋白预防炎症发生的最佳比例,初步阐明了两者协同抗炎的作用机理,为其在婴幼儿配方奶粉中的精准添加提供理论支持和技术指导。     

过氧化物酶催化酪蛋白的交联反应优化与乳化性改

采用辣根过氧化物酶对酪蛋白进行酶促交联,并经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、光谱分析和毛细管电泳验证.利用毛细管电泳、面积归一化方法对交联酪蛋白进行分析并计算交联度;以交联度为指标、应用响应面分析法对交联条件优化,得出适宜的条件为:温度37℃、反应时间2.9 h、酶添加量为每克蛋白质4.73μkat,此条件下酪蛋白交联度达到6.9%.与酪蛋白相比,交联酪蛋白的乳化活性在蛋白质质量分数为0.01%时提高了8.7%,而其乳化稳定性在蛋白质质量分数为0.03%时提高了21.1%.