沉默Prx Ⅱ基因促进5-FU诱导HepG2细胞凋亡研究

旨在探究PrxⅡ对5-FU诱导HepG2(人肝癌细胞系)细胞凋亡的影响,阐明沉默PrxⅡ基因提高5-FU促进HepG2发生细胞凋亡的作用。利用慢病毒介导的shRNA干扰技术建立PrxⅡ基因沉默的HepG2细胞系、MTT法检测细胞存活率、荧光显微照相测定凋亡情况、蛋白质免疫印迹检测凋亡相关蛋白表达水平。结果表明PrxⅡ基因沉默的HepG2细胞系构建成功;MTT检测发现在1mmol·L-15-FU处理下,shPrxⅡ组细胞存活率明显低于Scramble组;荧光显微照相结果表明shPrxⅡ组细胞凋亡率明显高Scramble组;蛋白质免疫印迹结果表明PrxⅡ基因沉默的HepG2细胞中凋亡标志物PARP、促凋亡蛋白Bad的表达水平明显升高,抗凋亡蛋白Bcl-xL表达水平明显下降。研究表明,沉默PrxⅡ基因能提高HepG2对5-FU促凋亡作用的敏感性,导致HepG2细胞凋亡水平上升,研究结果可为提高肝癌细胞对于5-FU的敏感性提供新的潜在靶目标。     

石鲽鳍细胞系的建立及三丁基锡对其毒性作用的研究

为建立石鲽鳍细胞系并研究三丁基锡对其毒性作用,根据石鲽鳍组织的特点采用特定酶消化法启动原代培养,并成功传代。试验结果显示,在24℃,培养于含有碱性成纤维样生长因子及20%胎牛血清的DMEM/F12培养液(pH值7.2)中的鳍细胞,生长分裂状态佳,为成纤维样细胞。传代培养后继续保持旺盛的生长分裂速度,可稳定传代。第60代石鲽鳍细胞的群体倍增时间为46.7 h,特征性染色体数目为48条。目前鳍细胞已传至第68代,已成功建立石鲽鳍细胞系。不同浓度三丁基锡处理后结果显示,1～80 ng/mL三丁基锡均可对鳍细胞产生明显的毒性作用,三丁基锡对鳍细胞的48 h-IC50值为39.87 ng/mL。     

落叶松胚性细胞系分化能力及染色体变异的研究

以落叶松未成熟合子胚诱导的16个胚性细胞系为材料,对继代培养的细胞系间及不同世代间染色体数目和体细胞胚胎发生率进行对比研究,结果表明:落叶松胚性细胞系随继代培养时间的增加,总体体细胞胚分化能力逐渐下降,平均体细胞胚分化率从继代培养第7次后的335.6个·g ^-1降低到第22次后的268.2个·g^-1,细胞染色体数目变异率逐步增加,从5.4%上升到40.0%;不同细胞系间体细胞胚分化能力及稳定性差异明显,分化能力较高的细胞系染色体数目变异几率相应较小,在继代培养第25次后,细胞系a214染色体数目变异率为0%,体细胞胚分化率为416.1个·g ^-1。     

鸡球虫疫苗及其佐剂研究进展

    疫苗是捻转血矛线虫病防治研究中的热点之一,已有多种疫苗候选抗原得到鉴定,多数抗原在线虫的肠道表达,其天然提取物能够提供有效的免疫保护,减卵率可达70%～95%.由于糖基化作用、空间构象的错误折叠等因素的影响,疫苗候选抗原的重组形式不能为动物提供有效的免疫保护;免疫策略难以制定、佐荆难以选择也成为疫苗研制中的桎梏.因此,开发与天然提取物具有相似功能的转基因蛋白成为目前疫苗研究中的焦点,秀丽隐杆线虫表达系统和寄生性线虫细胞系的培育是研究中比较有潜力的两个方向;同时,RNAi技术等新方法的运用也加快了新的疫苗候选抗原的鉴定进程.     

胃癌中Runx3基因甲基化表达及临床研究

目的:通过检测胃癌中Runx3基因启动子区域甲基化状态及Runx3基因表达情况,探讨Runx3基因启动子区域甲基化及表达在胃癌发生和发展过程中的意义。方法:采用DNA甲基化特异性PCR(MSP)技术分别对9种胃癌细胞系和35例胃癌患者手术切除肿瘤组织及其癌旁组织Runx3基因启动子区域甲基化进行检测,同时采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Runx3 mRNA的表达情况。结果:在7种胃癌细胞系中Runx3基因启动子区域过度甲基化;Runx3基因在35例胃癌及其癌旁组织中甲基化率分别为40.0%(14/35)和8.6%(3/35);胃癌组织标本中Runx3基因表达(0.5938±0.1007)较癌旁正常组织表达(0.8311±0.2872)明显下调,差异有统计学意义(P<0.05)。Runx3 mRNA在胃癌标本的表达与其病理临床特征密切相关,在伴有淋巴结转移和低分化的胃癌组织标本中Runx3 mRNA的表达显著下调(P<0.01)。结论:Runx3基因启动子区域甲基化是导致Runx3基因失活的主要原因之一,与胃癌的发生发展密切相关,可作为胃癌早期诊断的分子标记物及分子治疗的靶点。     

新城疫病毒D90毒株抑制人胃癌BGC-823细胞的体外研究

为了探究NDV-D90对BGC-823细胞的抑制作用,通过细胞毒性、肿瘤细胞侵袭和流式细胞术实验,来确定新城疫病毒D90毒株(Newcastle disease virus,NDV-D90)对胃癌细胞株BGC-823(低分化)的抑制作用。结果显示:NDV-D90能抑制BGC-823细胞的增殖和侵袭,病毒在BGC-823细胞中有很强的复制能力,并且NDV-D90对BGC-823细胞主要造成坏死并伴随着少量的凋亡。     

视网膜色素上皮细胞光损伤模型的建立与评估

目的 通过不同光照时间和光照强度,探索建立最佳视网膜色素上皮细胞光损伤模型,为视网膜光损伤细胞造模方法提供理论依据。方法 选取原代大鼠视网膜色素上皮细胞和大鼠视网膜色素上皮细胞系,LED白色冷光灯模拟自然光源,选取（2 500、5 000、7 500、10 000 Lux）作为光照强度,以不同光照时间（6、12 h） 对细胞进行照射,建立光损伤模型,镜下观察细胞形态,采用MTT法检测细胞活力。结果 光照处理后,RPE细胞活力受到抑制,随着光照强度及时间增强,细胞活力降低明显,原代细胞6 h 7 500、10 000 Lux和12 h 5 000、7 500、10 000 Lux,细胞系6 h 10 000 Lux和12 h 7 500、10 000 Lux,视网膜色素上皮细胞活力均低于空白组（P<0.01）,差异有统计学意义。结论 RPE细胞活力受光照时间及强度抑制,原代细胞较细胞系对光损伤更敏感。     

木犀草素和槲皮素体外抗炎作用研究

旨在观察木犀草素及槲皮素对脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞瘤细胞系(RAW264.7)分泌NO、TNF-α、IL-1β、IL-6以及IL-10的影响,评价其抗炎效果。试验采用LPS诱导RAW264.7细胞炎症模型,选对数生长期细胞,设对照组、LPS组、木犀草素5、2.5、1.25μg/mL组,槲皮素10、5、2.5μg/mL组。药物预处理4h后致炎24h,Griess法测定细胞培养上清液中NO的含量,ELISA测定上清液中TNF-α、IL-1β、IL-6以及IL-10的含量。试验数据表明,木犀草素及槲皮素均可极显著地抑制LPS诱导RAW264.7细胞后NO、TNF-α、IL-1β以及IL-6含量的升高(P0.01),且在一定程度上呈剂量依赖性。结果表明,木犀草素及槲皮素在体外具有良好的抗炎效果。     

虫螨腈对斜纹夜蛾细胞的毒力及对线粒体膜电位的影响

以MTT法测定了虫螨腈等杀虫剂对斜纹夜蛾(Spodoptera litura,SL)细胞的毒力,并用流式细胞仪测定了虫螨腈对SL细胞线粒体膜电位的影响。结果表明: 100 μg/mL的氟虫腈、丁醚脲、虫螨腈处理SL细胞24 h后,对细胞增殖的抑制率依次为14.57%、22.91%、 52.53%;虫螨腈对SL细胞24和48 h的IC50值分别为57.56和2.60 μg/mL;50、100、200 μg/mL虫螨腈处理细胞24 h后,与对照相比,SL细胞线粒体膜电位分别降低46.87%、57.17%、73.31%,其下降值与药剂浓度呈正相关。     

表达Cre重组酶的真核细胞系的建立及在重组伪狂犬病病毒研究中的应用

根据Cre基因序列设计并合成1对引物,PCR扩增出Cre基因编码区,克隆于pIREShyg载体,得到重组质粒pIREShyg-Cre,转染HEK-293A细胞后经400 μg&#183;mL-1 Hygromycin B的筛选,将其中1个阳性克隆命名为293A-Cre.利用伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)S03109株(带有gfp报告基因表达盒及loxP位点)感染293A-Cre细胞,荧光显微镜观察、PCR及Western blot检测gfp基因的表达.结果表明,S03109感染293A-Cre二代后loxP位点间的gfp表达盒被删除,获得重组病毒S0419.将S0419感染已转染pBlulox的293A-Cre细胞,在RK13细胞上筛选得到表达LacZ的重组病毒S06293.S06293在293A-Cre细胞上传代2次,X-Gal原位染色表明LacZ的表达消失.测序结果证实,在Cre重组酶作用下,2个同向loxP序列之间的外源基因序列被正确除去.以上结果表明,本研究构建的稳定表达Cre重组酶的293A-Cre细胞系可以用于在包含有loxP位点的PRV基因组中外源基因的快速删除或整合.