植物乳杆菌ST-Ⅲ粘附肠上皮样细胞系Caco-2性质的研究

选取肠上皮细胞Caco-2为体外模型,研究动力学因素和外在环境因素对ST-Ⅲ粘附效果的影响.结果发现ST-Ⅲ对Caco-2细胞的粘附在一定浓度和时间范围内存在量效关系.当加入细菌浓度达到4x108 CFU/mL、孵育2h时,粘附趋于饱和.稳定期的ST-Ⅲ对Caco-2细胞的粘附效果最好,推测与稳定期粘附素或相关物质的合成量最多有关.在外在环境对粘附效果的影响中,pH值对于粘附作用具有显著影响(P＜0.05),在中性范围粘附性最强;随着加入甲基-α-D-甘露糖苷浓度的升高,粘附的ST-Ⅲ数目显著下降(P＜0.05),当加入量大于100μmol/L,抑制作用趋于平缓;Ca2 、Mg2 并没有参与到ST-Ⅲ对Caco-2细胞的粘附中.实验结果表明,ST-Ⅲ对Caco-2细胞的粘附是多种因素共同作用的结果,其中粘附素与受体的结合占主导地位.     

慢病毒介导稳定表达增强小反刍兽疫病毒复制的山羊Vero/SLAM细胞系的建立

利用Gateway技术和慢病毒表达系统将山羊淋巴细胞信号活化因子SLAM稳定整合在Vero细胞基因组染色体上,建立稳定表达可增强小反刍兽疫病毒(PPRV)复制的SLAM的Vero阳性细胞亚克隆,并验证阳性细胞亚克隆Vero/SLAM表达SLAM的活性、遗传稳定性及其对PPRV复制的增殖效果。分离山羊外周血淋巴细胞,提取基因组Total RNA,一步RT-PCR获得完整ORF的SLAM基因,采用BP及LR位点的基因重组技术,构建入门载体pDONR/SLAM并获得表达骨架pDEST/SLAM,与Packaging Mix pLP1、pLP2及VSV-G共转染293-FT细胞,获得SLAM复制缺陷型慢病毒样粒子,用其感染Vero细胞,杀稻瘟菌素抗性筛选获得阳性细胞克隆,通过靶标基因扩增、间接免疫荧光、激光扫描共聚焦显微技术、Western blot免疫印迹检测技术、致细胞病变效应及Realtime RT-PCR等技术分别验证SLAM基因组整合、转录,SLAM蛋白表达、反应活性以及PPRV在表达SLAM阳性细胞亚克隆上的增殖效果。结果显示:SLAM受体基因被稳定整合在Vero细胞基因组染色体上,该受体蛋白表达于细胞周质,建立的细胞连续传代不丢失,接种病毒后致细胞病变时间由4～7d缩短为3.5d,TCID₅₀·0.1mL^-1由4.25增加为5.67,相对于正常Vero细胞,整合有SLAM的Vero细胞,由于表达了PPRV特异的细胞受体使PPRV对其易感性显著增强。成功建立一株稳定表达靶向增强PPRV复制的Vero/SLAM细胞:该细胞表达的SLAM具有明显增强PPRV复制的功能,不仅可以从细胞模型水平阐明增强PPRV复制的关键靶基因,也为PPRV感染引起宿主细胞的变化以及对机体的致病机制等提供研究工具。     

撒坝猪成纤维细胞系的建立及其生物学特性分析

实验采用撒坝猪耳缘组织块贴壁培养法首次对撒坝猪成纤维细胞进行体外培养,通过原代培养、传代培养、冷冻保存建立了撒坝猪耳缘成纤维细胞系;并对其细胞形态、细胞活率、细胞核型等生物学特性进行分析;还利用透射电镜观察了耳缘组织细胞。结果表明:细胞倍增时间为48 h,生长曲线为"S"型;染色体中正常二倍体染色体(2n=38)所占比例为92.56%;细菌、真菌、病毒和支原体等微生物污染检测均显示为阴性。透射电镜观察显示,成纤维细胞呈长梭型。     

非结构蛋白2在MARC-145细胞中调节繁殖与呼吸综合征病毒的复制：影响基因沉默和过度表达

猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）是对经济有重大影响的猪病。有许多疫苗用于控制该病．但是目前还没有特别成功的疫苗。急需研发一个细胞系，用于大量生产PRRSV疫苗。为了研究Nsp2在MARC-145细胞中对高致病猪繁殖与呼吸综合征病毒（HP—PRRSV）复制的影响，基于RNA干扰理论，构建Nsp2基因的短发夹结构RNA．构建了细胞系表达HP—PRRSV的Nsp2基因。     

香蕉胚性悬浮细胞分化能力及染色体数目变异研究

以野生阿宽蕉(Musa itinerans Cheesman,AA)、抗枯1号(Kangku 1,AAA)、大蕉(Musa Paradidiaca L.,ABB)3个香蕉品种为试材,研究其胚性悬浮细胞在长期继代培养后的分化能力和染色体数目的变异.结果表明,3个香蕉品种ECS在继代培养过程中,胚性悬浮细胞染色体数目均不稳定,染色体数目从6个到116个不等,各ECS均为整倍体和非整倍体组成的混倍体,随继代次数的增加,染色体数目变异的细胞比例随之增多,体细胞胚胎分化能力逐渐下降.野生阿宽蕉、抗枯1号和大蕉的ECS继代培养1.5 a后,细胞变异率分别为96.3％、93.0％和94.0％,而体胚分化能力分别为0.96×103、0.55×103、0.65×103个/mL PCV.试验为进一步研究香蕉ECS染色体变异机理提供新的线索.     

稳定表达T7RNA聚合酶的细胞系的构建及鉴定

设计1对特异性引物扩增痘苗病毒VTF7-3株的T7RNA聚合酶基因并连接真核表达载体,利用Lipo-fectamineTM2000将重组质粒转染BHK-21细胞,G418筛选2周后,转入验证质粒pT7-HN,经Western-blot和间接免疫荧光鉴定后证实获得了1株能稳定表达T7RNA聚合酶的VT7细胞系。构建的VT7细胞系传30代还能够稳定的表达T7RNA聚合酶,为下一步建立有效的鹅源副黏病毒病毒反向遗传操作平台奠定了基础。     

猪胚胎干细胞建系研究进展

胚胎干细胞(ESCs)是遗传工程、发育生物学和疾病模型研究与应用的重要材料。猪ESCs建系研究虽已历经十多年,且已有建立猪类ES细胞系的报道,但由于其培养和鉴定方法基本都是借鉴小鼠和人的ESCs建系,从而使其培养体系存在着极大的不可靠性,至今未有种系嵌合的猪ESCs建系成功的报道。论文对猪ESCs建系的影响因素和存在的问题、传统的培养和鉴定方法在猪ESCs建系中的应用、ESCs多能性分子以及ESCs研究中出现的新理论进行了综述。     

小鼠IgGFc受体(moFcγRⅡ)稳定表达细胞系的建立及鉴定

为建立小鼠IgGFc受体(moFcγRⅡ)稳定表达的哺乳动物细胞系,PCR克隆小鼠moFcγRⅡ片段,构建真核表达载体pcDNAmoFcγRⅡ。转染COS-7细胞后通过G418抗性筛选和连续克隆,获得了在COS-7细胞表面稳定表达FcγRⅡ的真核细胞系。玫瑰花环试验结果显示其阳性率在90%以上。     

家蚕microRNA研究进展(Ⅱ) 重要外文学术期刊发表论文简介

<正>1 Kawaoka Shinpei,Hayashi Nobumitsu,Suzuki Yutaka,Abe Hiroaki,Sugano Sumio,Tomari Yukihide,Shimada Toru,Katsuma Susumu.The Bombyx ovary-derived cell line endogenously expresses PIWI/PIWI-interacting RNAcomplexes.RNA,2009,15(7):1258-1264题目在家蚕卵巢衍生细胞系内源表达PIWI/PIWI相互作用RNA的复合物摘要遗传学研究和大规模测     

不同动物源新城疫病毒感染不同种属细胞的病变观察

用10株不同动物源的新城疫病毒F48E8,La Sota、La Sota-GFP、ZJ1、ZJ1-GFP、JS-4-05-Go、Gx-1-05-Ch,JS-1-07-Os、Js-1-07-Du、JS-1-07-Pi等毒株分剐感染鸡胚、鹅胚、鸭胚成纤维细胞、PK-15、Dulac、FK81、MDCK、Vero、Hela多种不同动物来源的传代细胞系,通过对病毒感染细胞后病变的观察、ZJ-GFP及La Sota-GFP两个病毒感染细胞后细胞中绿色荧光蛋白指示的病变,了解不同的毒株对不同细胞感染性的差别.结果表明,不同毒力、不同动物源的新城疫病毒致不同种属细胞病变的作用不同,产生病变的时间有差异,强毒F48E8等毒株感染细胞后48～72 h可以引起几种禽源成纤维细胞全部裂解,而哺乳动物来源的细胞在60～120 h细胞发生病变,且病变也不如禽源成纤维细胞严重,出现了细胞的圆缩.弱毒株在胰酶处理后感染细胞,72 h以后出现明显细胞病变,引起的哺乳动物细胞病变不明显.受试毒株的动物种属来源与细胞的致病性没有明显相关性.