禽脑脊髓炎研究进展

禽脑脊髓炎(AvianEncephalomyelitis,AE)是由细小RNA病毒科(Picornaviridae)、肠病毒属(Enterovirus)的禽脑脊髓炎病毒(AEvirus,AEV)引起的,以主侵幼鸡中枢神经系统引起非化脓性脑炎为主要病理特征的一种病毒性传染病。本病呈世界性分布,对养鸡业特别是种鸡饲养业造成了极大危害。自1991年内蒙古农业大学分离并建立了AEV-NH937株,系统描述了自然病例和人工感染的成年鸡、雏鸡、鸡胚的病理变化,人工感染后AEV在鸡体内的动态分布,并制备出琼扩抗原和灭活油乳剂疫苗用于临床检测和预防,取得了重要研究成果。分子免疫学研究证明:在抗AEV-NH937株感染中体液免疫发挥重要作用,而在脑组织以CD8 T淋巴细胞(CTL,细胞毒性T细胞)对病毒感染细胞进行细胞毒作用;各淋巴组织的淋巴细胞表面粘附分子在围管性浸润形成期间表达显著或不显著;淋巴细胞和脑组织细胞在病情严重时均凋亡显著;IL-8和MIP-1β趋化因子的变化与围管性浸润的形成同步。     

绵羊肺腺瘤病毒中国NM株gag基因3''''端951 bp段的分子克隆与序列分析

究参照Genebank中已发表的绵羊肺腺瘤病毒的全基因序列,设计合成一对引物,对JSRV中国NM株的gag基因3'端中主要编码核衣壳(NC)蛋白的基因段进行PCR扩增,产物经琼脂糖凝胶电泳分析,呈现一条约951 bp的特异条带,将其回收后克隆人pMD-18T载体中,并进行序列测定.结果表明,与南非代表株(基因序列号NC-001494)的gag基因序列比较,核苷酸同源性为95.4%,推导出的氨基酸同源性为95%.与美国代表株(基因序列号AF105220)的gag基因序列比较,核苷酸同源性为91.3%,氨基酸同源性为91%.这是我国首次报道的绵羊肺腺瘤病毒的gag基因的一段序列,为我国科研工作者进行更深入的研究奠定基础.     

流式细胞术及其在动物病理学研究中的应用

本文简单介绍了流式细胞仪和流式细胞术的主要功能，并结合作者的实际工作，讨论了流式细胞术在动物分子病理学研究中的应用，包括检测免疫细胞的分化抗原、细胞凋亡、自然杀伤细胞活性、吞噬机能等。     

绵羊肺腺瘤kras和其他相关基因突变的检测

为了解绵羊肺腺瘤与基因突变的关系,从绵羊肺腺瘤病毒感染的病羊肺脏组织扩增kras、nras、pik3ca、egfr、p53基因突变频率高的位点所在外显子核苷酸序列,应用PCR-SSCP技术和测序分析检测基因突变。结果显示,nras、pik3ca、egfr基因未检测到突变。2个阳性样品kras基因第1外显子检测出突变,核苷酸突变为点为35G→T,编码的氨基酸位于第12密码子为12G→V。1个阳性样品p53基因第7外显子检测出突变,核苷酸突变位点为825T→C,编码的氨基酸未发生突变,依然是C。为绵羊肺腺瘤病毒(OPAV)分子致病机制的研究提供了参考资料。     

绵羊肺腺瘤病毒衣壳蛋白杂交瘤细胞系的建立

为了制备特异性的抗绵羊肺腺瘤病毒(jaagsiekte sheep retrovirus,JSRV) 内蒙株衣壳蛋白(CA)的单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞系,以原核表达CA蛋白为抗原,免疫BALB/c小鼠,经4次免疫后,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞经杂交瘤技术进行融合,同时以表达蛋白作为包被抗原进行特异性ELISA检测,共筛选到6株阳性杂交瘤细胞株。经过3次亚克隆后,最终得到了5株能稳定分泌抗体的单细胞克隆株;再利用CA真核表达蛋白以间接免疫荧光法,对此5株杂交瘤细胞进行进一步的特异性鉴定。结果显示,有3株具有特异性强荧光反应,也能检测到目的基因的表达产物。本试验获得了3株稳定分泌抗JSRV-NM株CA蛋白McAb的杂交瘤细胞系,为建立检测病原的特异性诊断方法、分析JSRV-NM株CA蛋白的功能及鉴定B细胞抗原表位等奠定基础。     

绵羊肺腺瘤病毒人工感染羊重要病理生理指标的检测

进一步探讨人工感染绵羊肺腺瘤病毒的羊对淋巴细胞亚群、淋巴细胞凋亡、血气指标、肿瘤标志物的影响.对已人工感染JSRV 300d的病羊,进行临床指标测定,每隔30d用流式细胞仪检测外周血中淋巴细胞及其亚群的动态变化以及淋巴细胞凋亡情况.同时,对血液做血气分析、血清酶和肿瘤标志物的检测.结果:SPA攻毒组感染JS-RV - ...     

禽脑脊髓炎病毒内蒙株分子致病机理的研究

本文应用分子克隆技术获得了鸡白细胞介素１β（ Ｉ Ｌ１β）ｃ Ｄ Ｎ Ａ 片段,并对其进行了序列分析,与人及小鼠 Ｉ Ｌ１β基因核酸序列同源性分别为４５％ 和３０％ 。并应用核酸原位杂交、斑点杂交技术检测了正常和禽脑脊髓炎病毒内蒙株（ Ａ Ｅ Ｖ Ｎ Ｈ９３７）感染鸡脑组织中 Ｉ Ｌ１β及其受体（ Ｉ Ｌ１ Ｒ）产生细胞的分布,试图进一步从分子水平阐明禽脑脊髓炎的某些发病机理。