表达K_88K_99双纤毛抗原及K_99纤毛抗原的产肠毒素大肠杆菌的构建

应用转化法:将带有K_99纤毛抗原的重组质粒PHK_99分别转化到具有K_88纤毛抗原的产肠毒素菌株B_6(O_149K_91K_(68)ac)“和不具K_88抗原的产肠毒素菌株(O_14K_85),获得了35株抗氨苄青霉素的转化子。在这35个转化子中,有32个能同时表达K_(88)、K_(99)两种纤毛抗原,有3株能表达K_(99)纤毛抗原。这些转化子仍具有产肠毒素的特性。     

子房注射法获得转基因抗虫棉植株研究

采用子房注射法将构建在植物表达载体ｐＢＩ１２１．１上的Ｂｔ杀虫基因导入棉花品种石远３２１、中植３７２、８２２和辽棉９００１中,获得８株转基因植株。经温室抗虫性鉴定,８株转基因植株对棉铃虫都表现出较好的抗性。同时对这８棵株叶片进行的ＰＣＲ检测结果证明Ｂｔ基因已经整合进植物基因组中。     

中国抗虫棉GFM Cry1A杀虫基因的合成及表达载体构建

根据苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白Cry1A(b)和Cry1A(c)的氨基酸序列,采用植物偏爱密码子,人工合成了全长1824bp的融合GFM Cry1A Bt杀虫基因,并构建了带有多个表达调控元件的该基因高效植物表达戢体pGBI1214AB,以及该基因和修饰豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)基因的双价杀虫基因植物表达载体pGBI1214ABC。经在烟草中验证,这两种表达载体在植物中可高效表达并赋予转基因烟草抗虫性。为我国抗虫棉的研究打下了基础。     

转Bt基因棉花品系对红铃虫、黄萎病的抗性及纤维品质测定结果初报

1　材料和方法1 .1　 6个转 Bt基因品系均为“863”抗虫棉选育项目组育成。将 GFMCry A基因导入泗棉 3号 ,在人工病圃、自然病地、海南、内地不同生态气候类型反复、高压、穿梭系统选择。1 .2　抗红铃虫鉴定。田间自然虫源 ,网室接虫 ,每平方米接 1头 (华中农业大学 )。1 .3　抗黄萎病鉴定。人工黄萎病圃、动态鉴定 (7月1 4日、8月 6日、8月 1 4日、1 1月 30日剖秆 ) ,取相对病情指数 (IR)和抗病效果 (ER)最高值 ,以冀棉1 1指数 50为对照 (华中农业大学 )。1 .4　纤维品质鉴定。霜前花混合取样 ,HVI90 0系列测试 (农业部棉花纤维品质…     

用农杆菌将Bt基因导入水稻愈伤组织的研究

从水稻成熟胚诱导出的愈伤组织经继代培养后可以产生大量的胚性愈伤组织。通过采用农杆菌共培养法转化上述胚性愈伤组织,在附加羧苄青霉素Ｃｂ（５００ｕｇ／ｍＬ）和卡那霉素Ｋｍ（５０ｕｇ／ｍＬ）的选择培养基上进行抗性愈伤组织的筛选,在附加羧苄青霉素Ｃｂ（５０ｕｇ／ｍＬ）和卡那霉素Ｋｍ（２５ｕｇ／ｍＬ）的分化培养基上诱导抗性芽。ＧＵＳ酶活性检测和ＰＣＲ检测结果均为阳性,证明外源目的基因（Ｂｔ）已在寒地水稻抗性愈伤组织中整合并表达。抗性再生植株的ＧＵＳ酶活性及ＰＣＲ检测正在进行中。     

转Bt杀虫蛋白基因的抗棉铃虫棉花新种质

采用花粉管通道途径，将合成的Ｂｔ杀虫蛋白基因导入棉花优良品种泗棉３号和中棉所１２号，获得了转基因植株。组织化学分析表明，ＧＵＳ标记基因已在Ｒ１代植株中得到表达。据对ＧＵＳ阳性转基因棉株的ＰＣＲ分析结果，证明Ｂｔ杀虫蛋白基因出现在Ｒ１代中，并通过自交传递至Ｒ２代。经鉴定，获得了５株对棉铃虫幼虫有高度毒杀作用的Ｒ１代单株Ｓ５４５、Ｓ５９１、Ｓ６３６、Ｓ１００１（泗棉３号＋Ｂｔ／ＧＵＳ）及Ｚｈ１１０９（     

苏云金芽孢杆菌aizawai7-29δ-内毒素基因改造后的杀虫活性研究

 带有改造后的B.t.aizawai7-29杀虫基因的质粒pGWFT18、pGW FA11和pGHtA#-2转入E.coliJM103中，表达后，经生物定性杀虫试验，3′端和5′端全改造的杀虫基因比只改造3′端的杀虫基因具有更好的杀幼虫活性。而且在tac启动子启动下杀虫活性更强。本文首次报道改造后的杀虫基因产物对5龄菜青虫成蛹后羽化的成蝶具有较高的后致死效应作用。     

胆固醇氧化酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

采用PCR方法从来源于蒙古野驴的马红球菌(Rhodococcus equi)4-2G2菌株中分离出编码胆固醇氧化酶的新基因(choEW),其与已知的胆固醇氧化酶基因choE和choB同源性均达99％;按其推断的氨基酸序列与choE和choB相比在485位缺少一个氨基酸,分析认为choEW与choB和choE属于同一基因家族。将choEW插入到原核表达载体pET-His中,构建出重组质粒pETW,并转化Escherichia coli BL21(DE3)plysS获得工程菌。经IPTG诱导后表达出分子量约为56 kD的蛋白质,与核苷酸序列推断的蛋白大小相符。目的蛋白表达量约占细胞总蛋白的11.9％。     

花椰菜花叶病毒（CaMV）35S启动子在转基因棉花中的表达

利用GUS作为报告基因，通过GUS组织化学定位法检测棉花转化愈伤组织、体细胞胚，R0代棉花根、茎、叶、花器官以及正在发育的胚GUS基因表达情况，详细阐述了CaMV 35S启动子在棉花细胞中的表达轮廓。结果表明，在愈伤组织细胞有丝分裂和增殖过程中GUS基因能稳定表达并遗传给后代细胞；在根、茎、叶细胞中检测到GUS表达活性。在