粉纹夜蛾（Trichoplusia ni）卵巢细胞系克隆株Tn5B1—4特性的研究

通过用限稀释法由粉纹夜蛾Ｔｎ５Ｂ１细胞系中分离出多个细胞株，经筛选获得一个理想的克隆株Ｔｎ５Ｂ１－４，该克隆株的特性不同于原细胞系Ｔｎ５Ｂ１。该克隆株的细胞形态一致，细胞群体倍增时间较原细胞株短，而且细胞活力强，特别是在维持粉纹夜蛾单粒包埋核型多角体病毒的复制能力方面高于原细胞系，另外经生物测定看出，在该克隆株中增殖的病毒毒力与虫体内增殖的病毒无显著差异。     

小鼠S180腹水瘤模型的建立及其对机体免疫机能的影响

我国于1978年建立了S180-V细胞系。为了系统研究低能量激光照射的抗肿瘤效应及其机理,在建立小鼠S180腹水瘤模型后,监测了S180腹水瘤对小鼠免疫机能的动态影响过程。1材料与方法1.1试验材料健康雄性BALB/c小鼠70只,体重(20±3)g,黑龙江省中医药大学实验中心提供;S180纤维肉瘤细胞,黑龙江省肿瘤研究所提供。1.2S180腹水瘤模型的建立1.2.1细胞培养取S180传代细胞,应用20?S-RPMI-1640培养液配成5×105个/mL的细胞悬液,37℃温箱培养,60%细胞呈贴壁生长,其余呈悬浮生长。细胞贴壁生长后,若需使用时,应先换成含胰蛋白酶的新鲜培养基(胰…     

猪传染性胃肠炎检测有了新方法

猪传染性胃肠炎是一种高度接触传染的肠道疾病。天津出入境检验检疫局研究发现，用狗直肠瘤细胞系A72株进行血清中和试验，可有效诊断和检疫猪传染性胃肠炎。     

中美科学家首次构建稳定的克隆牛胚胎干细胞系

中美两国科学家日前在世界上首次建立了稳定的克隆牛胚胎干细胞系。这些细胞能够无限复制，并且可以转变为几乎所有牛组织和器官的细胞。     

家蚕和野蚕的细胞系研究进展

从Grace(1962)首次建立天蚕蛾(Antheraea eucalypti)的4个细胞系以来,昆虫组织培养技术获得了极大的发展.离体培养的细胞为研究昆虫病原物、病原物的增殖,以及利用这些病原物作为杀虫剂提供了理想的体系.特别是近年来,人们已意识到化学农药作为杀虫剂对人类产生的有害影响;昆虫对农药的抗性渐增,使农药的发展与更新难以与之抗衡.因此,人们试图利用生物杀虫剂取而代之.其中利用昆虫病毒防治虫害是生物防治中的重要方面之一.     

重组逆转录病毒载体的包装

将3.7kb的LacZ基因片段克隆到含标志基因Neo的逆转录病毒载体，pLXSN与pLNCX的多克隆位点，构建了含有LacZ基因的重组逆转录病毒载体pLLSN和pLNCL.在测定了G418对饥装细胞系PA317的最小致剂量后（最小致死剂量为0.3g/L），通过脂质体Lipofectin与磷酸钙2种介质，分别将2种重组逆转录病毒载体导入包装细胞系PA317进行包装，并以0.3g/L，的G418进行筛选，得到多个G418抗性克隆，经扩大培养，传代，分别得到包装pLLSN与pLNCL的2株阳性细胞，电镜下可见阳性细胞的培养上清中具有逆转录病毒形态特征的成熟病毒粒子，本0研究为运用逆转录病毒载体系统，解决转角因效率低的问题奠定了基础。     

甜菜基因型的筛选及胚性细胞系建立的研究

通过以甜菜未成熟胚为外植体诱导愈伤组织，再将产生的愈伤组织转移至分化培养基（ＭＳＢ培养基附加１．０ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ，３％蔗糖，８％琼脂）进行分化力测试实验，筛选出两个再生能力强的基因型－８９３０，ＧＤ２。通过挑选淡黄色或灰白色，呈颗粒状的愈组织继代培养，经调节培养基的ＩＡＡ和ＮＡＡ的浓度，得到再生能力强的胚性愈伤组织，建立了胚性细胞无性系。     

转基因动物中慢病毒载体包装的优化

慢病毒载体作为基因治疗载体发展起来,现已用于转基因动物制备.本实验用磷酸钙沉淀法将转移质粒(pCCL-hCMV-eGFP)、包装质粒(pCMVΔR8.9)、包膜蛋白质粒(pMDG(VSV-G))三质粒共转染来源于人胚肾细胞系的包装细胞-293T,转染48 h后收集病毒上清,采用6孔板培养感染细胞,荧光显微镜计数EGFP阳性细胞法测定病毒滴度.载体滴度达2×107 TU/ml左右.     

农杆菌介导霞多丽葡萄胚性细胞系遗传转化条件的优化

为建立葡萄(Vitis vinifera)遗传转化技术体系,以霞多丽葡萄(Chardonnay)胚性细胞系为靶组织,采用GUS检测法,对影响农杆菌介导葡萄遗传转化效率的主要因素进行了研究。结果表明,超声波处理时间长短对转化效率有较大影响,在所试的0.5、1、5、10 min 4种不同时间的超声波处理中,以5 min时转化效率较好,平均达到9.11个蓝色斑点;AS浓度对转化效率有明显差异,当浓度为50μmol/L时,平均蓝色斑点数为8.89个,100μmol/L时,达到12.44个;DTT质量浓度对转化效率也有较大影响,在所试的3种质量浓度(1,2,3 mg/L)中,以3 mg/L为最佳,有16.67个蓝色斑点。通过GUS瞬时表达检测,确立了农杆菌介导葡萄胚性细胞系遗传转化的几个最适影响因素,从而为葡萄遗传转化技术体系的建立奠定了基础。     

稳定表达猪圆环病毒2型Cap蛋白的CHO-K1细胞系的建立及免疫原性分析

建立高表达PCV2-Cap蛋白的CHO-K1悬浮稳转细胞系,鉴定蛋白的免疫原性,为开发新型且有效防治猪圆环病毒的亚单位疫苗奠定基础。构建重组质粒pEE12.4-PCV2-Cap,转染CHO-K1细胞,通过加压筛选,有限稀释,细胞悬浮驯化及Western blot检测得到高表达Cap蛋白的悬浮稳转单克隆细胞株,并对该细胞株进行发酵,纯化得到的目的蛋白,通过小鼠免疫验证其免疫原性。结果表明PCV2-Cap蛋白能够在CHO-K1细胞中正确表达;发酵过程中活细胞密度高达6×10~6个·mL^-1,细胞活力在80%以上,PCV2-Cap蛋白表达量约为370 mg·L^-1;利用间接ELISA检测小鼠免疫后血清中的抗体水平,证明了利用CHO-K1细胞生产的Cap蛋白具备良好的免疫原性。本研究成功构建了表达PCV2-Cap蛋白的CHO-K1悬浮稳转细胞系,并进一步对目的蛋白进行免疫原性分析,为猪圆环病毒亚单位疫苗的开发打下扎实的基础。