水貂阿留申病毒VP2基因的原核表达及初步应用

将水貂阿留申病毒ADV-G株VP2基因中主要抗原表位区的两个片段,分别克隆至原核表达载体pET-28a(+)的多克隆位点中,鉴定后得到重组质粒pET-VP2a和pET-VP2b,将重组质粒转化到宿主菌BL21中,用IPTG分别以不同浓度,不同诱导时间进行诱导表达,采集样品做SDS-PAGE、Western-blot分析,并以此蛋白作为包被抗原进行ELISA检测。结果发现以终浓度为1mmol/L的IPTG进行诱导,4小时后表达可达到高峰,其大小分别约为23kD和28kD, 该蛋白与ADV阳性血清能发生特异性反应。将此表达产物应用Ni-NTA His-Bind纯化系统进行纯化,其纯度可达到91%,纯化后的蛋白以60μg/孔包被96孔板,检测不同地区水貂血清,同时以对流免疫电泳法（CIEP）为对照,结果发现二者的符合率高达93 %,而应用该蛋白进行检测其反应更为安全,背景低,制备简单,这为今后应用该蛋白作诊断抗原检测水貂阿留申病奠定了基础。     

人参果的药理活性研究进展

综述了人参果的药理活性研究进展。     

水貂、狐狸和貉源犬瘟热病毒F蛋白信号肽区基因克隆及遗传变异分析

为了解近年来犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)在中国毛皮动物主要养殖区的流行情况及遗传变异情况,本试验于2012-2014年从山东、河北、辽宁收集疑似犬瘟热的水貂、狐狸和貉病料,经犬瘟热抗原检测试纸条检测和RT-PCR检测为阳性后,克隆测序了15株CDV F蛋白信号区(Fsp)基因序列.序列分析结果显示,15株CDV野毒株Fsp基因核苷酸序列和氨基酸序列的相似性均为93.6%~100.0%,与疫苗株相似性为80.7%~81.7%.基因系统进化分析结果显示,15株野毒株均属于中国当前流行的Asia-1基因型.氨基酸序列比对分析结果显示,Fsp蛋白在氨基酸3-14、16-37、47-67位等处存在高变异.通过对当前流行CDV野毒株Fsp基因序列分析,结果表明该Fsp基因区具有较高的变异率,可作为CDV基因分型的依据,同时本试验结果为毛皮动物犬瘟热的防控提供了参考依据.     

水貂阿留申病基因工程诊断抗原的制备

本研究旨在建立一种生产水貂阿留申病(Aleutian disease,AD)诊断抗原的新方法。试验提取水貂阿留申病毒(Aleutian disease virus,ADV)的基因组,PCR扩增ADV核衣壳蛋白VP2基因,构建重组表达质粒Bacmid-VP2,脂质体介导其转染昆虫细胞Sf9获得重组杆状病毒AcMVPV-VP2。电镜下观察表达的VP2蛋白,Western blotting检测目的蛋白的反应原性。以传统接毒方法生产的AD诊断抗原作对照,通过对流免疫电泳试验检测表达蛋白的生物学活性。结果表明,表达的重组VP2蛋白在电镜下组装成病毒样颗粒且能与ADV阳性血清发生反应。与商业诊断抗原相比,重组抗原诊断AD的阴阳性的符合率为100%。该方法可成为生产AD诊断抗原的替代方法。     

犬瘟热病毒强毒株HBF-1株的培育及致病性研究

为研究从北极狐病料样品中分离的一株强毒的致病性,本实验采用病例复制、RT-PCR检测、间接免疫荧光检测(IFA)和电镜观察等方法证实分离得到犬瘟热病毒(CDV),并命名为HBF-1。对该分离株H基因的核苷酸序列比对显示,HBF-1与疫苗株的同源性为91.0%～91.5%,与国内外分离株的同源性为93.5%～99.9%。病毒传代培育试验结果显示HBF-1已适应在北极狐、貉、水貂和犬体内繁殖,具有较广的感染范围。但各种动物的临床症状和剖检病理变化存在不同程度的差异,表明HBF-1分离株对北极狐、貉、水貂和犬的致病力不同;毒力测定结果显示其半数感染量分别为102.46 ID50/mL、102.95 ID50/mL、102.46 ID50/mL和102.58 ID50/mL,表明HBF-1为一株CDV强毒株,可以在不同的经济动物间进行水平传播。本研究结果为开发新的CDV疫苗提供了实验基础。     

6035纳米佐剂对猪支原体肺炎活疫苗免疫效果的的影响

猪支原体肺炎(MPS),又称猪地方流行性肺炎或猪喘气病,是猪的一种呼吸道飞沫性传染病,各猪场对猪支原体肺炎的防治有多种方式,主要是通过改善饲养条件来预防和通过注射抗生素来治疗.多数抗生素可以抑制该病的病原,但是难以根除,使用疫苗加强预防是一种可靠而有效的途径.     

Ⅱ型犬腺病毒C株E1、E3区克隆测序及E3区标记载体瞬时表达

设计4对引物，对犬Ⅱ型腺病毒2C（CAV-2C）株E1、E3区进行了扩增，将片段进行T克隆、测序，并构建了E3区缺失、标记EGFP的转移载体，在MDCK和293-T细胞上成功表达，但在MDCK细胞中的转染效率较低。本研究为犬腺病毒活病毒载体构建的研究提供基础。     

野生动物收容救助问题及对策

该文通过对野生动物收容救助现存问题的梳理分析,指出野生动物收容救助存在基础研究薄弱,收容救护机构少,缺乏相应的专业人员和设备,缺乏统一的救助标准,公众缺乏基本的救助方法和手段等问题.针对这些现存的问题,提出了加大基础研究科研投入;增设救护机构,创新设备工具;加强培训,构建专业化人才队伍;统一标准,科学施救等相对应的对策...     

狐、貉源犬瘟热病毒H和F基因的克隆与序列分析

为研究我国圈养狐、貉流行犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)的基因分型与遗传变异情况,通过RT - PCR方法扩增与测序分析了2009年来源于山东省和河北省病料中的CDVH与F基因,并分别与GenBank CDV野毒株和疫苗株的基因序列比对,构建了核苷酸序列的系统发生树.H基因系统发生分析显示,6株毒株归属为Asia -1型.H蛋白氨基酸序列比较表明,除HeB(09)3株有8个潜在N-连接的糖基化位点外,其余毒株N-连接的糖基化位点均为9个.以往的研究结果显示,日本和中国台湾分离株的潜在N-连接糖基化位点为8～9个.6株野毒F蛋白编码区氨基酸的同源性为98.0％～99.5％,与CDV3(登录号EU726268)和Onderstepoort(登录号AF305419)疫苗株的同源性为89.1％～90.6％,F蛋白的前导区(1～ 135位氨基酸)与疫苗株相比的同源性为62.2％～66.7％;野毒株F蛋白氨基酸在108～ 110处比疫苗株CDV3多1个潜在N-连接的糖基化位点,HeB(09)3的F蛋白还在366～369位多1个潜在的N-连接的糖基化位点.目前在山东省和河北省2地狐狸和貉中流行的犬瘟热野毒株为Asia -1型,HeB(09)3株H蛋白和F蛋白在N-连接糖基化方面与其他5株野毒株有明显的不同.     

藏药雪莲中四种矿质元素含量的测定与分析

对藏药雪莲(Saussurea involucrata)试样进行灰化处理,并采用纸色谱对试样中矿质元素Co、Ni、Cu和Fe进行分离,采用紫外-可见分光光度法测定其含量,此方法具有操作简便,准确及可靠等优点,符合分析的技术要求。