一种基于Ⅱ型鲤疱疹病毒衣壳蛋白72的免疫学检测方法

Ⅱ型鲤疱疹病毒(cyprinid herpesvirus 2,Cy HV-2)是引起养殖异育银鲫(Carassius auratus gibelio)造血器官坏死症的致病病原。在临床筛查中基于病毒核酸的PCR和real time PCR技术已经建立,但是稳定性更强的免疫学诊断技术国内外尚无报道。本研究目的是利用Cy HV-2编码的ORF72基因(Gen Bank登录号:AFJ20502.1)所编码的衣壳蛋白作为捕获抗原,通过识别感染病毒的鱼体中的相应抗体,从而对样本进行临床免疫学检测。首先采用PCR方法从纯化的Cy HV-2基因组中扩增ORF72基因,并把该基因克隆至原核表达载体PGEX-4T-3,并转化到大肠杆菌中诱导表达,诱导表达的产物通过SDS-PAGE进行鉴定,对表达的重组蛋白进行纯化。用已纯化的72重组蛋白对小鼠进行免疫,制得72重组蛋白的抗体。Western blot检测表明所制备的多克隆抗体既能识别原核表达的重组蛋白,也可以识别Cy HV-2病毒粒子上的衣壳蛋白72。在上述基础上建立了基于Western blot技术的Cy HV-2抗体检测技术:用纯化的72重组蛋白作为检测抗原,鲫鱼血清用作一抗,兔抗鲫Ig M多克隆抗体作为二抗,酶标羊抗兔作为三抗鉴定鲫鱼是否存在Cy HV-2特异性抗体。在对急性感染期的临床样本检测中,本方法能在所有样本中检测出ORF72特异性抗体存在,表明72重组蛋白作为相应抗体捕获原可以用于确诊鲫鱼是否感染Cy HV-2。本研究建立的实验室免疫学检测方法为商品化免疫学检测技术的开发奠定了基础,对Cy HV-2的检验检疫具有一定的临床应用价值。     

团头鲂对营养需求的研究进展

综述了团头鲂对蛋白质和氨基酸、脂肪和脂肪酸、碳水化合物、维生素、矿物质的需要量,及其在配合饲料中的适宜含量、影响团头鲂营养需求的因素,展望了其研究前景。     

饲料中添加植酸酶对大口黑鲈生长和消化酶活性的影响

用添加不同水平植酸酶（0、500、1 000、1 500 U/kg）的饲料喂养初始体重为23 g左右的大口黑鲈Micropterus salmoides56 d,研究植酸酶对大口黑鲈生长和消化酶活性的影响。结果显示：饲料中添加1 000U/kg植酸酶能显著促进大口黑鲈的生长,降低饲料系数（P〈0.05）。1 000、1 500 U/kg组大口黑鲈胃蛋白酶活性较对照组分别提高了28.14%和20.09%,差异显著（P〈0.05）;各处理组鱼幽门盲囊中蛋白酶活力与对照组相比差异显著（P〈0.05）,而肠道中蛋白酶活性差异不显著（P〉0.05）。与对照组相比,各处理组鱼肝胰脏和肠淀粉酶活性有所提高,但差异不显著（P〉0.05）;1 000、1 500 U/kg组大口黑鲈的胃淀粉酶活性有所降低,但差异不显著（P〉0.05）。     

酵母培养物对异育银鲫生长、血液生化及免疫的影响

以异育银鲫为研究对象,在日粮中添加酵母培养物,探讨酵母培养物对异育银鲫生长、血清生化指标以及免疫的影响.将540尾异育银鲫随机分成3组、每组3个重复,1组为对照组,投喂基础日粮,另外2组为试验组,基础日粮中分别添加0.1%、0.2%酵母培养物,连续投喂60 d后,测定鱼的生长、饵料系数、肝体比、血清蛋白、溶菌酶活性、一氧化氮浓度、丙二醛含量和超氧化物歧化酶活性等.结果表明,与对照组相比,在30 d时,0.1%酵母培养物组、0.2%酵母培养物组对鱼体增重率、血清蛋白浓度、超氧化物歧化酶活性、丙二醛浓度等没有显著影响;0.1%酵母培养物组显著提高了血液一氧化氮含量;0.2%酵母培养物组显著提高了血液溶菌酶活性;在60 d时,0.1%酵母培养物组、0.2%酵母培养物组显著提高了增重率,降低了饵料系数和丙二醛浓度,而对血清一氧化氮含量、溶菌酶活性、超氧化物歧化酶活性等没有显著影响;0.1%酵母培养物组显著提高了内脏比、肝体比、血清蛋白浓度.因此,长期在日粮中添加0.1%~0.2%酵母培养物能促进鱼体的生长.     

几种氨基酸对日本鳗鲡摄食、消化和生长的影响

以初始体重为(6.48±0.23)g的日本鳗鲡Anguilla japonicus为试验对象,探讨4种单体氨基酸L-脯氨酸(L-Pro)、L-组氨酸(L-His)、L-丙氨酸(L-Ala)、L-甘氨酸(L-Gly)(饲料中分别添加质量分数为0%、0.1%、0.5%、1.0%)对日本鳗鲡摄食率、生长和消化率的影响.经40 d的饲养,结果表明:饲料中添加0.1%的L-His时,鳗鲡的摄食率、特定生长率和干物质表观消化率分别为4.10%、2.07 %/d、85.88%,显著高于对照组(1.86%、0.70 %/d、81.63%,P<0.05);饲料中添加0.5%的L-Pro时,日本鳗鲡的摄食率、特定生长率和干物质表观消化率分别为3.74%、1.98 %/d、85.34%,显著高于对照组(P<0.05);饲料中添加0.5%的L-Ala时,鳗鲡的摄食率、特定生长率和干物质表观消化率分别为3.43%、1.92 %/d、84.91%,显著高于对照组(P<0.05);饲料中添加1.0%的L-Gly时,鳗鲡的摄食率、特定生长率和干物质表观消化率分别为3.41%、1.90 %/d、84.32%,显著高于对照组(P<0.05).4种单体氨基酸对日本鳗鲡摄食生长效果依次为L-His>L-Pro>L-Ala>L-Gly.     

维生素E在水产养殖中的应用

在养殖业中维生素Ｅ作为畜禽饲料添加剂应用取得了很好的效果 ,在水产养殖业中也有较为广泛的应用。本文对维生素Ｅ在水产养殖业中的应用做一概述。1　维生素Ｅ的理化性质维生素Ｅ又名生育酚 ,是具有α -生育酚 (简称α-Ｔ)生物活性的生育酚和生育三烯酚的总称。目前已从植物性原料中分离到至少 8种具有维生素Ｅ活性的化合物 ,它们分别是生育酚 :α -生育酚 (α-Ｔ)、β -生育酚 ( β -Ｔ)、γ -生育酚 (γ -Ｔ)和δ-生育酚 (δ -Ｔ) ;生育三烯酚 :α -生育三烯酚 (α-Ｔ - 3)、β -生育三烯酚 ( β -Ｔ - 3)、γ -生育三烯酚 (γ -Ｔ - 3)…     

抗生素对异育银鲫生产性能的影响

将450尾异育银鲫随机分成3组,每组设3个重复,分别投喂基础日粮(1组)、基础日粮中添加黄霉素预混剂125mg/kg(2组)及基础日粮中添加吉他霉素预混剂100mg/kg(3组),饲养56d。结果表明,与对照组相比,2组和3组增重率比对照组分别显著提高14.77%和19.57%;饵料系数分别显著了降低36.98%和41.15%。与对照组相比,2组和3组生长比率比对照组显著提高了46.61%和55.38%;2组肝体比显著降低了14.86%。各试验组肥满度及病死率与对照组比差异均不显著。     

2种饲料投喂下草鱼肌肉品质的比较分析

本试验以皇竹草粉饲料为试验组,以商品配合饲料为对照组,投喂平均体重为(300.00±10.00)g的草鱼2个月,对其生长性能、形体指标以及肌肉pH、系水力、质构特性、常规营养成分含量、微量元素含量、氨基酸组成和营养价值进行比较分析。结果表明:试验组草鱼的内脏重、肝脏重、腹腔脂肪重、脏体指数、肝体指数及腹脂指数均极显著低于对照组(P0.01),肥满度显著低于对照组(P0.05),而空壳率极显著高于对照组(P0.01)。试验组草鱼肌肉的弹性、咀嚼性、胶着性和硬度均极显著高于对照组(P0.01),黏聚性显著高于对照组(P0.05)。试验组草鱼肌肉pH、滴水损失、失水率和冷冻渗出率均极显著低于对照组(P0.01)。试验组草鱼肌肉的粗脂肪含量显著低于对照组(P0.05),铁(Fe)含量极显著高于对照组(P0.01)。试验组和对照组草鱼肌肉中均含有16种氨基酸,氨基酸总量分别为17.43%和17.23%。试验组和对照组草鱼肌肉中各种氨基酸含量均无显著差异(P0.05),必需氨基酸指数分别为84.66和84.94。由此得出,与商品配合饲料相比,投喂皇竹草粉饲料可改善草鱼的肌肉品质。     

2型鲤疱疹病毒双重PCR快速检测方法的建立及应用

为建立快速检测2型鲤疱疹病毒(CyHV-2)的方法,本研究针对CyHV-2三联体蛋白基因的两段保守序列设计特异性引物,建立了CyHV-2双重PCR检测方法,并对反应条件进行优化,扩增的目的片段分别为218 bp和369 bp。特异性试验显示仅CyHV-2扩增出特异性片段,其它病毒均呈阴性;灵敏性试验表明该方法最低可以检测到3×102拷贝/μL的病毒量。对2012年~2013年采集自江苏、湖北、江西、宁夏等地的鲫鱼(Carassius auratus)样品进行检测,结果表明,该方法检测样品的阳性率为87%。以上结果表明建立的双重PCR方法具有良好的特异性和敏感性,可以用于CyHV-2的快速检测和病原流行病学调查。     

摄食对大口黑鲈消化器官蛋白酶和淀粉酶活力的影响

试验从摄食方面研究食物对大口黑鲈主要消化器官蛋白酶和淀粉酶分泌的影响,对摄食后主要消化器官蛋白酶和淀粉酶活力进行了研究。结果表明,摄食对蛋白酶活力影响:摄食后1h胃蛋白酶降低,至摄食后4 h升高到平稳水平(P>0.05);幽门盲囊蛋白酶活力摄食后开始降低,而从摄食后4 h开始升高(P<0.05);肠道蛋白酶活力摄食后1 h出现升高,摄食后4 h降到最低,10 h又升高到较大活力。摄食对淀粉酶活力影响:胃淀粉酶活力摄食后开始降低,摄食后4h又升高到最大(P<0.05);肠道淀粉酶活力摄食后开始升高,至摄食后4 h达到稳定(P>0.05);幽门盲囊淀粉酶活力在摄食后开始降低,到摄食后4h升高到较高活力,并保持到摄食后10 h;摄食后1 h肝脏淀粉酶活力便保持在较高水平(P>0.05)。