野生华鲮的人工驯养技术研究

<正>华鲮[Sinilabeo rendahli(Kimura)]又名青龙棒、青鳙、野鲮鱼,属鲤形目,野鲮亚科,华鲮属。我国分布于长江上游的干支流中,贵州省主要分布于乌江水系,赤水河水系,为我国南方地区的重要经济鱼类之一。近年来,由于生态环境的日益恶化,加上市场对名优鱼类的需求造成捕捞量增加,导致华鲮的     

3种野鲮亚科鱼类线粒体细胞色素b基因序列分析及种质鉴定

鲮、麦瑞加拉鲮和露丝塔野鲮隶属鲤形目（Cypriniformes）鲤科（Cyprinidae）中的野鲮亚科（Labeoninae）.这三种鱼类种苗外形相似,仅凭形态上的差别难以区分,而在实际生产、种苗引进及苗种放流时需要进行严格的鉴定.本研究利用PCR-RFLP技术对鲮、麦瑞加拉鲮和露丝塔野鲮进行种苗鉴定的分析,并利用三种鱼类cyt b基因序列的差异进行亲缘关系分析.     

濒危鱼类暗色唇鲮的肌肉营养品质评价

采用最新国家标准规定的方法测定了野生暗色唇鲮(Semilabeo obscurus)肌肉的一般营养成分、氨基酸和脂肪酸含量,并评价了其肌肉营养品质。结果显示:暗色唇鲮的肌肉中水分、蛋白质、脂肪和灰分的平均含量分别为77.95%、19.40%、0.895%和1.49%;从暗色唇鲮的肌肉中共检出17种氨基酸,氨基酸总量为81.71%,其中必需氨基酸7种(总含量28.87%),半必需氨基酸2种(总含量6.44%),非必需氨基酸8种(总含量46.40%),鲜味氨基酸6种(总含量34. 91%),支链氨基酸3种(总含量12. 67%),芳香族氨基酸2种(总含量5.46%);其必需氨基酸含量组成基本符合FAO/WTO的理想蛋白质推荐值。依据氨基酸评分和化学评分结果,暗色唇鲮肌肉的第一限制氨基酸为蛋氨酸+胱氨酸,第二限制氨基酸为缬氨酸。其必需氨基酸指数为73.71。     

鲮生长激素基因cDNA的分子克隆和序列分析

根据生长激素(growth hormone,GH)基因的保守性序列设计1对引物,利用RT—PCR技术从鲮(Cirrhina molitorella)脑垂体组织中克隆出经生长激素成熟肽cDNA片段,将纯化的DNA片段克隆到pUCm—T载体上。克隆的鲮GH cDNA开放阅读框全长567bp,编码由188氨基酸残基组成的生长激素成熟肽。序列分析结果表明,鲮GH成熟肽氨基酸序列与另2种鲮—印鲮(Cirrhina mrigal)和南亚野鲮(Labeo rohita)的成熟肽氨基酸序列同源性分别为87％和83％,与鲤的成熟肽氨基酸序列同源性为96％,并对9个科的17种鱼进行了分子系统进化树分析,结果与根据传统的形态学和生化特征分类进化地位基本一致。本研究所克隆的基因序列和推测的蛋白质序列已登录入GeoBank、EMBL和DDBJ基因库,序列号分别为AF458105和从AAL151107．1。     

鲮β-肌动蛋白基因的分子克隆及其作为分子内标的可靠性分析

β-actin是actin家族的一员，在维持细胞结构、细胞内运动和细胞分裂等细胞生理活动方面发挥着重要的作用。克隆的鲮（Cirrhinus molitorella）β-aetin基因的cDNA全长1 804bp，开放阅读框长1 128bp，编码375个氨基酸，5’和3’末端非翻译区域（UTR）分别为94bp和582bp。RT-PCR结果表明，β-actin在未经LPS刺激的和经LPS刺激的鲮心脏、肾脏、肌肉、肝脏、脾脏、肠、脑和皮肤等8种组织中广谱表达，表达水平没有明显差异，可以作为基因表达调控研究的分子内标。鲮与其他鱼类β-actin基因编码区核苷酸序列同源性在85.9％～99.6％。分子系统进化树分析表明，可将鱼类分成鲤形目，鲈形目，鲑形目和合鳃目4大支，与传统分类一致，β-actin基因核苷酸序列是研究分子进化的一个很好的分子标记。     

云南盘鲮属Discolabeo鱼类－新种

本文描记采于云南的盘鲮属鱼类－新种，以采集河流名称命名为五洛河盘鲮，新种ＤｉｓｃｏｌａｂｅｏｗｕｌｕｏｈｅｅｎｓｉｓＬｉ，ＬｕｅｔＭａｏ，ｓｐ，ｎｏｖ，新种与该属唯一种伍氏盘鲮的区别在于椎骨多（４＋３６－３９），后者４＋３２－３３；外侧鳃耙１２－１３，后者缺如；鳔短，后者鳔长。     

鲮微卫星引物的鉴定及其适用性检验

利用4种鲤科鱼类的14对微卫星引物对西江流域一批野生鲮进行PCR扩增。将各扩增条带进行克隆测序,发现引物MFW1、MFW2、MFW15、MFW17、Cc7、Cc11、Bgon22扩增出的产物含有微卫星重复序列。进一步对鲮的微卫星位点MFW1、MFW2、Cc7重新设计引物,并将其分别命名为Cm1、Cm2、Cm3,新引物对鲮的扩增特异性增强。采用引物Cm1、Cm2、Cm3、Cc11、MFW15、MFW17、Bgon22对西江流域一批野生鲮进行引物适用性检验。结果表明,除引物MFW15、Cc11无多态性外,其余5对引物(Cm1、Cm2、Cm3、MFW17、Bgon22)在取样群体中扩增图谱带型丰富,随引物不同,各标记在群体中检测到的等位基因数为2到16个。各微卫星座位的期望杂合度(He)及观察杂合度(Ho)范围分别为0~0.9038和0~1,平均分别为0.6881(0.1819SD)和0.7772(0.1931SD)。座位连锁分析显示Cm1与Bgon22之间存在显著性水平连锁关系(P<0.05),其余各座位之间未检测到明显的连锁关系(P>0.05)。研究群体的遗传多样性指数平均为0.6823,多态性水平相对较高。以上结果表明,筛选获得的7个微卫星座位适于对鲮进行遗传多样性分析。     

华鲮人工繁殖研究

对华鲮天然捕捞成熟个体及池塘培育成熟个体的人工繁殖研究,探明了华鲮人工繁殖及池塘驯养培育亲鱼的方法与规律,获得了一定的研究数据。2002~2005年共获苗570.4万尾,正常受精率在85%以上,孵化率在75%以上。混合使用DOM、LRH-A、HCG 3种催产剂能较好地达到催产效果。雌鱼催产剂量LRH-A 8~15μg/kg HCG 800~1 200 IU/kg DOM 3~5 mg/kg,雄鱼剂量减半或注射1/3。雌雄比控制在1~3∶1。     

鲮生长激素的重组表达及其多克隆抗体的制备

IPTG诱导含有鲮（Cirrhinus molitorella）生长激素基因（growth hormone,GH）的工程菌M15（pQE30-GH）重组表达鲮生长激素蛋白。SDS-PAGE凝胶电泳结果表明,在24.5kDa处有1条重组表达鲮生长激素条带,经分离纯化、复性和浓缩后得到有活性的重组鲮生长激素蛋白。以复性浓缩后的重组鲮生长激素蛋白为抗原,采用改进的方法对新西兰大白兔进行皮下多点免疫注射,获得兔抗鲮生长激素多克隆抗体。经ELISA检测该免疫血清的滴度为12800。以该多抗为一抗,Western blotting可以检测到10ng的抗原量;并且在鲮垂体组织提取液中和血清中检测到一种能与该血清作用的大小约为21.5kDa的蛋白条带。说明该试验所制备的兔抗鲮生长激素多克隆抗体具有较好的免疫活性。     

麦鲮和赤眼鳟作为鳜鱼养殖配套饵料鱼适宜性的评价

从生物学的角度比较和评价麦鲮和赤眼鳟作为鳜鱼养殖配套饵料鱼的适宜性,探讨以赤眼鳟代替麦鲮养殖鳜鱼的可行性。结果表明,麦鲮和赤眼鳟食性相近,同属于低龄成熟的多次产卵类型鱼类,对盐度的适应性强,比鳜鱼具有更强的耐低氧能力;一年能进行三次人工繁殖,繁殖力强,易补充亲鱼,繁殖方式和设施与四大家鱼、鳜鱼相似,人工繁殖的效率极高。采用一次放足、分批捕捞的高密度养殖方式,群体产量高,养殖成本低。因此,两种鱼都具有优秀的饵料鱼属性。但在长江流域,赤眼鳟能弥补麦鲮不能自然越冬的缺陷,繁殖期和生长期更长,养殖产量更高,以赤眼鳟代替麦鲮养殖鳜鱼是可行的。这为鳜鱼的养殖,特别是反季节养殖开辟了新的饵料鱼途径,为改进鳜鱼的养殖方式提供了参考依据。