传染性法氏囊病病毒VP2基因真核细胞表达载体的构建及免疫应用研究

应用DNA重组技术将含有IBDV保护性抗原VP2质粒,以EcoRI、xhoI酶切,将酶切得到的VP2基因移入到载体poDNA3CMV启动子下游,得到含有IBDV VP2基因的真核表达载体poD-VP2基因疫苗.pcDVP2体外转染细胞能正确表达目的蛋白.免疫雏鸡后20 d,在体内可检测到特异性抗体.     

患隐性乳房炎的奶牛乳汁pH变化与体细胞关系的研究

采集新疆垦区奶牛乳样若干份(604份)，利用奶牛隐性乳房炎诊断液、光学显微镜，以及pH211酸度计测定乳汁的pH与体细胞的含量，确定奶牛隐性乳房炎与牛乳pH的变化关系。结果表明，牛乳pH的变化与体细胞和炎性细胞的含量呈正相关，即泌乳奶牛乳汁的正常pH在6．4～6．6之间；体细胞在20万～50万个／ml区间时，奶牛乳汁pH在6．6～6．8之间；体细胞在50万～150万个／ml区间时，奶牛乳汁pH在6．8～7．0之间；体细胞在150万～500万个／ml区间时，奶牛乳汁pH在7．0～7．2之间；体细胞大于500万个／ml时，奶牛乳汁pH在7．2以上。     

转基因植物生产疫苗的研究现状及前景

随着转基因植物技术的日益成熟，植物体正成为具有重要经济价值的药用蛋白、抗体和疫苗的生物反应器，利用转基因植物生产，这种“分子药厂”的潜势在几年以前就已显露出来，并且已有几种用此系统生产的蛋白质正在进行临床试验。     

南疆仔猪首次暴发附红细胞体病

附红细胞体(Eperythrozoon,附红体)是人畜共患附红细胞体病(Eperythrozoonosis,附红细胞体病)的病原体.它寄生在家畜血液里、附着在红细胞表面和游离在血浆中引起家畜的附红细胞体病.在急性发病时出现黄疸、贫血、发热、腹部皮下和四肢末梢发紫,且多为隐性感染.     

猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白纳米抗体的筛选及其对病毒复制的抑制效应

为获得猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)GP5蛋白的特异性纳米抗体,并探究其对病毒复制的抑制效应。使用原核表达系统将PRRSV-GP5蛋白大量表达后经镍柱亲和层析法纯化,使用所获的重组GP5蛋白免疫羊驼,并于第0、14、28、42天时采血,检测羊驼体内抗体效价后分离全血淋巴细胞,提取细胞总RNA,反转录后使用巢式PCR扩增出重链抗体可变区(VHH)片段,并与pCANTAB-5E载体相连后转化入TG1感受态细胞,利用噬菌体展示技术构建GP5-VHH噬菌体抗体展示文库。经连续三轮特异性噬菌体的筛选与富集后,淘选出与PRRSV-GP5蛋白高结合力的纳米抗体,通过间接ELISA方法鉴定其反应原性,后将所获的纳米抗体基因克隆至真核表达载体pcDNA3.1(-)中,利用Lipofectamine3000转染至Marc-145细胞内,与PRRSV分别共孵育0、24、36、48、60、72 h,以探究所筛针对PRRSV-GP5蛋白的纳米抗体于胞内对病毒复制与转录产生的影响。结果表明,成功对PRR...     

布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统蛋白BMEI0742基因的原核表达及功能分析

为构建布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统蛋白BMEI0742基因的原核表达载体,并进行表达、鉴定。从羊种布鲁氏菌(Brucella melitensis)16M株的基因组中克隆BMEI0742基因片段,亚克隆到pMD19-T载体中并测序,克隆至表达载体pET-28a,构建重组质粒pET-28a-BMEI0742利用大肠杆菌进行表达,并进行Western-Blot检测,对该蛋白功能进行生物信息学分析。成功构建了pET-28a-BMEI0742原核表达载体,SDS-PAGE检测结果显示,重组蛋白的分子量约是50 ku,BMEI0742蛋白可与布鲁氏菌阳性血清发生特异性反应,表明其具有良好的反应原性。生物信息学分析显示,该蛋白无跨膜区结构,不存在信号肽,二级结构以α-螺旋为主并利用Phyre2服务器成功构建了该蛋白的三维模型。本研究成功表达了布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统蛋白BMEI0742基因,并成功获得了BMEI0742蛋白,该蛋白具有与布鲁氏菌自身蛋白相同的抗原性,为布鲁氏菌翻译延伸因子Tu,为进一步研究其免疫性和保护性以及在布鲁氏菌的致病机制奠定基础。     

羊种布鲁氏菌M5-90疫苗株铁应答调控因子irr和rirA基因缺失株的构建与鉴定

为研究铁调控因子irr和rirA在羊种布鲁氏菌（Brucella melitensis）感染过程中的作用,本研究通过卡那替换的方法构建两个缺失株M5-90Δirr和M5-90ΔrirA,分别将亲本株和缺失株在相同营养条件下培养36 h,观察其振荡培养时的生长变化趋势。分别将1×10⁸ CFU M5-90Δirr、M5-90ΔrirA和M5-90接种到含1.5 mol/L NaCl、pH 2.5、pH 11.5、10 mmol/L H₂O₂的1 mL布鲁氏菌液体培养基,比较缺失株和亲本株在不同条件下的生长特性;分别以1×10⁶ CFU M5-90Δirr、M5-90ΔrirA和M5-90感染小鼠巨噬细胞RAW264.7检测缺失株的黏附、侵袭和胞内生存能力。结果显示,在相同体外培养条件下缺失株M5-90Δirr和M5-90ΔrirA生长速度明显低于亲本株;M5-90Δirr、M5-90ΔrirA在高盐、强酸和强碱环境下生存率均显著或极显著低于亲本株（P<0.05;P<0.01）,在H₂O₂条件下这两个缺失株的生存率却显著高于亲本株（P<0.05）。与亲本株相比,缺失株在小鼠巨噬细胞RAW264.7内的侵袭和黏附能力均减弱,在感染后45 min缺失株M5-90Δirr和M5-90ΔrirA的黏附和侵袭能力均极显著低于亲本株（P<0.01）,但在感染后24 h,这两个缺失株在细胞内繁殖能力与亲本株相比有所增强。本研究报道了irr和rirA基因不仅调控了羊种布鲁氏菌的生长,同时对细菌黏附和侵袭能力也产生一定的影响,M5-90Δirr和M5-90ΔrirA是两株具有潜力的布鲁氏菌候选疫苗株。     

布鲁氏菌分泌蛋白BspJ多克隆抗体的制备

为获得一定纯度及浓度的布鲁氏菌分泌蛋白BspJ并制备多克隆抗体,本研究通过常规PCR方法扩增BspJ基因,连接至pMD19-T克隆载体并筛选阳性克隆;使用限制性内切酶切下目的片段后连接至pET28a(+)载体,双酶切、菌液PCR验证阳性克隆菌并送测序;表达载体pET28a-BspJ转入大肠杆菌DE3后经IPTG诱导表达,收集表达菌进行SDS-PAGE分析;使用His标签蛋白纯化柱纯化目的蛋白rBspJ;将rBspJ蛋白混入弗氏佐剂分4次免疫实验兔,收集兔血清,Western blot鉴定多克隆抗体,饱和硫酸铵法纯化多克隆抗体.结果显示:PCR方法扩增出大小534 bp的目的片段,测序结果正确,表明成功构建出pMD19-T-BspJ克隆载体及pET28a-BspJ表达载体;表达菌表达出大小约24 kDa的rBspJ,纯化后的rBspJ条带明显,基本无杂带,表明成功纯化出rBspJ;真核表达的rBspJ与制备的多克隆抗体反应,表明成功制备多克隆抗体.本研究结果为BspJ蛋白的亚细胞定位分析、功能研究及布鲁氏菌致病机制的研究积累实验数据和奠定基础.     

一例犊牛磺胺药中毒症状的观察与分析

因磺胺类药物在使用时药量过大或趋于频繁,常常引起动物发生一些不良反应,引起中毒。为了更进一步了解本病,笔者对磺胺药治疗过的一头死亡的牛和一头濒临死亡的犊牛的症状进行了深入的观察与分析,结果发现,此犊牛为磺胺中毒。本试验意在为磺胺药在基层单位的合理临床应用及当前存在的问题提供一定的理论基础和相应的对策。