不同浓度血清对肝细胞原代培养的影响

肝细胞具有多种功能,代谢旺盛。肝细胞的原代培养是一种研究肝组织和肝细胞的良好方法,也是毒理学、免疫学、细胞毒理实验、临床医学及生物技术等各方面研究的基础。在进行肝细胞的培养中,需要使用到牛血清。但牛血清最容易被外界的杂菌所污染,造成实验的失败,同时也是一种较贵的材料。如果合     

鸡肺石蜡切片AgNOR染色方法的探讨

AgNOR银染法是病理实验室常用的染色方法，它能反映细胞增殖及有助于肿瘤的鉴别诊断，在兽医临床上有着不可忽视的作用。AgNOR内的嗜银蛋白为一种酸性非组蛋白，其带负电荷的羧基首先与银离子结合，使银离子还原成金属银，形成在亚显微结构下可见的微小核心，并以此作为银继续沉淀的集中点。然后，由较小负电荷的巯基吸收银，使微小的银发展成特征性的黑点，显微镜下显示为AgNOR颗粒。     

Study on Proliferation and Apoptosis of EBL Cells Induced by P48 Protein of Mycoplasma bovis

The aim of this study was to investigate the effect of P48 protein on proliferation and apoptosis of embryonic bovine lung (EBL) cells.In this study,samples which co-incubated with P48 protein and EBL cells in different concentrations at different time points were collected,the proliferation rate of the cells was detected by MTT method,and the changes in the nuclear morphology of EBL cells were observed by DAPI staining method.Meanwhile,flow cytometry was used to detect the apoptosis rate of EBL cells induced by P48 protein.Real-time quantitative PCR was used to detect the changes in mRNA level of apoptotic marker genes,and Western blotting tested the Bax and Beclin-1 protein expressions.The results showed that under the condition of 72 h and 10 μg/mL of protein concentration treatment,P48 extremely significantly inhibited EBL cells proliferation (P<0.01),while 0.1 and 0.5 μg/mL protein concentration had no inhibitory effect (P>0.05).The nuclear morphology showed no significant change after protein induction for 12 h,but wrinkled and condensed at 24 h.The nucleus was fragmented,and a sprouted apoptotic body was appeared at 48 and 72 h.Apoptosis related genes expression showed no obvious increase at 2 and 12 h at mRNA level,but gradually increased at 24,48 and 72 h,and it showed a time-dependent manner.Accordingly,the expression of apoptosis marker proteins Bax and Beclin-1 significantly increased.Flow cytometry analysis showed that the apoptosis rate of EBL cells induced by P48 protein was 48.44%.In conclusion,P48 recombinant protein of Mycoplasmas bovis inhibited the proliferation of EBL cells and promoted their apoptosis,which provided reference for revealing the pathogenic mechanism of Mycoplasmas bovis.     

锌对几种淋巴类细胞生长和功能影响的研究

本文研究比较了锌和螯合剂ＥＤＴＡ对淋巴类细胞株ＰＤｃ－Ｂ－１、Ｊｕｒｋａｔ、ＢｏＬｃＬ、６Ｃ９和奶牛ＰＢＭＣ增殖及功能的影响。除奶牛ＰＢＭＣ之外，锌对各株细胞的增殖和功能均无促进作用，在浓度为１０￣１００μｍｏｌ／Ｌ时有明显抑制甚至毒性作用。ＥＤＴＡ对各株细胞的增殖只有抑制作用，在同一浓度时对杂交瘤细胞增殖和抗体分泌的抑制作用基本一致，而对ＰＢＭＣ增殖和Ｉｇ分泌程度不同的抑制作用，是因为不同功能的     

中药成分复方的佐剂作用及其与中药复方的功效比较

分别用淫羊藿多糖(EPS)加蜂胶黄酮(PF)、黄芪多糖(APS)加人参皂甙(GS)制成2个中药成分复方(cCHMI1,cCHMI2),同时用相应的淫羊藿、蜂胶、黄芪和人参的提取物制成相应成分含量相同的2个中药复方(cCHM1,cCHM2).试验1用2个中药成分复方(对照组为生理盐水)分别配合兔瘟灭活苗免疫家兔,于免疫后第0、3、7、10、14、17、21、28、35、42天用血凝抑制试验法测定血清抗体效价的动态变化;试验2将4个复方分别与灭活的新城疫强毒混合制成疫苗免疫雏鸡,以油佐剂苗、无佐剂苗和生理盐水为对照,分别于免疫后第7、14、21、28、35、42天用MTT法和血凝抑制试验法检测外周血淋巴细胞增殖和血清抗体效价的动态变化.结果表明,2个中药成分复方能显著提高家兔血清的兔瘟抗体效价,cCHMI1的效果优于cCHMI2;4个复方均能显著促进雏鸡淋巴细胞增殖和提高血清抗体效价,效果与油佐剂苗相当,中药成分复方稍优于中药复方.     

10种中药成分对单层鸡胚成纤维细胞增殖的影响

将安全浓度范围内的黄芪多糖、当归多糖、蜂胶多糖、淫羊藿多糖、板蓝根多糖、黄芪黄酮、蜂胶黄酮、淫羊藿黄酮、黄芪皂苷和人参皂苷等 10种中药成分分别加入已培养 2 4h、刚形成单层的鸡胚成纤维细胞 (CEF)中 ,在加药后12 ,2 4 ,36 ,4 8和 6 0h用MTT法测定它们对CEF增殖的影响。结果表明 ,黄芪皂苷、黄芪多糖、板蓝根多糖和蜂胶黄酮主要表现为促进增殖 ;淫羊藿多糖主要具抑制效应 ;其他 5种中药成分在某些浓度和时间点能促进增殖 ,而在某些浓度和时间点则抑制增殖 ,并有一定的量效和时效关系。     

中草药提取物MACC5对大鼠抗Thy1.1系膜增生性肾炎模型的疗效观察

目的观察中草药提取物MACC5(为广东医学院肾脏病研究所提取物代号)对SD大鼠抗Thy1.1系膜增生性肾炎实验模型的疗效。方法制备兔抗大鼠胸腺细胞免疫血清(ATS),再将ATS经尾静脉注射给SD大鼠,诱导其发生系膜增生性肾炎(MsPGN)后,随机分为3组,每组5只;试验组分别经腹腔注射MACC51.0mL和3.0mL,对照组注射生理盐水(NS)1.0mL;每日观察其尿量、尿蛋白定量,并于第11天处死各大鼠,取肾组织切片观察系膜增殖程度,并用免疫组化法检测肾小球系膜区细胞增殖核抗原(PCNA)的表达。结果两试验组24h尿量均多于对照组(P<0.05);两试验组尿蛋白定量均少于对照组(P<0.01);两试验组单位肾小球系膜细胞(GMC)数均少于对照组(P<0.001); MACC53.0mL试验组肾小球系膜区PCNA的表达低于对照组(P<0.05)。结论MACC5对大鼠MsPGN实验模型具有利尿、降低尿蛋白和促进肾小球系膜损伤修复的作用。     

蝙蝠葛碱和胡椒碱对两株鼻咽癌细胞增殖的影响

目的：观察蝙蝠葛碱和胡椒碱对两株鼻咽癌细胞增殖的影响。方法：用MTT法测定两种药物分别处理CNE－1、CNE－2Z两株细胞的IC5值随作用时间的延长而减少（P＜0．01），两种药物处理CNE－1细胞24、48h的IC50值均明显低于CNE－2Z细胞（P＜0．01），蝙蝠葛碱处理两株细胞72h的IC50值差异显著（P＜0．05）。结论：蝙蝠葛碱和胡椒碱对CNE－1、CNE－2Z细胞株的生长增殖呈时间依赖性抑制，对CNE－1细胞株的增殖抑制作用明显强于CNE－2Z细胞株。     

兔肝细胞的体外培养(简报)

本实验建立了肝细胞体外培养的二种方法。①组织块-细胞培养法:取7～10日龄兔新鲜肝脏,剪成1 mm~3的组织块,洗涤后种植于培养瓶中,加入含5%胎牛血清(FCS)的199培养液,待组织块周围长出大片肝细胞时。用0.25%胰蛋白酶(含0.03%EDTA)消化液分离肝细胞,并进行传代,得到较纯的肝细胞。②肝细胞直接培养法:0.5mg·mL~(-1)胶原酶     

不同浓度胰岛素对鸡胚盲肠上皮细胞生长的影响

为了探讨不同浓度的胰岛素对体外培养的鸡胚盲肠上皮细胞生长和增殖的影响,试验选用16日龄SPF鸡胚,采用嗜热菌蛋白酶消化法无菌分离鸡胚盲肠组织,以含不同质量浓度胰岛素(0、5、10、15、20μg/m L)的培养基对盲肠上皮进行体外培养,对细胞克隆形成率、生长曲线和上皮细胞角蛋白18进行测定。结果表明,培养基中添加10μg/m L胰岛素时,鸡胚盲肠上皮细胞的增殖差异极显著,胰岛素质量浓度为15、20μg/m L时,鸡胚盲肠上皮细胞增殖略有升高,但与胰岛素10μg/m L组相比,细胞增殖差异不显著;角蛋白18鉴定结果为阳性。表明在体外鸡胚盲肠上皮细胞培养中,10μg/m L胰岛素能促进鸡胚盲肠上皮细胞分裂、生长和增殖。胰岛素作为一个体外细胞生长的关键因子,可促进鸡胚盲肠上皮细胞的生长和增殖。