一株类NADC30猪繁殖与呼吸综合征病毒的全基因组序列分析

为监测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行毒株的基因变异情况,采用RT-PCR方法对某猪场疑似患有猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的猪组织样品进行鉴定,测序获得全基因,并对该毒株的NSP2基因缺失特征同源性和遗传进化及重组情况进行分析。结果显示:该猪场感染猪体的病原体为PRRSV,该毒株被命名为180404-2fei;180404-2fei毒株的NSP2区存在131(111+1+19)个氨基酸的不连续缺失,与报道的类NADC30毒株缺失特征一致;180404-2fei的NSP2基因与NADC30毒株核苷酸和氨基酸同源性分别为92.2%和90.1%,180404-2fei毒株的ORF5基因与NADC30的核苷酸及氨基酸序列同源性分别为93.5%和92.0%;遗传进化和重组分析结果表明,180404-2fei毒株属于NADC30-Like亚群,可能是由NADC30与HP-PRRSV重组而来。本研究通过对一株类NADC30 PRRSV的全基因组序列进行分析,为研究PRRSV的遗传变异和PRRS的防控提供了参考依据。     

非洲猪瘟病毒CP312R蛋白的真核表达及单克隆抗体制备

为制备非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)CP312R蛋白的单克隆抗体,以真核表达ASFV的CP312R蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠制备单克隆抗体,并通过间接免疫荧光法(IFA)对获得的单克隆抗体进行反应性鉴定。结果利用杆状病毒表达系统(baculovirus expression system, BES)构建获得重组转移载体pOET3-CP312R,与杆状病毒基因组flashBAC^TM ULTRA共转染Sf9昆虫细胞获得重组杆状病毒AcMNPV-CP312R,且该病毒以胞内可溶形式表达出重组ASFV CP312R蛋白质。通过蛋白质印迹法鉴定显示重组CP312R蛋白可以与ASFV阳性血清发生特异性反应。此外,筛选获得2株针对重组CP312R蛋白的单克隆抗体(McAb),间接ELISA方法鉴定抗体滴度不低于1∶1 024 000。IFA试验检测表明,单克隆抗体与非洲猪瘟抗原发生特异性反应。本研究为非洲猪瘟亚单位疫苗研发及血清学检测方法的建立提供物质储备。     

广西柳城县防疫合作社成效好

广西柳城县成立防疫合作社后,立足当前,着眼未来,对村级动物防疫组织建设和防疫工作大胆改革,有益尝试,值得借鉴。2010年4月起,广西壮族自治区柳州市柳城县成立了动物防疫技术服务专业合作社(以下简称防疫合作社)。2011年2月26日,笔者专程前往柳城县对防疫合作社的运转、未来发展等情况开展     

猫疱疹病毒1型的分离鉴定及gD基因序列分析

为研究猫疱疹病毒1型(FHV-1)的分子流行病学特征,对2016年-2017年从洛阳及天津地区多家宠物医院收集的具有上呼吸道感染症状的病猫眼鼻拭子样品,用FK-81细胞进行病毒分离,通过间接免疫荧光试验、电镜形态观察和gD基因测序分析等方法鉴定所分离的病毒,并进行病毒体外生长动力学研究。结果显示,病料在FK-81细胞上接种后24 h^36 h呈现变圆、融合、局灶性堆积聚团和脱落等细胞病变;分离毒株可被FHV-1单克隆抗体特异性识别;电镜下可观察到病毒粒子呈圆形、有囊膜、直径约130 nm,具有疱疹病毒科的典型形态特征,将所分离到的5株FHV-1分别命名为2016TJ1株、2016TJ2株、2017LY1株、2017LY2株和2017LY3株;病毒一步生长曲线测定结果显示,接种后12 h^36 h病毒快速增殖,40 h^60 h病毒滴度达到高峰,72 h病毒滴度开始下降;5株FHV-1 gD基因序列之间的同源性为100%,核酸序列高度保守且与国内外流行株及疫苗株的同源性极高。研究结果为我国宠物猫群中FHV-1的病原分离、分子流行病学调查等研究积累了资料。     

鸡传染性法氏囊病病毒rVP2蛋白高效组装亚病毒颗粒的鉴定

为获得高纯度的鸡传染性法氏囊病病毒（infectious bursal disease virus,IBDV）VP2蛋白自组装的亚病毒颗粒（subviral particles,SVPs）,并对重组VP2蛋白（rVP2）SVPs的组装效率和均一性进行评价,本试验利用大肠杆菌表达IBDV rVP2,通过SDS-PAGE和Western blotting对蛋白表达情况和免疫反应性进行鉴定,通过阴离子交换层析和切向流超滤浓缩系统纯化rVP2蛋白,并通过透射电镜（TEM）、高效液相尺寸排阻色谱（HPSEC）、蔗糖密度梯度离心及粒径和表面电位（Zeta potential）等多种检测技术对单个SVP组装形态和整体组装情况进行分析检测,初步建立了IBDV rVP2 SVPs组装效率的系统性检测方法。结果显示,在大肠杆菌中实现IBDV rVP2的大部分可溶性表达,且能与鸡IBDV阳性血清有明显的免疫反应性,纯化后rVP2纯度提高66.9倍,回收率达到93.3%。TEM观察rVP2自组装成直径约25 nm的SVPs,视野内SVPs大小均一,均匀分散。HPSEC检测结果显示,rVP2 SVPs的分子质量约为2 482 ku,与20个VP2三聚体形成的T=1二十面体SVPs分子质量一致。蔗糖密度梯度离心检测结果显示,rVP2 SVPs体积分布均一,组装效率高。粒径和Zeta电位检测结果表明,rVP2 SVPs颗粒分散度较好、体系稳定,有利于rVP2 SVPs的长期保存。本试验通过多种检测技术对rVP2 SVPs的组装情况进行检测分析,实现了rVP2 SVPs的高效组装,为IBDV SVPs疫苗的质量控制提供了有力支撑。     

两株类NADC30猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离鉴定

猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)又称为"猪蓝耳病",是一种由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的猪传染性疾病。本研究将采集到的2份疑似患有PRRS的流产胎儿的肺组织研磨后离心,取上清液接种猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophage,PAM)盲传3代。通过RT-PCR方法和间接免疫荧光方法,对组织样品及细胞培养物进行了鉴定和分型。结果显示本研究成功从2份样品中分离到了类NADC30,且该毒株可以在PAM细胞上增殖。该研究结果为研究类NADC30毒株的重组机制、致病情况及研制预防疫苗提供参考。     

规模猪场猪瘟免疫失败调查及免疫程序优化

为调查规模猪场猪瘟的免疫效果,选取北京市3个规模猪场,每场随机抽取10头仔猪分别在25、60日龄和90日龄采血分离血清,检测猪瘟抗体.A、B、C3个猪场的母源抗体阳性率分别为100％,50％,0％;2次免疫后抗体阳性率分别为10％,90％,90％.由于猪场A猪瘟免疫失败,对其免疫程序进行了优化,将首免时间推迟至50日龄.优化免疫程序后2次免疫后抗体阳性率达到70％.结果表明,母源抗体阳性率直接影响猪瘟疫苗对仔猪的免疫效果,仔猪母源抗体降至50％左右进行猪瘟免疫可取得比较理想的结果.本研究为规模猪场结合仔猪母源抗体水平制定合理猪瘟免疫方案提供了较好的参考.     

猪细小病毒HN-2011株VP2基因的克隆及序列分析

根据GenBank中登录的猪细小病毒(PPV)VP2基因序列设计引物,扩增HN-2011河南分离株的VP2基因片段,并将其克隆到pMD-18T载体中.序列分析结果表明,HN-2011分离株VP2基因长度为1 740 bp,编码580个氨基酸.利用MAGE 5.0软件绘制PPV系统发育进化树,结果显示,PPV毒株可以划分为4组,我国的PPV毒株主要集中在A和B两组,仅JY毒株位于C组;PPV VP2蛋白3维结构显示,氨基酸变异的多态性位点主要集中在病毒衣壳蛋白的表面.以上遗传进化关系表明,PPV HN-2011株是我国PPV的流行毒株.     

新佐剂新流二联浓缩苗与常规新流二联苗肉鸡免疫效果比较

为比较新型油佐剂鸡新城疫、禽流感(H9亚型)二联浓缩灭活疫苗(以下简称"新佐剂新流二联浓缩苗")与常规油佐剂鸡新城疫、禽流感(H9亚型)二联灭活疫苗(以下简称"常规新流二联苗")在商品肉鸡上的免疫效果,本研究用7日龄AA肉鸡对两种疫苗的安全性和有效性进行评价.安全性评价结果表明,商品肉鸡免疫新佐剂新流二联浓缩苗和常规新...     

p63和Calponin蛋白在犬乳腺肿瘤中的表达及意义

为便于确定肿瘤的组织学来源,推测其在兽医临床诊断中的鉴别意义,研究p63和Calponin蛋白在20例犬乳腺肿瘤(canine mammary tumor,CMT)病例中的表达,采用免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)SP染色方法和光学显微镜观察进行确诊。结果表明,鼠抗人单克隆抗体p63和Calponin可用于犬乳腺肿瘤病例中肌上皮的表达研究,在乳头状瘤、混合瘤及腺肌上皮瘤等犬良性乳腺肿瘤组织中p63与Calponin表达为阳性或强阳性;在乳头状癌、浸润性导管癌等恶性肿瘤组织中p63与Calponin蛋白表现为阴性或局灶阳性。选择p63与Calponin作为犬乳腺肿瘤组织基底和腺肌上皮细胞的标记物有一定的敏感性和特异性,对良、恶性乳腺肿瘤组织、乳腺肿瘤或癌旁组织的来源和临床诊断等具有鉴别和指导作用。