长途运输应激对猪肾脏中HSPs mRNA转录水平及定位影响

利用原位杂交和本实验室建立的猪HSPs mRNA一步法实时荧光定量RT-PCR技术平台等方法,研究长途运输对猪肾脏中HSP70及HSP90BmRNA转录水平及在组织细胞中定位的影响。经1,2,4,6和10 h的运输应激后,肾组织中HSP70mRNA的转录水平随着运输应激时间的延长一直呈现出上升的趋势,运输应激持续到10 h时,HSP70mRNA的转录水平升到最高,为对照组的14.2倍;HSP90mRNA的转录水平在应激初期(1~2 h)急剧升高(P<0.01),到运输应激持续到6 h后,升高不再显著。HSPs mRNA在肾组织细胞中的定位无肉眼可见的随着应激时间的延长而发生相应变化。HSP70mRNA和HSP90mRNA在肾小球毛细血管内皮细胞的胞核以及肾小管上皮细胞中呈阳性分布。运输应激可以导致HSPs mRNA转录水平的变化,并且对不同家族的HSPs mRNA转录水平的影响不同;HSP70mRNA的转录水平随着应激时间的延长一直呈现出上升的趋势,有望成为猪运输应激的判定指标之一。     

热休克蛋白研究进展

热休克蛋白是从原核生物到真核生物普遍存在的一种高度保守的蛋白质 ,热休克蛋白的研究已成为当今世界生命科学的热点和富有希望的研究领域之一。本文从热休克蛋白的基因调控和功能以及与疾病的关系方面作了详细叙述     

热应激对SH-SY5Y细胞中PrP及HSP90 mRNA转录水平的影响

人神经细胞SH-SY 5Y常规法培养至长满细胞瓶(120 cm2)后均分为A~I 9个小细胞瓶(30 cm2),37℃培养15 h后,B~D组在42℃条件下分别进行0.5、1和2 h的持续热应激处理,而E~I组于42℃热应激处理0.5 h后,37℃分别恢复1、3、8、12、24 h。持续热应激阶段,朊蛋白(P rP)和热休克蛋白(HSP)90 mRNA水平显著提高(P<0.01),应激2 h时,P rP和HSP 90 mRNA水平分别约为对照组(A组)的2.5和5倍;在应激后恢复初期(1~3 h),P rP和HSP 90mRNA水平也显著升高(P<0.01),其中恢复到3 h时,P rP和HSP 90 mRNA水平分别为对照组的9和7倍;当恢复到12~24 h时,HSP 90和P rP mRNA的转录水平与对照组差异不显著。结果表明热应激可以提高HSP 90和P rP mRNA的转录水平。应激时P rP mRNA转录水平的提高暗示着P rP在细胞应激中起着一定的生物作用。     

嗜水气单胞菌弹性蛋白酶基因的克隆表达

为了研究嗜水气单胞菌重组弹性蛋白酶的酶学性质,试验根据GenBank中的嗜水气单胞菌弹性蛋白酶基因ahyB设计1对含酶切位点的特异引物,以嗜水气单胞菌J-1(AhJ-1)株为模板,经PCR扩增得到不含信号肽的成熟弹性蛋白酶基因片段(787 bp),并与pMD18-T载体连接、测序,再用DNAStar软件分析.结果表明:...     

运输应激猪HSPs mRNA转录、分布及免疫器官病理性损伤相关性研究

【目的】研究长途运输应激对猪免疫器官的病理性损伤、HSPs mRNA的分布和转录水平,探讨其相关性。【方法】利用组织学、原位杂交和本实验室建立的猪HSPs mRNA一步法实时荧光定量RT-PCR技术平台等方法,研究长途运输应激对猪免疫器官的病理性损伤、HSPs mRNA的分布和转录水平的变化。【结果】在长途运输应激初期（1～2 h）,淋巴结和脾脏出现急性病理性损伤变化,损伤程度较为严重;运输应激4 h时,组织的病理性损伤与应激初期相似,但血管的充血程度有所减轻;淋巴结和脾脏中HSP70 mRNA的转录水平随着运输应激时间的延长一直呈现出上升的趋势,运输应激持续到10 h时,HSP70 mRNA的转录水平升到最高,分别为对照组的9.59和11.46倍;HSP90 mRNA的转录水平在应激初期（1～2 h）急剧升高（P＜0.01）,运输应激2 h时,淋巴结和脾脏中HSP90 mRNA的转录水平分别为对照组的59.67和13.03倍,到运输应激持续到6 h后,升高不再显著。HSPs mRNA在淋巴结和脾脏细胞中的定位无肉眼可见的随着应激时间的延长而发生相应的变化,但HSP70和HSP90 mRNA之间的定位存在着差异。【结论】运输应激可以导致组织损伤和HSPs mRNA转录水平的变化,但对不同家族的HSPs mRNA转录水平的影响不同;HSP90 mRNA的转录水平与组织损伤有着良好的相关性,有望成为猪运输应激的判定指标之一。     

一例鸡淋巴细胞性白血病的诊断

2012年山东省青岛市某蛋鸡养殖场中出现病鸡消瘦,产蛋量下降,剖检以肝脏、肺脏、肾脏、胰腺等多处内脏器官出现灰白色肿瘤病灶为特征的病例,经病理组织学检查,瘤组织呈灶性或多中心性,细胞形态较一致,通过内脏型马立克氏病的病理变化鉴别观察,并结合该病例的临床症状,初步诊断为鸡淋巴细胞性白血病,并对本病的防控措施提出了建议。     

两株H6亚型禽流感病毒全基因组序列测定及遗传进化分析

为研究2016年在活禽交易市场鸭体内分离的2株H6亚型禽流感病毒(AIV)[分别是A/duck/Jiangxi/88/2016(H6N6)(简称DK/88/16)和A/duck/Jiangxi/219/2016(H6N2)(简称DK/219/16)]分子特征及遗传进化规律,本实验对其进行了全基因组扩增和测序,并进行了遗传进化分析。结果显示,2株病毒间HA基因同源性较低,仅为94.5%,但与我国近年分离的H6亚型病毒株保持较高同源性。DK/88/16和DK/219/16的NA基因分别与我国近年流行的流感病毒N6和N2基因保持较高同源性。对2株病毒的内部基因分析显示,其内部基因的来源较为复杂,其中DK/88/16的内部基因PA来源于我国最近流行的H5N2或H5N6病毒,显示该株病毒为新的重组病毒。对2株病毒的分子特征分析显示,除M1蛋白的30和215位点及NS1蛋白的42位点具有增强病毒对小鼠致病力的分子特征外,其余均保持低致病力分子特征。以上结果表明,H6N2和H6N6亚型AIV在我国鸭群中持续存在,并不断的遗传重组,需要进行持续的流行病学监测。     

2017-2019年山东省部分地区猪瘟流行病学调查

为掌握近年来山东地区猪瘟病毒（CSFV）的流行及其遗传变异情况，本研究对2017年1月-2019年12月从山东省济南市、泰安市、聊城市、青岛市等10个地区采集的1 687份疑似猪瘟感染猪病料运用反转录PCR方法进行了病毒核酸检测，将CSFV检测为阳性的样品进行E2基因和CSFV全基因扩增和测序，利用生物信息学软件DNAStar和Mega 7.0对CSFV的E2蛋白以及全基因序列进行遗传进化分析。另外，将这些地区采集的4 866份血清样本进行了抗体ELISA检测。结果显示，1 687份病料中病原检测有188份阳性，总阳性率为11.1%，其中2017-2019年病原检测阳性率分别为8.5%、13.1%、15.1%，抗原阳性率逐年上升且呈不稳定性，提示规模化猪场猪瘟兔化弱毒疫苗的免疫存在一定的风险和压力；采集的4 866份血清样本中4 146份呈现抗体阳性（85.2%），统计得到2017-2019年抗体阳性率分别为84.3%、83.0%、92.3%，抗体阳性率呈现上升趋势，说明山东省规模化养殖场猪群猪瘟疫苗免疫保护的整体水平逐年提高；从阳性病料中扩增获得了5株CSFV全基因组序列和5株病毒E2基因序列，经过序列比对发现，5株临床分离毒株与2.1d亚型的CSFV全基因组序列同源性在97.5%~99.0%之间，表明5株分离毒株与2.1d亚型的CSFV亲缘性较近，分离毒株氨基酸位点的突变集中在102位（L→M）以及159位（K→R）氨基酸处。本研究分析了2017年1月-2019年12月山东部分地区猪群中CSFV毒株的流行与变异情况，为指导山东省CSFV预防与控制提供了有力的参考。     

致病性大肠杆菌携带原噬菌体的预测及耐药性与毒力研究

【目的】 研究致病性大肠杆菌携带原噬菌体的比例、原噬菌体携带毒力基因及耐药基因的情况,了解致病性大肠杆菌中原噬菌体对菌株的耐药性与毒力的影响,保证噬菌体生产菌的生物安全性,为大肠杆菌噬菌体的基础研究与应用提供借鉴。【方法】 从NCBI中下载大肠杆菌全基因组信息,通过在线网站预测大肠杆菌中携带的原噬菌体数目,并分析原噬菌体的GC含量、基因组大小、占细菌基因组比例等基因组特征及完整型原噬菌体的类型,对原噬菌体做初步分类,统计分析完整型原噬菌体中携带耐药基因数目、耐药表型、耐药机制与毒力基因数目、毒力基因家族分布等。【结果】 112株大肠杆菌携带完整型原噬菌体1 024个,疑似型原噬菌体287个,缺陷型原噬菌体505个。1 024个完整型原噬菌体中,多数与长尾噬菌体相似,占70.21%（719/1 024）;共有63种噬菌体类型,其中BP4795（登录号：NC_004813.1）类型的占比最高,达到19.24%（197/1 024）,其次是DE3（登录号：NC_042057.1）,占比11.72%（120/1 024）。大肠杆菌携带原噬菌体的GC含量在38%~57%之间,基因组大小为3.1~152.6 kb,其中80 kb以内的原噬菌体占97.03%（1 762/1 816）。1 024个完整型原噬菌体中携带耐药基因占比为6.35%（65/1 024）,共携带耐药基因253个,分别来自11个抗生素耐药基因家族;携带一个或多个毒力基因的完整性原噬菌体占42.78%（438/1 024）,共携带毒力基因1 274个,分别来自9个不同毒力因子家族,平均每个完整型原噬菌体携带毒力基因2.9个。【结论】 大肠杆菌普遍携带原噬菌体,原噬菌体中部分携带耐药基因与毒力基因,在实际应用中应充分评估其风险,防止原噬菌体造成的耐药基因与毒力基因在菌株之间的转移。     

黄芪对肉鸡免疫力的影响

将120只1日龄AA肉鸡均分A、B、C、D四组,饲养至8日龄时,在饲料中添加黄芪,剂量分别为:60g/kg(A)、40 g/kg(B)、20 g/kg(C),持续7d,D组为对照组.各组试验鸡于15、22、29日龄时3次扑杀,采取血液样品,分别检测鸡外周血淋巴细胞转化率、新城疫抗体滴度.结果表明:黄芪试验组均能提高鸡体的体液免疫和细胞免疫功能,添加黄芪各组鸡外周血淋巴细胞转化率与D组对照比较,A组差异极显著,B组差异显著,C组差异不显著.