桦褐孔菌发酵产物对鸡新城疫疫苗免疫效果的影响

为了明确桦褐孔菌发酵产物(Inonotus obliquus fermentation products,IOFP)饲喂时间对鸡新城疫(Newcastle disease,ND)疫苗免疫效果的影响,优化和完善饲喂方案,降低生产成本,对饲喂不同时间IOFP机体的体液和细胞免疫反应部分指标进行了测定。试验分为6组,在日粮中全程添加(Ⅰ组)、免疫前添加7 d(Ⅱ组)、免疫前后分别添加4 d和3 d(Ⅲ组)、每添加4 d间隔3 d(Ⅳ组)8 g/kg IOFP,且均免疫新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)弱毒疫苗;Ⅴ组免疫接种疫苗,饲喂商品化日粮;Ⅵ组为以PBS代替疫苗免疫,同时饲喂商品化饲料的空白对照组。所有动物于14日龄进行NDV弱毒疫苗免疫,21 d后加强免疫。分别于首免后0、7、14、21、28、35、42 d分离各组外周血血清,进行NDV血凝抑制(hemagglutination inhibition,HI)抗体滴度和中和抗体滴度的测定;分离不同时间点外周血淋巴细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)进行增殖指数的测定、Th1型和Th2型细胞因子mRNA表达水平的检测。结果显示,在日粮中添加IOFP能够有效提升疫苗的免疫效果,相比于其他各组,Ⅰ组和Ⅱ组的添加方式能够更为显著的提升机体的NDV HI抗体滴度和中和抗体滴度、PBMCs增殖水平和Th1型/Th2型细胞因子mRNA的表达量。考虑到成本,最终选择免疫前饲喂7 d为IOFP作为口服免疫增强剂的最佳应用方式。     

基于形态学及多基因位点的枸杞褐斑病病原鉴定

枸杞Lycium barbarum Mill.是一种药食两用的名贵中药材,褐斑病是2010年在甘肃省枸杞种植区发生的由无性态类真菌新种枸杞小黑梨孢Stigmella lycii引起的新病害,据2015年-2018年调查,该病害已扩展至甘肃省各枸杞种植区,常年发病率45%～65%,严重度2～3级。本研究首次对枸杞小黑梨孢有性态形态进行描述,并结合分子生物学方法,确定该病病原菌的系统发育地位,为该病的防治提供一定的理论依据。枸杞褐斑病菌在离体培养条件下和越冬病叶上均可形成有性态。子囊壳球形至亚球形,大小185.6μm×176.6μm,有喙,喙的大小为(35.7～53.6)μm×(32.0～53.55)μm;子囊袋状,大小(103.2～165.7)μm×(15.7～22.4)μm,含8个子囊孢子;子囊孢子砖格状,大小(25.9～36.5)μm×(9.4～14.1)μm,平均31.2μm×12.3μm,具(4～)6～7个纵隔和1～3个横隔。通过ITS、LSU、RPB2和EF1-α多基因位点联合构建系统发育树,确定该菌为子囊菌门格孢腔菌目格孢腔菌科真菌。秋末冬初清洁田园,减少来年初侵染源,是有效防治枸杞褐斑病的关键措施。     

利用CRISPR/Cas9系统敲除葡萄中VviEDR2提高对白粉病的抗性

利用CRISPR/Cas9系统定点编辑葡萄白粉病感病基因VviEDR2（Enhanced disease resistance 2），在VviEDR2的DUF1336结构域设计靶位点VviEDR2-T1，构建CRISPR/Cas9敲除载体，通过农杆菌介导法转化‘无核白’葡萄胚性愈伤组织。对PCR阳性植株进行靶位点扩增测序，结果表明，共有8个转基因植株在靶位点处发生不同类型的双等位基因突变，编辑效率为32%；突变体植株生长势较弱，叶片较小，茎秆丛生、细弱。进一步对突变体植株进行抗病检测，结果表明，接种葡萄白粉菌（Erysiphe necator Schw.）5 d后，突变体植株叶片上白粉菌孢子仅能萌发出少量较短初级菌丝，表皮细胞产生大量明显的H2O2，而野生型叶片中白粉菌萌发出大量初级菌丝、次级菌丝和吸器，无明显H2O2产生。这些结果表明，可以利用CRISPR/Cas9技术编辑葡萄感病基因VviEDR2，提高葡萄白粉菌抗性。     

EM菌的除臭功能及其在养殖业中的应用

EM菌是以光合细菌、乳酸菌、酵母菌、放线菌、丝状菌为主5科、10属、80余种微生物组成的复合微生物活菌制剂,最早由日本琉球大学比嘉照夫教授研制,并于20世纪80年代投入市场。由于EM菌的强大功能,目前已广泛应用于农业、养殖、种植、环保等领域,并取得了明显的经济效益、环境效益和社会效益。臭味物质作为水产、畜禽业的重要环境污染物,能够降低养殖生物的免疫力,严重危害养殖生物的健康,影响养殖生物的生长、发育等。     

Y-S-Y12发酵液和生物质热解液混配对辣椒炭疽病的防治及作用机理

为探究解淀粉芽孢杆菌Y-S-Y12拮抗菌发酵液和生物质热解液混配对辣椒炭疽病的协同防病作用及其作用机理，对不同浓度生物质热解液、拮抗细菌Y-S-Y12菌株的发酵浓缩液及其混配溶液对辣椒炭疽病的抑菌作用进行检测，计算出毒力方程，根据EC50值将两种溶液进行混配，求得最佳配比。通过活体试验检测Y-S-Y12菌株对辣椒炭疽病果实的防治效果，测定叶片超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD)、过氧化物酶（peroxidase，POD）和过氧化氢酶（hydrogen peroxidase，CAT）活性，并探究各药剂对辣椒炭疽病病菌菌丝的细胞膜通透性、生理代谢和菌丝形态的影响。结果显示，Y-S-Y12菌株发酵浓缩液和生物质热解液以1∶9混配具有明显的协同增效作用;混配的防效显著高于单剂，防效达到79.62%，进一步说明混配具有增效作用。混剂处理的辣椒炭疽病菌菌丝中的几丁质酶活性、β-1,3-葡聚糖酶活性和蛋白酶活性显著高于对照和单剂处理，处理后菌体的保护屏障被打破，使培养液的电导率、外渗液中蛋白质和核酸含量上升。混剂处理的辣椒叶片中SOD、POD、CAT酶活性显著高于对照和单剂处理，说明辣椒植株抗病性增强。综上，Y-S-Y12菌株发酵液和生物质热解液混配对辣椒炭疽病有协同防病作用，可能是因为Y-S-Y12菌株具有破坏辣椒炭疽病菌菌丝和诱导辣椒植株抗病性作用。研究为辣椒炭疽病无公害防治提供理论依据。