山羊痘病毒P32基因重组表达载体的构建及原核表达

以含山羊痘病毒贵州LD株P32基因的质粒pMD18-T-P32/LD为模板,应用PCR方法扩增P32基因,将该基因片段克隆至原核表达载体pET-28a,构建了重组表达载体pET-28a-P32/LD,转化大肠杆菌BL21(DE3)中并诱导表达。SDS-PAGE分析结果显示,有分子量约为35.5 ku的融合蛋白获得表达,与预期结果相符;Western-Blotting证实该表达蛋白具有免疫学活性。P32蛋白的成功表达为山羊痘基因工程疫苗的研制及诊断方法的建立奠定了基础。     

新城疫病毒检测技术研究进展

新城疫是由新城疫病毒引起的一种急性、高度接触性禽类传染病。本病发病急,致死率高,是严重危害养禽业的重要疾病之一。本文从病毒的分离与鉴定、电镜技术、血清学方法以及分子生物学诊断技术4个方面介绍了新城疫病毒的检测技术,为今后兽医临床上检测新城疫病毒提供一定的参考。     

猪繁殖与呼吸综合征流行病学调查与RT-PCR鉴定

对贵州省11个猪场出现的疑似猪繁殖与呼吸综合征病例进行流行病学调查和病原RT-PCR鉴定，结果表明，发病仔猪主要表现高热，死亡率为40.35％（642／1591）；3个种猪场的待产母猪群发生繁殖障碍，流产率为8．11％（38／469）；成年猪群发病率为24．47％（162／662），死亡率为4．35％（30／662）；感染猪群PRRS血清抗体平均阳性率为28.12％（45／160）。对病死猪病料进行PRRS病原核酸鉴定，其平均检出率为84．44％（38／45），变异毒株试剂盒检测显示，11个临床发病猪场病例是由变异毒株引起的高致病性猪繁殖与呼吸综合征。     

牛结核分枝杆菌实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

为建立可应用于快速检测奶牛结核病、评估鲜乳污染状况、追溯传播途径的试验方法,本研究根据牛结核分枝杆菌基因组设计合成特异性引物,建立实时荧光定量PCR方法,并对反应条件进行优化,构建标准曲线,评价该方法的性能。结果显示,本研究所建立的实时荧光定量PCR方法能有效检测牛结核分枝杆菌目的基因,其最佳引物浓度为400 nmol/L,最佳退火温度为52 ℃。所构建的标准曲线相关性好,可用于样本的定量检测。该方法的性能评价显示,其最小检出模板浓度为80.24 ng/L,且该方法具有较好的特异性、可重复性,可对鲜乳样本进行检测。试验结果表明,本研究所建方法可用于牛结核分枝杆菌的定性和定量检测,这为奶牛结核病的诊断与净化及鲜乳食品安全评估提供重要技术。     

山羊痘病毒P32基因的克隆、测序及在原核细胞表达

为比较山羊痘病毒贵州分离株P32基因与国内外分离株的关系,并获得P32蛋白,应用PCR方法从贵州山羊痘病毒分离株的核酸样本中扩增出P32基因片段,将PCR产物克隆至pMDl8-T载体,对重组质粒进行了基因序列测定.将测定的P32基因核苷酸序列和推导的氨基酸序列与GenBank中相应序列作比较,同源性分别达到99.4%和98.4%,表明山羊痘病毒的P32基因具有高度保守性.将P32基因克隆至原核表达载体pET-28a,成功构建重组表达质粒pET-28a-P32/LD,转化至大肠杆菌BL2l(DE3)进行诱导表达.SDS-PAGE检测显示,重组细菌在35.5 kDa处表达一条特异性的蛋白带,而阴性对照未见这条蛋白带;Western-Blotting检测证实,这条蛋白带能与山羊痘高免血清反应而显示其免疫学活性.     

非洲猪瘟病毒检测方法研究进展

文章对非洲猪瘟病毒的结构特征及各种检测方法的应用情况进行阐述,比较各种方法的优缺点和适用性,为非洲猪瘟的诊断及防控提供参考。     

仔猪腹泻的研究现状

随着养殖技术的快速发展,我国仔猪养殖成功率不断提高.在仔猪养殖过程中,腹泻一直是导致仔猪死亡的主要因素.为了有效预防仔猪腹泻,我国加大了该方面的研究力度,腹泻治疗技术得到了显著提高.本文对仔猪腹泻原因进行分析,并探讨仔猪腹泻防治措施.     

贵阳市家畜布鲁菌感染情况调查与分析

为了解贵阳市2015年家畜布鲁菌的感染情况,以指导全市家畜布鲁菌病的防控工作,采用虎红平板凝集试验和试管凝集试验对全市8 381份牛、羊、猪血清开展布鲁菌感染情况调查。结果表明,牛、羊和猪布鲁菌病阳性率依次为0.29%(13/4 530)、0.39%(11/2 848)和0%(0/1 003)。说明贵阳市家畜布鲁菌病的流行率在国家控制标准以内,今后宜实行检疫和扑杀相结合的防控策略。     

规模化养殖场猪繁殖障碍性疫病的实验室诊断

为对发生在贵阳市某规模化养猪场的一起猪繁殖障碍性疫病进行确定性诊断，采集病死猪的血清和病料样本进行实验室诊断。结果：猪细小病毒、猪圆环病毒2型和猪伪狂犬病病毒PCR阳性检出率依次为45.45%(5/11)、45.45%(5/11)和54.55%(6/11)。结果表明，本次疫病是由猪细小病毒、猪圆环病毒2型和猪伪狂犬病病毒混合感染所致。     

奶牛口蹄疫母源抗体测定及三价灭活疫苗免疫效果评价

为科学评价口蹄疫O型、A型、亚洲Ⅰ型三价灭活疫苗的免疫效果,并合理制定奶牛口蹄疫免疫程序,采用液相阻断ELISA方法对犊牛母源抗体及成年母牛口蹄疫免疫抗体进行了检测。结果:犊牛母源抗体90日龄时回落近临界值,成年母牛免疫后6个月抗体水平下降至临界值。根据试验结果,建议免疫程序如下:犊牛90日龄首免口蹄疫三价灭活疫苗,首免后1个月进行二免,以后每6个月加强免疫1次;成年母牛首免后每6个月加强免疫1次。