重组小麦组蛋白H4介导绿色荧光蛋白基因(pEGFP/C1)的转染

利用在大肠杆菌体内表达的重组小麦组蛋白H4与质粒DNA形成复合体后,通过琼脂糖凝胶电泳迁移试验(EMSA)验证重组蛋白与DNA的结合情况;MTT法检测蛋白对细胞的毒性作用;转染细胞后,激光共聚焦显微镜检测荧光蛋白的表达。此重组蛋白能很好地结合质粒DNA,且能有效地保护DNA分子不受核酸酶降解,并能高效地携带绿色荧光蛋白基因pEGFP/C1转染进入卵巢癌细胞株H08910。     

华北地区冬小麦主要气象灾害风险评价

为了对华北地区冬小麦生育期内遇到的主要气象灾害(干旱和干热风)的综合风险进行评价,根据气象灾害发生机理及区域环境特征建立危险性、暴露性和脆弱性评价模型,并构建综合风险模型,具体分析各地区综合风险的大小及主导风险因子,该文利用华北地区48个农气站冬小麦发育期资料(1981-2010年)和气象资料(1961-2010年)以及近50 a产量资料,将冬小麦全生育期划分为前期(播种期-起身期)、中期(拔节期-开花期)、后期(灌浆期-成熟期)3个阶段,并充分考虑了底墒形成期(播种当年7-9月)内的降水,分别基于水分亏缺指数和加权干热风日数构建了干旱、干热风等级指数,对华北地区冬小麦干旱、干热风灾害以及综合气象灾害风险进行分析。结果表明:危险性、脆弱性和暴露性的权重分别为0.3272、0.3116和0.3612。华北地区冬小麦农业气象灾害风险值有2个高值中心,一个位于冀鲁豫交汇处,一个位于河北省泊头、黄骅等地,风险值由中心向四周逐渐降低。根据该文构建的综合风险评估模型,将华北冬小麦种植区划分为5个不同风险等级区。评价结果具有较强的针对性,可以为华北各地区农业气象灾害风险管理提供参考。     

RNA干扰技术及其在马立克病端粒酶研究中的应用

RNA干扰是一种在动植物中广泛存在的、由双链RNA诱发的、同源mRNA特异性沉默的过程,具有高特异性、高效性和可遗传性等特征。RNA干扰技术已成为分子生物学研究中最为活跃的热点之一。端粒和端粒酶系统可以调节细胞的增殖,通过抑制端粒酶的活性而抑制细胞的增殖是肿瘤治疗的新策略。文章综述了RNA干扰技术对端粒酶活性调节方面的研究进展及其在鸡马立克病防治方面的应用前景。     

H5亚型禽流感病毒HA基因在WISH细胞中的瞬时表达

在WISH细胞中,对H5亚型禽流感病毒HA基因进行了瞬时表达的研究。首先构建了真核表达质粒pVAX-H5HA,通过酶切和PCR筛选阳性克隆后测序。然后将重组表达质粒以脂质体介导法转染WISH细胞。通过RT-PCR在转录水平检测目的基因的表达,间接免疫荧光检测目的蛋白。结果表明,HA基因在WISH细胞中进行了表达。     

HAV表位抗原与HBV核心抗原融合基因的原核表达

为探讨甲肝DNA疫苗的可行性,利用DNA重组技术将甲肝病毒（HAV）复合多表位抗原基因VPx插入到乙肝病毒核心抗原（HBcAg）基因中,得到CVPx融合基因。将CVPx克隆到原核表达载体pET-28a（＋）中,并在大肠杆菌中进行表达,表达的蛋白进行Western Blot及ELISA检测,结果表明：融合蛋白具有甲肝病毒表位抗原的反应原性。     

鸡马立克氏病肿瘤组织细胞端粒长度的测定

用马立克氏病病毒 ( MDV)京 -1株血毒对 SPF鸡攻毒 ,7周后扑杀 ,采取各内脏组织 ,一部分组织做病理切片 ,发现有肿瘤细胞浸润者即判定为阳性 ;另一部分组织用于端粒长度测定。以 DIG标记的探针( TTAGGG) 4,通过 Southern Blot方法测定细胞端粒长度 ,结果表明 ,阳性肾脏、肝脏、脾脏、神经、卵巢等组织细胞端粒长度较正常组织细胞的明显缩短     

凋亡素基因真核表达载体的构建及在人肿瘤细胞中的表达

为探讨凋亡素对肿瘤的基因治疗效果,构建了凋亡素基因的真核表达载体。将凋亡素基因重组入 ｐｃ Ｄ Ｎ Ａ３ 载体,并通过脂质体介导凋亡素在人喉癌、人肺癌细胞系中表达;通过 Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ 在转染细胞中检测到了凋亡素的 ｍ Ｒ Ｎ Ａ,这为应用凋亡素进行肿瘤的基因治疗奠定了基础。     

iRNA作用的形态学观察

本文通过动物实验观察了异种iRNA的作用。应用人甲种胎儿球蛋白(α—AFP)免疫兔,然后用热酚法由免疫兔的脾脏和淋巴结中堤取iRNA,再将其注射到小鼠腹腔内,5d后杀鼠,观察小鼠脾脏的变化。结果表明,注射iRNA鼠与对照组相比,脾脏明显增大和显现淋巴细胞增殖应答。     

鸡组织细胞端粒相关序列的克隆及序列分析

根据真核细胞端粒DNA序列的共同特点，设计了一条引物（TELO02）（24nt)。按照TaKala克隆试剂盒的介绍方法，染色体基因组DNA经HaeⅢ和HinfⅠ两种限制性内切酶酶切后，先进行初级PCR（C1和TELO02）扩增，得到的产物为模板再经过次级PCR（C2和TELO2）扩增，得到的产物用试剂盒回收，并连接到PMD-18-T载体上，转化到JM109受体菌中，从阳性克隆中提取质粒DNA进行PCR和酶切鉴定，确认后进行序列测定，获得了一段243sbp的鸡端粒相关序列。此序列与人第7条染色体基因组末端序列的同源性为63.5%；与鼠端粒旁序列同源性为63.2%；而与MDV基因组序列的BamHⅠ酶切片段76.6%的同源。     

伪狂犬病病毒立即早期蛋白基因缺失突变体对SV40启动子的调控作用

用多次PCR方法对伪狂犬病病毒的立即早期蛋白(immediate early protein，IE180)基因进行部分缺失。测序证实缺失序列正确后，构建了IE180基因部分缺失突变体的真核细胞表达裁体peP1P2、pcP1P3P2、pcP6P2。将这些真核表达裁体与带有SV40早期基因启动子和报告基因CAT(氯霉素乙酰转移酶)的pCAT3-control载体质粒混合后，用质酯体介导的方法，共转染Hela细胞。通过CAT的ELISA方法检测瞬时表达结果表明：突变体P1P2和P1P3P2对SV40启动子具有较强的激活能力，而P6P2则对SV40启动子有较明显的抑制作用。