鸡沙门氏菌外膜蛋白亚单位疫苗的研究——Ⅱ油乳剂型(OE)亚单位疫苗的研究

用十二烷酰肌氨酸法提取鸡沙门氏菌外膜蛋白，作为抗原，制备油乳剂型（Oil Emulsion OE)亚单位疫苗。该亚单位疫苗为油包水（W/O）型，稳定性良好，安全可靠。对3周龄雏鸡用该疫苗肌注接种，6周龄攻毒，结果表明，接种800ugOMP/只油乳剂型亚单位疫苗的雏鸡对鸡白痢沙门氏菌或鼠伤寒沙门氏菌的攻击具有显著的免疫保护力。     

鸡传染性喉气管炎病毒的分离与鉴定

采用鸡胚传代方法从内蒙古地区两个发病鸡场分离到两株传染性喉气管炎病毒(分别命名为ILTV-NM98a、ILTV-NM98b株),进行了系统的常规生物学特性和部分分子生物学特性鉴定。结果表明,两个分离株对乙醚、氯仿、热均敏感。电镜下可见病毒粒子近似球形,有囊膜,大小在150~300nm之间。两分离株均能被标准阳性血清中和。接种60日龄抗体阴性鸡的发病率分别为100％和80％,死亡率分别为26.7％和6.7％。以两个分离株及参考株的DNA为模板,gB-1、gB-2为引物,以PCR方法扩增出gB基因片段,片段大小完全一致。扩增产物经Pst Ⅰ、Bg1Ⅱ、HindⅢ内切酶酶切后的酶切图谱与参考株完全一致。     

两株乳酸菌对鸡新城疫HI抗体效价影响的研究

本研究利用两株乳酸杆菌L.casei.zhang和MG2-1制成乳酸菌液和发酵乳以不同的剂量灌服雏鸡,在10日龄和28日龄进行两次新城疫疫苗(LaSota系)滴鼻点眼免疫,在二免后的第7天和14天检测血凝抑制效价。结果表明,与对照组相比,试验各组抗体效价均达到显著或极显著水平,可提高0.61～1.77(log2)。由于菌株、剂量等的差异,各试验组在提高抗体水平上也有所不同。两株乳酸杆菌制成乳酸菌液和发酵乳对雏鸡免疫机能均有促进作用。     

鸭坦布苏病毒E蛋白的原核表达

本研究利用RT-PCR方法扩增鸭坦布苏病毒(Duck tembusu virus,DTMUV)奉贤株(FX2010)的结构蛋白E基因,并将其克隆至原核表达载体pET32a(+),构建重组表达质粒pET32a-E。将其转化受体菌E.coli BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导进行表达。SDS-PAGE和Western blot试验检测结果表明,E基因在大肠杆菌中得到了表达,并且可与抗DTMUV的多克隆抗体发生特异性反应。E基因的成功表达为DTMUV的诊断试剂盒、疫苗等的研制奠定基础。     

羊口疮病毒的分离与鉴定

本试验利用犊牛睾丸细胞、羔羊睾丸细胞、MDBK、BHK-21细胞对采自内蒙古赤峰的疑似羊口疮发病羊群的唇部痂皮组织进行接种传代,分离出1株病毒,通过透射电镜负染观察和PCR检测对该分离株进行鉴定。参照GenBank中羊口疮病毒(Orf virus,ORFV)ORF059 (F1L)基因的核苷酸序列,设计并合成1对特异性引物,成功地对分离株的F1L基因进行克隆、测序,并与多株参考毒株进行了同源性比对分析,结果显示经透射电镜负染观察到典型的副痘病毒粒子,与参考毒株序列相比均具有较高的同源性,均为96%以上,结果表明该分离株为ORFV,命名为OV/nm-hd。     

布鲁菌PCR检测方法的建立及其应用

本文根据已发表布鲁菌BCSP31基因序列,设计1对引物,以布鲁菌19号苗基因组DNA作为模板,建立诊断牛布鲁菌病的PCR方法,并对方法的特异性、敏感性及适用性进行验证.结果显示,PCR能扩增布鲁菌BCSP31基因特定序列.该方法对布鲁菌的最小检出量为9pg,对葡萄球菌26001株、大肠杆菌O78等7种参照菌株的核酸扩增结果均为阴性.建立的PCR方法具有快速简便、特异性强、敏感性高等特点.     

蓝舌病在全球的分布概况

蓝舌病为OIE规定的需通报疫病，我国将其列为一类动物疫病。该病已经给全球大部分流行地区造成巨大经济损失。我国于1979年首次证明该病存在，且在我国流行初期即造成大量易感动物死亡，给我国畜牧业带来了重大经济损失。但蓝舌病在我国仍属冷门研究方向，我国到底分离鉴定出多少个血清型的蓝舌病病毒，该病在我国的分布范围到底有多广？许多畜牧兽医工作者对这些问题并不是非常清楚。特别是在近年来鲜有蓝舌病引起动物发病死亡报道的前提下，人们对蓝舌病的重视程度进一步降低。本文对蓝舌病在全球的流行概况进行简要阐述，同时，对蓝舌病在我国40年的流行情况进行回顾，希望该病在我国能够得到足够的重视。     

羊口疮病毒强弱毒株免疫相关基因的比较分析

通过对采集到的青岛市某发病羊场羊口疮病料（强毒）在山羊成纤维细胞上连续传90代（弱毒）后, 分别进行病毒基因组提取, 并对提取到的基因组分别命名为ORFV-QD和ORFV-RD。根据GenBank上发表的ORFV全基因组序列设计并合成3对特异性引物, 分别扩增ORFV-QD和ORFV-RD的B2L基因、F1L基因和VIR基因片段, 并将扩增得到的基因组片段分别克隆到pMD-19T载体上, 转化到DH5α感受态细胞中, 对重组质粒进行鉴定后送至测序公司进行测序, 用DNASTAR软件对测序结果进行拼接及3组基因之间核苷酸同源性比较分析, 将测序结果与NCBI上已公布的13组ORFV全基因组相应基因核苷酸序列进行同源性比对分析、构建系统进化树及氨基酸序列比对分析。结果表明, 3组基因与参考序列的B2L基因、F1L基因和VIR基因核苷酸同源性分别为92.1%~98.4%、96.1%~99.1%和94.6%~100%。将2株病毒基因组与参考序列进行氨基酸序列比较分析, 结果显示2株病毒基因组之间并没有较为明显的差异。