共表达O型口蹄疫病毒P12A+3C基因的重组杆状病毒的构建

构建共表达O型口蹄疫病毒(Foot and mouth disease virus,FMDV)衣壳蛋白前体P12A和蛋白酶3C的重组杆状病毒,为进一步研究FMDV空衣壳抗原和基因工程亚单位疫苗奠定基础。从质粒T-OP1中扩增出编码O型FM-DV衣壳蛋白前体的P12A基因,并将其插入到杆状病毒转移载体pFastDual-3C的PH启动子之下,构建重组杆状病毒转移载体pD-P12A3C。通过在大肠杆菌内转座重组,获得重组杆粒B-P12A3C,转染Sf9细胞,获得表达O型FMDV衣壳蛋白的重组杆状病毒。重组杆状病毒经增殖并感染Sf9细胞后,通过双抗体夹心ELISA方法及间接免疫荧光来检测目的蛋白的表达。结果表明,表达产物能被O型FMDV阳性血清识别,具有一定的反应原性,表明重组杆状病毒构建成功,该研究为O型FMDV空衣壳的体外组装及基因工程亚单位疫苗的研究提供了前期材料。     

口蹄疫病毒非结构蛋白3AB基因的可溶性表达与反应原性的鉴定

设计特异性引物扩增得到完整的口蹄疫病毒(FMDV)非结构蛋白(NSP)3AB基因,定向克隆到表达载体pET-30a中,获得了重组质粒pET-3AB,并转化大肠杆菌(Eschenchia coli)BL21(DE3).重组菌分别在37℃和28℃条件下诱导表达,表达产物经SDS-PAGE电泳鉴定,观察到37℃培养条件下目的蛋白形成包涵体,在28℃条件下培养目的蛋白以可溶性的形式表达.Western blot分析表明,表达的目的蛋白能与FMDV感染牛血清发生特异性反应.以纯化的3AB蛋白作为抗原,采用间接ELISA模式检测了部分FMDV感染动物血清和健康动物血清,证明表达蛋白与FMDV感染血清有很好的反应而与健康动物血清无反应.     

口蹄疫防制技术的研究和发展

从诊断技术、分子流行病学、疫苗的研制和应用以及消毒技术等方面概述世界口蹄防疫制技术的研究和发展。     

牛上皮样品中口蹄疫抗原检测:酶联免疫吸附试验和补体结合反应对不同采样部位检测比较

在世界口蹄疫参考实验室(WRL),对于送检的口蹄疫(FMD)上皮样品的初检,传统的方法是应用补体结合试验(CFT)。近来对已建立的用于检测上皮组织中FMDV抗原的双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA,)进行了评价,发现比CFT更敏感,更特异,现在ELISA已成为WRL的标准检测试验。但是,用于这些比较试验的上皮病料还未得到明确定义。由于绝大多数样品是从WRL样品库随机获取,或者是海外     

免疫增强重组流感病毒体

自英国医生Edward Tenner提出免疫接种的概念之后,疾病的预防已成为提高人类生活质量的最高要求.由于病原不断进化,自然免疫反应不可能实现理想的免疫保护,而且由于病原体可能影响宿主的免疫反应,甚至在一定程度上抑制宿主免疫系统的抗感染能力,因此,需要在对病原分子生物学、致病机理以及病原与免疫系统间相互作用的综合理解基础上,研究更安全、有效的免疫方法.     

口蹄疫感染性克隆疫苗的发展前景

口蹄疫是一种严重威胁畜牧业发展的重要传染病 ,目前世界上许多国家和地区都有该病的流行与发生。开展新型口蹄疫疫苗的研究一直是口蹄疫防制技术的一项重要内容。鉴于传统疫苗所存在的诸多缺点 ,人们先后研制开发了口蹄疫的第二代基因工程苗和第三代基因疫苗 ,这些新型疫苗都具有一定的优越性 ,显示出进一步发展的潜力。文章着重讨论了在感染性 c DNA的基础上所构建的一类新型基因疫苗—感染性克隆疫苗及其发展前景。感染性克隆疫苗不仅继承了以往基因疫苗的许多优点 ,而且克服了其表达量低 ,免疫效果不理想的缺点 ,为新型疫苗的研制提供了一种新的思路