鸡球虫早熟株的生物学特性及其在疫苗中的应用

按照Jeffers建立的艾美耳球虫早熟株选育方法选育出的球虫早熟株，其潜在期明显缩短，繁殖力和致病性显著降低，但保持良好的免疫原性.并且，早熟株的弱毒性和早熟性具有遗传稳定性，通过放松选择压力反复传代后无恢复现象。国内外学者根据早熟株的这些生物学特性，并在深入了解鸡球虫病的保护性免疫机制的基础之上研制了抗鸡球虫病的早熟株弱毒活苗。本文综述了球虫早熟株的生物学特性，并介绍了目前国内外研制出的球虫早熟苗在鸡球虫病防治方面的应用。     

禽类干扰素及其基因工程研究进展

干扰素是由干扰素诱生剂诱导生物细胞所产生的一类高活性多功能的糖蛋白。干扰素自被发现以来,由于其广谱抗病毒、抗肿瘤活性及其强大的免疫调节作用而受到研究者们的重视,在其基因结构、作用机理以及体外重组表达等方面都取得了巨大突破。作者综述了干扰素的基因结构、基因工程及重组干扰素的应用研究进展。     

奶·牛·球·虫·卵·囊·检·测·方·法

牛球虫病是由牛球虫寄生在牛小肠下端和整个大肠的上皮细胞内引起的以出血性肠炎为特征的寄生性原虫病,在多雨季节,长期在低洼、多沼泽的草甸上放牧,或牛舍潮湿,均易引起此类疾病的发生,主要发于犊牛。该病对养牛业的危害较大,据报道美国养牛业每年因球虫病导致的经济损失达几亿美元。我国牛球虫病发病率可高达87．5％,危害十分严重。该病的诊断还主要是根据临床症状和剖检变化以及粪检卵囊来确诊。     

鸭坦布苏病毒的研究进展

鸭坦布苏病毒病是由坦布苏病毒(Tembusu virus,TMUV)引起的一种以产蛋鸭产蛋量下降和雏鸭或育成鸭出现神经症状为主要特征的传染性疾病。2010年在我国江浙地区首先暴发,随后迅速波全国主要养鸭省份,给我国的养鸭业造成了极大的经济损失。本文主要从生物学特征、传播途径、流行病学、临床症状、诊断等方面阐述该病毒的最新研究进展,为其相关研究提供参考。     

堆形艾美耳球虫巨噬细胞移动抑制因子的克隆和表达

本研究扩增和克隆了堆形艾美耳球虫巨噬细胞移动抑制因子,并在大肠杆菌中表达出MIF重组蛋白。根据GenBank中的MIF mRNA序列,设计特异引物,采用PCR方法以堆形艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA文库为模板扩增获得MIF基因,将MIF基因片段连接到原核表达载体pET-28a（＋）,构建重组表达质粒pET28a—MIF,并在大肠杆菌BL21（DE3）中诱导表达,对表达产物进行Western blot分析。结果从堆形艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA文库中扩增出MIF基因片段,长度为709bp;经序列分析,扩增片段的核苷酸序列与GenBank中登录的MIF序列的同源性为99．5％;经SDS-PAGE检测表明重组质粒pET（28a）-MIF在大肠杆菌中以包涵体形式表达;Western blot分析证明堆形艾美耳球虫抗血清可与重组表达蛋白特异性结合。本研究结果为进一步研究该基因的功能奠定了基础。     

柔嫩艾美耳球虫伴侣蛋白TCP-1亚基α的特性和功能初步分析

柔嫩艾美耳球虫是一种重要的寄生于鸡盲肠细胞内的寄生原虫,可引起危害严重的鸡球虫病。目前,对鸡球虫病的预防和治疗主要依靠抗球虫药,而药物的广泛使用使球虫产生了严重的耐药性。为研究球虫耐药性产生的机制,本实验室前期对诱导的地克珠利耐药株、马杜拉霉素耐药株和亲本敏感株进行转录组测序,经分析发现TCP-1亚基α为耐药株和敏感株的差异表达基因且在耐药株上调表达。本文以柔嫩艾美耳球虫敏感株为模板,成功克隆出TCP-1亚基α基因,构建了原核表达重组质粒p ET-Et TCP-1α,并成功诱导表达了重组蛋白r Et TCP-1α,用纯化的重组蛋白免疫新西兰大白兔和BALB/C小鼠获得多克隆抗体。用荧光定量PCR和Western blot方法检测柔嫩艾美耳球虫敏感株、地克珠利耐药株和马杜拉霉素耐药株TCP-1亚基α基因的m RNA转录和翻译水平,同时检测了该基因在球虫不同发育阶段的转录水平和翻译水平。结果显示,Et TCP-1α在2个耐药株的m RNA转录和蛋白翻译水平明显高于敏感株,而且该蛋白在第二代裂殖子的表达最高;间接免疫荧光实验显示该蛋白主要位于子孢子和第二代裂殖子表面,当虫体入侵DF-1细胞进行裂殖生殖后,该蛋白分布于整个虫体,且表达量明显升高。因此,推测Et TCP-1α在柔嫩艾美耳球虫细胞内的生长发育和耐药性的产生过程中发挥了一定的作用。     

柔嫩艾美球虫地克珠利和马杜拉霉素抗药株与敏感株孢子化卵囊18SrDNA基因的差异

为探讨抗球虫药物地克珠利和马杜拉霉素对柔嫩艾美球虫18SrDNA的影响，分别对人工诱导的柔嫩艾美球虫地克珠利抗药株（ETAD）、马杜拉霉素抗药株（ETAM）和药物敏感株（ETDS）孢子化卵囊的18SrDNA基因进行了克隆测序，并通过生物信息软件进行对比差异分析。结果显示，ETAM株有3个碱基发生突变（T170突变为C，T646突变为C，G694突变为C）；ETAD株有1个碱基发生突变（T646突变为C）。经进一步分析比较，发现ETAM株18SrRNA的二级结构与ETDS株的差异很大，而ETAD株18SrRNA的二级结构则与ETDS株的完全相同。这些碱基的突变有可能是导致E．tenella产生抗药性的原因之一。     

柔嫩艾美耳球虫地克珠利抗药株和马杜拉霉素抗药株的实验室诱导

采用药物浓度逐渐递增的方法 ,以 0 .0 5× 10 - 6 地克珠利和 2 .0× 10 - 6 马杜拉霉素为起始诱导浓度 ,分别经过 18次和 2 0次传代 ,在实验室诱导了柔嫩艾美耳球虫 (Eimeria tenella)对地克珠利和马杜拉霉素的抗药性虫株。经抗药性检测 ,以最适抗球虫指数 (POAA)、病变记分减少率 (RL S)、相对卵囊产量 (ROP)和抗球虫指数 (ACI) 4项指标综合判定及综合抗药性指数 (GI) 2种方法共同判定 ,获得的地克珠利抗药株对 1.2× 10 - 6地克珠利具有完全抵抗力 ,而对马杜拉霉素完全敏感 ;马杜拉霉素抗药株对 7.0× 10 - 6 的马杜拉霉素具有完全抵抗力 ,而对地克珠利完全敏感。     

传染性法氏囊病病毒在不同宿主系统中增殖的比较

传染性法氏囊病(Infectious Bursal Disease,IBD)的病原为传染性法氏囊病病毒(IBDV)，IBDV可在不同宿主系统中增殖。本试验建立了简便、快速的多克隆AC—ELISA方法用于滴定不同宿主系统增殖的IBDV，并与滴定抗原的常规方法作了比较。     

石阡县玉米"3414+1"肥效试验初报

通过＂3414＋1＂的试验对石阡县的玉米栽培过程中所需的N、P、K用量进行研究,从而探索出本地玉米的最佳施肥量及比例。结果表明：有机肥区总体表现优于配方肥区;配方肥最佳施肥量N为129.9kg/hm2,P2O5为147.2kg/hm2,K2O为219.5 kg/hm2;在生产中提倡施用有机肥,酌情施用化学肥料推荐其最佳N∶P∶K为2∶2∶3。