羊泰勒虫主要表面蛋白P32基因的克隆及真核表达载体的构建

提取羊泰勒虫裂殖子总RNA,用特异性引物扩增出其主要表面蛋白P32基因,并成功地将该基因纯化后克隆到pGEM-T Easy 载体上,经PCR 和EcoRⅠ酶切鉴定均为阳性的重组质粒进行了测序和分析.随后将该基因从克隆载体上双酶切,与毕赤酵母分泌性表达载体pPIC9K相连接,构建重组表达载体pPIC9K-MPSP-P32,转化大肠埃希菌JM109,经测序证实,基因序列完全正确.     

皮蝇Hypodermin A基因的克隆及表达质粒构建

参照牛皮蝇HypoderminA(HA)基因的核苷酸序列,设计一对引物,以皮蝇总RNA为模板进行RT--PCR扩增牛皮蝇HA基因,将扩增基因进行克隆测序。序列分析表明,所克隆获得的基因与GenBank中已经登录的核苷酸和氨基酸的同源性分别为97.2%和99.3%。同时,将该基因与表达载体PGEX-4T-1连接,构建并获得阳性重组表达载体。     

不同浓度吐温-80与白僵菌分生孢子的相容性测定

[目的]筛选吐温-80的最佳试验浓度。[方法]采用营养液萌发法测定11种不同浓度的吐温-80与白僵菌分生孢子的生物相容性。[结果]结果表明,吐温-80在浓度为0.0075％、0.0250％、0.0500％和0.1000％时白僵菌的孢子萌发率均达到95％以上,且差异不大,对白僵菌的生长影响较小。[结论]当吐温-80浓度小于0.1000％（含0.1000％）时可考虑应用于白僵菌的相容性试验中。     

吕氏泰勒虫cDNA表达文库的构建及其抗原基因的免疫筛选

 【目的】构建吕氏泰勒虫裂殖子cDNA表达文库,并从中筛选抗原候选基因。【方法】从吕氏泰勒虫裂殖子直接提取和纯化mRNA,采用oligo（dT）引物合成双链cDNA,并在其两端加EcoRⅠ/HindⅢ定向接头。将所产生的cDNA分子定向克隆到具有EcoRⅠ/HindⅢ粘性末端的λSCREEN载体的两臂之间。用PhageMaker extract对连接产物进行体外包装以形成完整的噬菌体,并用之转染大肠杆菌ER1647,从而构建成吕氏泰勒虫的cDNA表达文库。用吕氏泰勒虫阳性血清和兔抗绵羊IgG-AP筛选得到阳性克隆,经测序和Blast软件分析并获得新基因。【结果】成功构建吕氏泰勒虫裂殖子cDNA表达文库,其初级库容量约为1.0×106 PFU,扩增文库的滴度为8.2×108 PFU?ml-1,文库重组率为100%;通过免疫学筛选、测序和Blast软件分析,共获得30个新基因,其中15个基因已登录GenBank/NCBI。【结论】为研究泰勒虫疫苗、新型医药和诊断抗原,以及发展可持续性防制羊泰勒虫病提供基本材料。     

蜱类防治研究进展

从化学防治、遗传防治、免疫防治和生物防治等方面介绍了蜱的防治概况。     

采用PCR方法对我国蜱伯氏疏螺旋体感染的流行病学调查

通过调查我国已有的4种蜱伯氏疏螺旋体的感染情况,以进一步阐明莱姆病在中国的分布与流行状况。本研究通过筛选扩增伯氏疏螺旋体外膜蛋白A(OspA)基因片段的通用引物,获得1对特异性引物,优化反应条件后建立用于检测蜱体内伯氏疏螺旋体的PCR方法,其扩增片段大小为307 bp。该方法可检测出10 pg的阿氏疏螺旋体(Ba)、1 pg的伽氏疏螺旋体(Bg)和0.01 pg的狭义伯氏疏螺旋体(Bb)的3种不同基因型的伯氏疏螺旋体的OspA基因组DNA,表明其敏感性较好,适用于蜱感染伯氏疏螺旋体状况的调查。本研究从我国7个省采集到的667只蜱,进行伯氏疏螺旋体感染的流行病学调查,分类鉴定表明这些蜱分属革蜱属、血蜱属、牛蜱属和扇头蜱属。PCR检测所获数据表明它们的感染率分别为4%(10/264)、6%(11/137)、31.4%(59/185)和31%     

牛瑟氏泰勒虫超微结构观察

从牛瑟氏泰勒虫病疫区采得带虫血液,用冰瓶带回实验室后,立即静脉接种给除脾小黄牛.在感染当日肌内注射地塞注松磷酸钠注射液剂量每天10mg,隔日一次,一直到血液中发现虫体为止.当红细胞染虫率达到22%时,进行虫体超微结构观察.方法是:耳尖取血0.5mL 固定于5mL2.5%戌二醛溶液中,再用1%锇酸固定2h,乙醇逐级脱水,EPONg_(12)环氧树脂聚合包埋,制成超微簿切片,最后用 H-600型透射电子显微镜观察拍片.电镜观察显示:虫体表膜由嗜饿性的外膜和内膜组成,突起的细胞核位于虫体后部.在虫体细胞质内可观察到棒状体,和发育很好的内质网,及游离的核糖体.线粒体被2层膜所包围在裂殖子的细胞质内分布是很不均匀的.还观察到细胞口和与其相连的排泄管.在细胞口附近有一个较大的食物空泡.瑟氏泰勒虫的超微结构和 HiGuchi等(1984)所观察到寄生在骨髓和脾脏红细胞中的瑟氏泰勒虫超微     

非洲猪瘟病毒RNA聚合酶亚基D205R基因生物信息学分析及多克隆抗体制备

非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)pD205R蛋白参与病毒基因的转录，属于ASFV RNA聚合酶，且与真核生物RNA聚合酶II RPB5亚基相似，为深入了解pD205R结构，功能及病毒与宿主之间的作用机制。利用DNAStar、MEGA7.0对GenBank中公布的不同毒株的ASFVD205R基因序列进行分析，利用ExPASy、GOR4、AlphaFold软件对该蛋白的理化性质及结构预测进行分析，并对其原核表达和制备抗pD205R蛋白多克隆抗体。结果显示：在不同基因型间D205R基因高度保守；利用ExPASy在线软件预测pD205R蛋白理化性质其分子式为C₁₀₈₈H₁₇₁₂N₂₇₈O₂₉₅S₈,属亲水性蛋白，稳定性差；二级结构及三级结构预测显示，α螺旋是其主要结构形式，占比为35.12%;同时以ASFV-CN/SC/2019毒株基因组为模板，构建原核表达质粒pET-28a-D205R并转入Rosetta (DE3)感受态细胞，经IPTG...