青鱼生长激素在毕赤酵母中的表达

根据GenBank数据库中登记的青鱼(Mylopharyngodon picens)生长激素(bcGH)基因序列(AF389238)设计特异性引物,采用RT-PCR技术扩增青鱼生长激素cDNA编码区,并通过定向插入含强启动子AOX I的表达载体pPIC3.5k、电击转入毕赤酵母GS115菌株、G418多克隆子筛选和测序...     

微卫星标记及其在鱼类原种检测中的应用

我国拥有多达3000余种鱼类,其中淡水鱼类有800多种,分属于13目38科226属[1].此外,近30多年来,从国外引进的鱼类约有40多种.这些物种无论在形态方面,还是在生物学特性、栖息环境方面,多样性都极其丰富.但随着人工养殖规模得逐渐扩大,鱼类原种受水体污染、自然生态环境破坏和水利工程等因素的影响,导致鱼类原种种质资源逐渐退化[2].因此,开展鱼类原种保存对提高养殖产量有着十分重要的意义.     

用微卫星标记分析湘华鲮野生群体遗传多样性

为了解湘华鲮天然种质资源现状，用38对鲤科鱼类微卫星引物对其群体进行全基因组扫描，结果筛选出15对能够获得稳定扩增条带的引物。以鲮鱼养殖群体为对照群体。在15个微卫星位点中，湘华鲮多态性位点9个，对照群体6个。通过分析湘华鲮微卫星位点PCR产物的电泳图谱，共检测到40个等位基因，每个位点的等位基因数目介于1～5之间，其平均等位基因数为2．67个，平均有效等位基因数为1．47个，平均观察杂合度为0．2289，平均期望杂合度为0．2730，平均多态信息含量（PIC）为0．2440，多数Hardy-Weinberg平衡偏离指数值偏离平衡值，与对照组无显著性差异。本研究表明湘华鲮野生种群结构不合理，遗传多样性低，种质资源处于危险状态。     

饲料中添加茶氨酸对草鱼免疫和血清生化指标的影响

研究饲料中添加茶氨酸对草鱼免疫和血清生化指标的影响,探讨茶氨酸的最适添加剂量。试验采用单因素完全随机试验设计,选择360尾当年草鱼鱼种,分成4组,在基础日粮中分别添加0、0.4%、0.8%和1.2%的茶氨酸,每组3个重复,每重复30尾鱼,试验期8周。结果表明:与对照组相比,添加适量的茶氨酸能够提高草鱼血清补体C3、补体C4和免疫球蛋白M(IgM)水平;显著提高了草鱼血清中谷草转氨酶活力和葡萄糖、甲状腺激素、促甲状腺激素和皮质醇的含量,其他血清生化指标含量都有增加的趋势。由此可知,日粮中添加茶氨酸能提高草鱼非特异性免疫能力,显著提高了草鱼血清中部分与生长代谢相关的酶活力和激素含量。     

鳜鱼SSR-PCR反应条件的优化探索

以鳜(Siniperca chuatsi)基因组DNA为试验材料,研究MgCl2浓度、dNTPs浓度、Taq DNA聚合酶3个反应参数对微卫星PCR的影响,建立一套适合鳜微卫星PCR反应的最佳体系.结果表明,在25μL的反应体系中,Mg2+、dNTPs、Taq DNA聚合酶3个参数的适宜浓度分别为1.2 mmol/L、0.2 μmol/L和0.04 U/μL.PCR反应程序为94℃变性5 min,94℃30 s,56℃ 1 min,72℃ 1 min,共30个循环,最后72℃延伸5 min.     

草鱼脑垂体的起源和发生的研究

研究表明：草龟脑垂体由两个不同部位的胚胎细胞形成。原始口腔背壁外胚层分离出来的细胞构成垂体的前、中腺垂体；从间脑腹面漏斗体分离出来的细胞构成垂体后腺垂体及神经部，在受精后２０ｈ（１８～１９℃），原始口腔上皮细胞增生，开始向内迁移；受精后２９ｈ，有部分细胞迁移到间脑底部下面；受槽后４５ｈ脱膜；孵化脱膜后９ｈ（受糟后５４ｈ），上皮细胞与由漏斗体分离出来的细胞接合；脱膜后４ｄ（受精６ｄ），脑垂体初步形成，垂体组织开始分化；脱膜后３２ｄ（受精后３４ｄ），垂体形态建成；脱膜后５ｍｏｎ，脑垂体分区明显，细胞分化尚未完成；到一年鱼，垂体组织几种分泌细胞分化完成。     

阴离子型表面活性剂(LAS)对水生植物生理生化特性的影响

采用室内培养实验方法,以植物的生长量、过氧化氢酶CAT和过氧化物酶POD活性变化作为观测指标研究了直链烷基苯磺酸钠LAS对稀脉浮萍LemnapaucicostataL.、满江红AzollaimbricataRoxb.Nakai、水网藻Hydrodictyonsp.生理生化特性的影响。结果表明当LAS浓度超过1mg·L-1时稀脉浮萍的生长受到严重抑制在10、100mg·L-1下出现负增长。CAT、POD活性变化与细胞受伤程度直接相关可作为植物分子生态毒理学指标。LAS浓度在0—10mg·L-1范围内随着浓度升高酶活性增加清除细胞中由于LAS产生的过氧化物伤害;当浓度超过10mg·L-1时植物受到明显损伤甚至死亡。同时发现,CAT、POD活性水平与植物的类群直接相关,被子植物稀脉浮萍的酶活性比蕨类植物满江红的高藻类植物水网藻酶活性最低。     

黄颡鱼微卫星标记筛选及特征分析

通过磁珠富集法首次筛选黄颡鱼微卫星标记并对其特征进行分析。用生物素标记的寡核苷酸探针(AC)8、(CT)8、(AT)7、(GATA)8、(GATT)7进行微卫星片断的富集,挑选部分阳性克隆测序获得38个含有微卫星的DNA序列,总计设计并合成了22对微卫星引物。以普通黄颡鱼基因组DNA为模板,进行PCR扩增,结果筛选出18个多态性微卫星标记,每对引物等位基因数2-8个（平均3.78）,遗传杂合度0.2225-0.8101（平均0.5755）,多态信息含量0.3425-0.7900（平均0.5336）。此外18对多态性微卫星引物中有16对在黄颡鱼属其它4种鱼类具有通用性,13对在鲇形目中的3种鱼类具有通用性。因此,可以推断筛选的多态性微卫星标记可用于黄颡鱼属和鲇形目鱼类的遗传分析。     

忍冬属黄酮合成酶基因FNSII的SNP分析

为挖掘鉴别金银花与山银花的黄酮合成酶基因(flavone synthase II gene,FNSII)SNP位点,以基源确定的5个忍冬属(忍冬、灰毡毛忍冬、红腺忍冬、黄褐毛忍冬、华南忍冬)共计12个样本为研究对象,采用同源克隆法从各忍冬属植物中克隆FNSII基因,分析不同忍冬属植物中的SNP位点。结果显示:克隆分离到的各忍冬属FNSII基因的同源性和相似性高达95%以上;成功克隆获得红腺忍冬、黄褐毛忍冬和华南忍冬的FNSII序列;系统进化分析表明,获得的忍冬属序列与基源鉴定结果一致;通过序列比对,从12个样本中克隆得到的20条FNSII序列中鉴定到38个SNP位点,其中19个SNP位点可用于区分各种属,依据各种属间SNP的差异进行分型,获得5种基因型。     

草鱼小肽转运载体PepT1基因的克隆与表达特征

采用同源克隆和RACE技术克隆草鱼(Ctenopharyngodon idellus)PepT1基因的全长cDNA序列。该cDNA全长为2 762 bp,包含141 bp的5′UTR序列,479 bp的3′UTR序列,2 142 bp开放阅读框,编码713个氨基酸;草鱼与鲫(Carassius auratus)、斑马鱼(Danio rerio)的核苷酸同源性分别为77.6%和74.0%,氨基酸同源性分别为78.0%和76.7%;与其他物种的核苷酸同源性为53.9%～59.1%,而氨基酸的同源性为57.2%～61.8%。经预测,其编码蛋白的分子量为79.29 kD,等电点为5.87,该蛋白具有与哺乳动物十分相似的11个螺旋跨膜结构,跨膜区氨基酸高度保守;系统进化分析表明,草鱼PepT1基因与鲫鱼和斑马鱼的亲缘关系最近;利用Real-time PCR技术检测了该基因的时空表达,结果显示,PepT1在草鱼前肠组织表达量最高,其次是肌肉组织;草鱼出膜7 d后PepT1 mRNA表达量相对稳定;昼夜节律研究发现,肠道PepT1基因夜间的表达量较白天高。本研究旨在为小肽转运载体PepT1介导肠道转运小肽调控草鱼对饲料蛋白消化吸收的分子机理提供理论基础。