黄瓜根际土壤细菌群落的16S rDNA-PCR-DGGE分析

采用PCR-DGGE技术分析了接种枯萎病菌后黄瓜根际土壤细菌群落的动态变化。对黄瓜种植前、接菌前、接菌后发病、接菌后未发病以及接种清水(对照)共5份土壤样品直接提取其总DNA,用F338-GC/R518引物扩增16Sr DNA基因的V3可变区,结合DGGE电泳条带分析样品的细菌群落组成及变化趋势。结果显示,接种枯萎病菌后,会引起黄瓜根际土壤中细菌数量及种类发生较大的变化,其中,接种枯萎病菌后Rhodococcus phenolicus(E1)、Clostridiumsp.(E3、E6)以及3种未培养细菌(E2、E4、E5)数量增加,另外2种未培养细菌(A1、A2)数量减少。     

硫酸镁对烟草感染PVYN后病情及防御酶系活性的影响

对叶面喷施240mg·L-1硫酸镁溶液后,烟草幼苗感染烟草马铃薯Y病毒脉坏死株系(Potato Virus Y-vein necrosis.PVYN)的发病情况、病毒含量及防御酶系活性进行研究.结果表明:烟草幼苗经240 mg·L-1MgSO4处理,再接种PVYN后其发病程度减轻,病情指数及幼苗叶片中病毒含量均低于未喷施MgSO4的对照.叶面单独喷施MgSO4处理和喷施后接种PVYN处理,对苯丙氨酸解氨酶(PAL)、过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)的活性均有较强的促进作用.烟草幼苗接种PVYN后,PAL在处理第6天时达到酶活高峰(2.63U·g-1FW),POD、PPO的活性在接种PVYN后第15天时产生高于对照处理的酶活高峰,峰值分别为55.76U·g-1FW和10.62U·g-1FW;但喷施MgSO4对过氧化氢酶(CAT)活性影响较小.本研究证实,MgSO4具有较强的诱导植物产生抗病毒的能力,可明显提高植株的抗病性.     

侧孢短芽孢杆菌B8对两种植物病原菌抗菌机制初步研究

研究了侧孢短芽孢杆菌B8胞外抗菌蛋白对立枯丝核菌和辣椒疫霉菌的抗菌作用。结果表明,B8胞外抗菌蛋白可有效抑制立枯丝核菌和辣椒疫霉菌菌丝生长,抑制率分别为73.51%和47.26%。经其处理的立枯丝核菌菌丝膨大、断裂,细胞质外渗,细胞壁消解,菌丝解体;处理的辣椒疫霉菌菌丝分支增多,顶端产生球状结构,原生质体囊泡化,菌丝断裂。B8胞外抗菌蛋白对辣椒疫霉菌游动孢子囊产生和游动孢子萌发具有抑制作用,抑制率分别为80%和100%。B8胞外抗菌蛋白对立枯丝核菌菌核产生具有显著的抑制作用,抑制率可达到100%;对菌核萌发速度也具有抑制作用,其处理过的菌核萌发速度缓慢,且萌发产生的菌丝生长量明显减少,菌丝畸形。     

菌株Streptomyces S_(90)抗菌物质的初步鉴定及抑菌作用机制研究

采用Doskochilova溶剂系统层析、pH纸层析和纸电泳测定表明:菌株StreptomycesS90发酵液中具有抑菌活性的物质为一种单组分碱性水溶性抗生素。采用大孔树脂吸附法提取得到了该抗菌物质的粗提物,研究其对烟草赤星病菌的作用机制表明,当抗菌物质浓度为1.6mg/mL时,对菌丝生长和孢子萌发的抑制率分别达到82.06%和78.80%;随着各处理浓度的增加,抗菌物质使病菌菌丝细胞膜电导率和丙二醛含量变化均增加;抗菌物质对病菌菌丝细胞壁组成物质几丁质没有影响。     

枯草芽孢杆菌SN-02抑菌物质的分离、纯化及结构测定

为明确生防菌株Bacillus subtilis SN-02产生的抑茵物质的种类和组成,对其进行分离、纯化及结构测定.发酵滤液经盐酸沉淀,有机溶剂提取,薄层层析显色分析,初步确定该活性物质是一种具有闭合肽键的脂肽类物质.经Pharmadex LH-20精制后得到纯度为95.7%的淡黄色结晶状物质,液质联用检测到活性成分是分子量为1080、1035和1021 D的生物表面活性素.紫外吸收光谱表明该物质在210nm处有吸收峰,红外吸收光谱证实该分子的亲水基是一条肽链,疏水基部分是一脂肪酸分子,且为一种环状脂肽类物质.氨基酸分析表明该活性物质由4种氨基酸组成,且4种氨基酸的摩尔比为Glu∶Leu∶Val∶Asp=1∶4∶1∶1.     

嘧肽霉素高产菌株的选育

以不吸水链霉菌辽宁变种为出发菌株,经紫外线、亚硝酸诱变和紫外线与嘧肽霉素复合诱变,选育出了嘧肽霉素的高产菌株,抑菌圈直径由原来的20.5mm提高到36.4mm。传代培养5代表明,该高产菌株遗传特性稳定。     

烟草靶斑病菌内切多聚半乳糖醛酸酶基因endoPGs的克隆及表达特征分析

【目的】内切多聚半乳糖醛酸酶（endo polygalacturonases,endoPGs）是重要的致病因子之一。论文从烟草靶斑病菌（Rhizoctonia solani）强致病力菌株YC-9和弱致病菌株LF-2中克隆该致病基因,分析比较该基因的序列特征、进化关系和表达特性,研究其在与烟草互作过程的致病作用。【方法】通过比较GenBank中不同植物病原真菌的endoPGs序列设计简并引物,首先获得菌株YC-9及LF-2的endoPGs基因片段,再采用RACE技术克隆获得其cDNA全长序列;生物信息学分析比较其保守结构域及序列特征;采用MEGA 4.0软件构建endoPGs的系统进化树;通过real-time RT-PCR技术对强致病力菌株YC-9及弱致病力菌株LF-2的endoPGs与烟草K326互作的表达特性进行研究。【结果】克隆获得了烟草靶斑病菌强致病力菌株YC-9和弱致病力菌株LF-2的endoPGs的cDNA全长序列,分别命名为endoPG1和endoPG2,开放阅读框（ORF）长度均为1 086 bp,编码361个氨基酸;比较分析表明endoPG1和endoPG2的推测蛋白均具有PLNO3003基因家族保守结构域,其跨膜结构间存在差异;成功构建了该基因系统进化树,结果表明来自烟草靶斑病菌的endoPGs构成独立分支,且烟草靶斑病菌endoPG1及endoPG2同源关系最近;real-time RT-PCR表达特性分析结果显示,靶斑病菌endoPG1和endoPG2与烟草互作（接种）之后该基因的表达与未互作（不接种）的对照样品相比均呈明显上调趋势,同时endoPG1表达迅速且高于endoPG2。【结论】 烟草靶斑病菌强致病力菌株YC-9及弱致病力菌株LF-2的内切多聚半乳糖醛酸酶基因均具有PLNO3003基因家族的保守结构域,其推测蛋白的跨膜结构间存在差异,该推测蛋白与烟草靶斑病菌同源关系最近,且endoPG1和endoPG2的推测蛋白的同源性最高;内切多聚半乳糖醛酸酶基因的表达受与烟草互作的诱导,在不同致病力菌株中存在明显差异。     

不吸水链霉菌辽宁变种基因转移系统的建立

以嘧肽霉素生物合成阻断突变株UV2136为研究对象,建立了不吸水链霉菌辽宁变种的基因转移系统.UV2136对硫链丝菌素高度敏感,选择含有该抗生素标记的质粒pU702和pWHM3,探索其转化UV2136的可能性.结果表明:UV2136含有较强的限制修饰系统,采取热衰减法获得原生质体、原生质体热处理、冷处理、EDTA处理、质粒DNA变性等,均不能实现质粒pH702向UV2136的转化.来自非甲基化宿主E.coli ET12567的pWHM3也无法实现转化,而源于E.coli DH5α的甲基化pWHM3.可以低频转化菌株UV2136,转化效率分别为4转化子·μg-1 pWHM3,经自身修饰的pWHM3可实现高效转化,达到104转化子·μg-1pWHM3.     

嘧肽霉素一种新的生物活性组分分离纯化研究

通过生物活性检测发现Streptomyces tz92菌株嘧肽霉素发酵液中一种新的抗细菌生物活性物质,为了明确其适宜的分离纯化工艺,试验研究了利用大孔吸附树脂,硅胶柱层析和分子筛层析分离纯化该组分的条件和效果。试验结果显示,发酵液经过大孔树脂SP825L吸附50%甲醇洗脱、硅胶柱层析氯仿∶正丁醇∶甲醇∶乙酸=42∶2∶4∶2(体积比)洗脱、Sephadex LH-20 70%甲醇洗脱可以得到该组分纯品。     

烟草靶斑病室内药剂筛选

采用生长速率法和抑菌圈法测定了退菌特、腐霉利、多菌灵、甲基硫菌灵、代森锰锌、烯唑醇、菌核净、井冈霉素、苯醚甲环唑和嘧肽菌净10种药剂对烟草靶斑病菌的抑菌作用.生长速率法测定结果表明,代森锰锌和菌核净的抑菌作用最强,抑菌率高达100%;抑菌圈法测定结果表明,对病菌抑制效果最好的为菌核净,抑菌圈直径达53.4 mm.筛选出退菌特、甲基硫菌灵、代森锰锌、烯唑醇、菌核净、苯醚甲环唑和嘧肽菌净7种药剂进行室内毒力测定,结果表明,烯唑醇、菌核净、嘧肽菌净、退菌特和代森锰锌5种药剂对病菌都有较强的抑菌作用,其中烯唑醇对病菌毒力最强,EC<,50>为0.013 3μg/mL.