猪细小病毒SYBR Green I荧光定量PCR诊断试剂盒的研制

根据GenBank中猪细小病毒VP2基因序列设计特异性的引物,PCR扩增获得猪细小病毒VP2基因片段,并克隆到p MD-18T载体上作为阳性标准品。通过对SYBR Green I荧光定量PCR反应条件的优化,建立了猪细小病毒的SYBR Green I荧光定量PCR诊断方法,以此为基础研制出试剂盒。试剂盒扩增产物的熔解曲线分析只出现1个单特异峰,无引物二聚体,对PRV、PCV-2、E.coli、CSFV、PRRSV均无阳性信号扩增,可重复性好,测灵敏度可达1.0×101拷贝/μL。结果表明,研制的猪细小病毒SYBR Green I实时荧光定量PCR试剂盒具有特异、灵敏、快速、重复性好等优点,适合于猪细小病毒临床样品的检测。     

猪细小病毒SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR诊断试剂盒的研制

根据GenBank中猪细小病毒VP2基因序列设计特异性的引物,PCR扩增获得猪细小病毒VP2基因片段,并克隆到pMD-18T载体上作为阳性标准品.通过对SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR反应条件的优化,建立了猪细小病毒的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR诊断方法,以此为基础研制出试剂盒.试剂盒扩增产物的熔解曲线分析只出现1个单特异峰,无引物二聚体,对PRV、PCV-2、E.coli、CSFV、PRRSV均无阳性信号扩增,可重复性好,测灵敏度可达1.0×101拷贝/μL.结果表明,研制的猪细小病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR试剂盒具有特异、灵敏、快速、重复性好等优点,适合于猪细小病毒临床样品的检测.     

猪圆环病毒 2型 LAMP 诊断方法 的建立及初步应用

根据 GenBank 中的猪圆环病毒 2 型 ORF2 基因序列,设计合成 2 对引物,通过对环介导等温,LAMP 扩 增条件的优化袁敏感性、特异性试验,成功建立了猪圆环病毒 2 型 LAMP 诊断方法。 敏感性结果显示,建立的 LAMP 诊断方法最低核酸检测量为 0.30 pg/L袁而 PCR 诊断方法最低核酸检测量为 30 pg/L曰特异性结果显示,猪圆环病毒 1 型、猪细小病毒、猪伪狂犬病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒的扩增结果均为阴性。 对 95 份自然感染病猪样 品的检测结果表明,该 LAMP 方法检测结果与 PCR 检测结果符合率为 95.8%。 整个扩增反应可在 30 min 内完成,结 果肉眼可见,为猪圆环病毒 2 型的现场快速诊断提供了一种简便可行的方法,能够满足基层现场快速检疫的需要。     

1例人工养殖大鲵腹水病的诊治

为了对大鲵患病情况进行确诊,试验采用临床症状观察、病理解剖及实验室诊断的方法。结果表明：大鲵为嗜水气单胞菌和维氏气单胞菌的混合感染;通过采取综合有效的防治措施,大鲵养殖场疫情得到有效控制。     

贵州山羊关节炎脑炎的调查研究：山羊关节炎脑炎血清学诊断

本研究采用标准AGID方法,利用OPP、CAE标准抗原和阳性血清检测山羊体内CAEV抗体,共检测山羊550只。其中进口萨能奶山羊150只,杂交奶山羊100只;繁殖羔羊100只(包括进口奶山羊和地方山羊);地方山羊200只(黑山羊100只,白山羊100只)。检测结果是:CAE阳性30例,占总数的7.5％,可疑5例。阳性羊中,纯萨能奶山羊16例,占检查奶山羊总数的9.3％,可疑3例;杂交山羊8例,占调查杂交山羊总数8％;繁殖羔羊2例,占调查羔羊总数2％;地方山羊(黑、白山羊)6例,占调查地方山羊总数3％,地方山羊CAE可疑2例。将4113和104号CAE阳性萨能奶山羊关节液送新疆兽医所作病毒分离,目前已分离出两株CAEV。调查结果证明,我省山羊群中具有CAE病流行,本病不仅在进口奶山羊中流行,而且也能传染给与它们接触密切的地方山羊。     

畜禽乙型肝炎研究进展

通过资料综述了国内学者对家畜家禽的乙型肝炎研究新进展。学者主要采用人医常用的ELISA试剂盒和聚合酶链反应PCR检测家畜家禽乙型肝炎病。其结果：畜禽对乙型肝炎病毒表面抗原HBsAg的携带率分别为，奶牛平均24.1%；黄牛平均15.6%；猪平均20%；羊平均15%；鸡平均12%；鸭平均50～70%；鹅平均14.5%。但用针对HBV表面抗原基因不同部位的两结引物作PCR分析，结果未能扩增出特异片段。     

贵州奶牛传染性胸膜肺炎的血清学调查

牛肺疫亦称牛传染性胸膜肺炎（contagious bovine pleuropneumonia，CBPP），是由丝状支原体丝状亚种（Mycoplasma mycoides subsp．mycoides）SC型（牛致病性）所引起的对牛危害严重的一种接触性传染病。病程多呈亚急性或慢性经过，有时也呈急性经过。其主要侵害肺和胸膜，病理剖解的特征性变化为肺小叶淋巴结缔组织和肺泡组织发生浆液-纤维蛋白性胸膜炎和纤维蛋白性肺炎。     

虹彩病毒和柱状黄杆菌混合感染大鲵的诊治

2012年7月,贵州省某大鲵养殖场发生了以大鲵体表和四肢多处溃烂、内脏器官出现充血、出血为特征的疾病,经过临床症状观察、病理剖检及实验室诊断,诊断为虹彩病毒(Iridovirus)和柱状黄杆菌(Flabobacterium columnare)的混合感染.通过采取综合有效的防治措施,大鲵疫情得到有效控制.     

1型鸭疫里氏杆菌的分离鉴定及其ompA基因B细胞表位预测

本研究从贵州发病鸭中分离到1株致病菌,经生化试验、16S rRNA序列分析、血清学试验和动物回归试验,鉴定为1型鸭疫里氏杆菌(RA),药敏试验结果表明,其对头孢拉定、头孢曲松钠、头孢噻肟和氟苯尼考高度敏感;同时根据GenBank中鸭疫里氏杆菌ompA基因序列,设计1对引物,成功克隆出鸭疫里氏杆菌ompA基因,扩增产物大小为1149 bp。采用DNAStar Protean程序,综合运用二级结构、亲水性、可塑性和抗原性指数等参数,对鸭疫里氏杆菌ompA基因的氨基酸序列进行了B细胞表位预测,为进一步研究鸭疫里氏杆菌表位疫苗和分子诊断技术的建立奠定基础。