小反刍兽疫N5蛋白的原核表达及间接ELISA检测方法的建立

【目的】建立一种适用于PPRVN蛋白抗体的间接ELISA检测方法,应用于PPR防疫.【方法】根据GenBank中登录小反刍兽疫病毒(PPRV)Nigeria 75/1株N基因序列进行人工合成,设计1对特异引物对N5基因扩增,经测序分析后将N5基因片段和原核表达载体pET-32a(+)相连接,成功构建pET-32a-N5质粒.将pET-32a-N5转化于TransB(DE3)原核表达感受态细胞后用IPTG诱导表达获得重组蛋白,经SDS-PAGE分析和Western-blot鉴定,重组蛋白分析具有良好的反应原性.【结果】利用原核表达纯化的PPRV N重组蛋白作为包被抗原,初步建立了一种能够检测针对PPRV N蛋白抗体的间接ELISA方法.用建立的方法对112山羊份血清进行了抗体检测,该方法与竞争ELISA试剂盒对比,临床符合率94.8%.【结论】该方法具有较好的敏感性、重复性和特异性.     

西藏茎直黄芪中苦马豆素的纤维素酶法提取和气相色谱法检测研究(英文)

疯草是一种有毒植物,广泛分布在世界大部分地区,牲畜采食后容易引起中毒或死亡,给养殖业造成严重的经济损失。茎直黄芪属于疯草的一种,它主要分布于中国西藏,是一种严重危害到当地畜牧产业的有毒植物。本研究的目的是利用纤维素酶法提取茎直黄芪中苦马豆素并进行气相色谱法检测,确定最佳提取工艺条件。通过单因素试验、正交试验和方差分析优化确定了苦马豆素的酶法提取工艺条件,并用气相色谱法测定了提取物中苦马豆素的含量。优化的最佳提取条件为:粉碎目数为40目,料液比1∶40,纤维素酶添加量3.5%、酶解时间3.0 h。在优化提取条件下,苦马豆素的提取率可达到0.003 941%。研究表明,纤维素酶法快速、高效、方便、节能,有利于茎直黄芪中苦马豆素的提取。     

茎直黄芪中生物碱苦马豆素提取方法比较研究

用微波辅助法和纤维素酶法提取茎直黄芪中有效成分苦马豆素,对两种方法提取效果进行比较.结果表明,纤维素酶法和微波辅助提取法提取茎直黄芪中有效成分苦马豆素提取率分别为39.41 mg/kg和92.64 mg/kg,微波辅助提取法提取效果较好.     

减蛋综合征病毒环介导等温扩增检测方法的建立

根据GenBank登录的减蛋综合征病毒(EDSV)六邻体基因的保守区,设计了3对环介导等温基因扩增(LAMP)引物,优化反应体系,并对其灵敏性、特异性进行验证.结果表明:LAMP优化后的反应体系为外引物浓度0.1μm01·L-1,内引物浓度0.8 μmol·L-1,环引物浓度0.4μmol·L-1,Mg2+浓度8.0 ...     

甘肃省健康猪群猪链球菌分离株的耐药性检测

为了解甘肃地区表现健康猪群携带猪群猪链球菌的情况,从甘肃省武威、兰州、庆阳等地采集到152份健康猪扁桃体分离猪链球菌,结果共分离到67株,分离率约44%,67株猪链球菌的耐药性检测表明,全部猪链球菌分离株具有多重耐药性,其中1株对22种抗生素中的16种产生耐药性.用我国致病性链球菌2型特有的89k毒力岛序列特异性引物对67株猪链球菌进行PCR鉴定,其中1株能够扩增出该特异性片段,表明在该地区健康猪群中存在致病性2型猪链球菌.     

山羊痘的流行及防治措施

山羊痘是由山羊痘病毒属的痘病毒引起的羊的一种急性、热性、接触性传染病。文章从山羊痘流行病学、症状、诊断和防治措施等方面对山羊痘进行综述。     

狂犬病病毒核蛋白的原核表达及纯化

采用RT-PCR方法扩增出狂犬病病毒(RV)CVS株核蛋白(N)基因,并将目的基因亚克隆入原表达载体pET-28 a(+)中,经PCR、双酶切以及序列分析,结果表明:已成功构建了重组质粒.将重组质粒转化至大肠埃希氏菌Rossetta(DE3),在37℃,1 mmol/L IPTG条件下进行诱导表达.诱导产物经SDS-PAGE分析,在分子量约为54 KD附近出现较粗的目的带,与预期的目的蛋白分子量相符合.经表达条件优化,用1 mmol/LIPTG在37℃诱导表达5 h,表达量达到最高,Western-Blotting鉴定目的蛋白有较强的免疫原性.为狂犬病毒的N蛋白的新型疫苗的制备奠定了基础.     

猪戊型肝炎病毒甘肃分离株衣壳蛋白基因序列分析

为进行国内猪戊型肝炎病毒(HEV)衣壳蛋白基因特征研究,参照GenBank中已发表的戊型肝炎病毒核苷酸序列,设计了1对扩增HEV衣壳蛋白(Y)基因的引物,利用RT-PCR等方法成功克隆出HEV甘肃分离株swCH189的Y基因cDNA片段,并与国内其他9株典型HEV分离株进行序列分析,用DNAstar软件进行序列同源性分析,PHYLIP软件绘制基因进化树。结果表明,swCH189株的Y基因与国内9株典型HEV分离株间的核苷酸序列同源性为79.6%～91.8%,推导的氨基酸序列同源性为91.4%～98.85%。基因进化树显示swCH189与基因Ⅳ型swCH25株亲缘关系最近,在同一分支上,属于基因Ⅳ型。     

中兽药防治动物疫病研究现状

近年来,随着科学技术的进步和畜牧业水平的提高,我国传统的中兽医理论(正气存内,邪不可干)和中草药的物性(阴阳寒凉温热)、物味(酸苦甘辛咸)、物间关系及辅以现代技术和生产工艺生产的纯天然药物和纯天然中草药饲料添加剂,已在世界各地悄然兴起.     

两种不同抗原制备方法对大肠杆菌O_(157):H_7单克隆抗体亚类的影响

单克隆抗体技术已深入到医学和生物学的各个领域,成为一种必不可少的工具,具有极为重要的理论研究价值和实用价值。据报道,全菌抗原的主要抗原位点是脂多糖(LPS),刺激机体产生的IgG抗体主要针对脂多糖,故不同血清型间无交叉保护作用;而提纯的外膜蛋白(OMP)作为抗原刺激机体产生的