甘薯基因组DNA高效快速提取方法

甘薯基因组DNA传统的CTAB提取法,提取DNA质量好,但提取效率不高.为满足甘薯分子标记辅助育种、核心种质和遗传连锁图谱构建以及转基因植株检测的需要,通过对传统的CTAB法进行改进,本研究建立了一种高效快速价廉的甘薯及其近缘野生种基因组DNA提取方法,适合于PCR扩增以及AFLP分析.本方法使用1.5 mL离心管和专用棒槌,整个过程转管1次,提取的DNA主带明显,片段大小一致,得率达5 μg/mg叶片冻干粉.提取质量可靠,RAPD-PCR和酶切后AFLP扩增,与传统CTAB法提取DNA扩增结果没有明显差异.与传统的CTAB方法相比,该方法快速(提取过程不足30 min),效率高,从10 mg叶片冻干粉中一次可提取50 μg左右的DNA模板,操作简便,污染降低,实用性强.     

拟南芥MYBC1转录因子介导ABA调节的种子萌发

MYBC1编码具有单一结构域的MYB类转录因子,前期研究中发现它调控拟南芥的抗冷性.为了进一步揭示MYBC1与干旱、盐及ABA的关系,采用Real-time RT-PCR方法分析了MYBC1基因在拟南芥的根中的表达特性.结果表明,在拟南芥的根中MYBC1不能被干旱与高盐诱导,但能够被冷及外源的ABA诱导表达.通过对my...     

慢照射与茎尖培养相结合筛选甘薯同质突变体

甘薯品种玉丰、高系14号和Kandaba在生育期内用60Coγ射线慢照射, 对照射后的材料进行茎尖组培, 通过体细胞胚胎发生途径再生出大量植株. 将这些再生植株移栽到大田, 对辐照后代的形态特征和经济特性进行了调查和分析. 结果表明, 辐照后代M1V 1和M1V2在顶叶形、叶形、顶叶色、叶脉色、脉基色、薯形及薯肉色、产量、干物率、食     

甘薯及其近缘野生种种间体细胞杂种植株的有效再生

将甘薯品种栗子香的胚性悬浮细胞原生质体和近缘野生种I.triloba的叶柄原生质体用PEG融合法融合后,培养在含有0.05mg/L2,4-D和0.5mg/L KT的改良MS液体培养基中。培养10周后,形成直径达1～2mm的小愈伤组织。将这些小愈伤组织转移到添加0.05mg/L2,4-D和0.5mg/L KT的MS培养基上,愈伤组织迅速增殖。将其中的78个愈伤组织培养在添加2.0mg/L BAP的MS培养基上,愈伤组织形成了不定根。将具有不定根的愈伤组织进一步培养在MS基本培养基上,共获得137株再生植株。过氧化物酶同工酶及RAPD分析表明,所获得的137株再生植株均为栗子香和I.triloba的种间体细胞杂种植株。     

甘薯胚性乳浮细胞的辐射诱变和同质突变体的获得

用＾６０Ｃｏγ射线辐照甘薯品种高系１４号和栗子香的胚性悬浮细胞,辐射剂量为５～２５Ｇｙ,将辐照后的胚性悬浮细胞进行培养,获得了大量再生植株,即辐照后代Ｍ１Ｖ１,将这些辐照后代移植于大田,对其主要形态特征和经济特性进行了调查,结果表明,辐照后代在叶形,叶色,薯皮色,薯肉色,干物率及食味等性状上发生了是显变异,获得了薯皮色同质突变体和一批干物率高或者食味优的突变体。     

构建多维大学生实践创新教育平台的探索与实践

大学生科技创新能力需要通过实践培养。华中农业大学针对机械类专业进行了实验室、校内实训基地、创新创业实践中心和校外企业实践基地的建设与功能优化,为大学生创新能力培养搭建了物理平台;建立实践创新教育管理体系和教师队伍,为大学生创新能力培养奠定了师资基础;修订了人才培养方案,为大学生创新能力培养提供了制度保障。在大学生实践创新教育方面取得了一定成效。      

甘薯肌醇-1-磷酸合酶基因的表达分析

采用RT-PCR技术克隆了甘薯肌醇-1-磷酸合酶基因的cDNA编码区,命名为IbMIPS-1.该基因由1 530个碱基组成,编码510个氨基酸,与蓖麻、烟草、芝麻、大豆肌醇-1-磷酸合酶的氨基酸序列比对表明,其同源性很高.将克隆的IbMIPS-1基因连接到pQE30载体,构建原核表达载体.实时定量RT-PCR分析结果表明,在茎线虫侵染甘薯块根后,IbMIPS-1基因被诱导表达,并且在侵染后的第4天表达量最高.推测该基因可能参与甘薯抗茎线虫病信号传导,以诱发甘薯茎线虫病抗性反应.     

不同初始含水率对沼渣和秸秆混合堆肥过程的影响

为了实现沼渣的无害化处理和资源化利用,试验在沼渣污泥混合物中按一定比例加入切碎的稻草进行混合堆肥发酵,该混合物初始含水率分别设置为55%、60%、70%3个水平,对3堆堆肥在堆肥过程中进行温度、含水率、有机质等指标的测定和分析,以期找到适合高效处理堆肥过程的最佳控制因素及水平。对堆肥过程研究分析发现:3堆堆肥发酵到一定阶段时,将其含水率调节至70%后,相应指标参数发生了一系列明显变化,表明堆肥过程中适当补充水分能够加速堆肥的进程。     

SCMRP基因原核表达及多克隆抗体制备

SCMRP基因是根据大豆密码子偏向性,采用生物信息学方法对玉米胚乳蛋白基因(MRZP)进行改造并合成的新基因,是适合在大豆中高效表达的高含硫氨基酸基因,可用于豆科作物的品质改良。将新合成的SCMRP基因构建到含有6×His标签序列的原核表达载体pET-32b上,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株中,SDS-PAGE和Western blot分析表明:经IPTG诱导,转化的大肠杆菌BL21(DE3)菌株中能正常表达出约20ku的目标蛋白质,IPTG最佳诱导表达时间是6h,融合蛋白质以可溶组分形式存在。菌体总蛋白经金属鳌合层析纯化后免疫新西兰大耳兔,制备兔抗血清,经Western blot和琼脂板双向扩散试验表明,已纯化出SCMRP-6×His融合蛋白质,成功制备出SCMRP兔多克隆抗体,抗血清效价达到1:256。上述结果表明,新合成的SCMRP基因是能够在生物体中正常表达的完整基因,制备的SCMRP兔多克隆抗体可用于转SCMRP基因植物蛋白质表达分析。研究结果将为通过转基因技术改良豆科植物含硫氨基酸品质奠定重要基础。     

中国甘薯主要育成品种的遗传多样性及遗传趋势

用ISSR和AFLP分子标记手段,对中国不同时期不同甘薯种植区的26份主要育成品种进行遗传多样性和遗传趋势分析,结果表明:①17条ISSR引物共扩增出410条多态性谱带,平均每条引物扩增24.1条多态性谱带,10对AFLP引物共扩增出203条多态性谱带,平均每对引物组合扩增20.3条多态性谱带,2种标记均具有较高的分辨力,可以用于甘薯品种的遗传多样性分析.②甘薯主要育成品种的遗传相似系数为 0.487 7～0.774 3,平均0.564 0,表明中国甘薯主要育成品种的遗传多样性程度低,遗传相似程度高,遗传基础狭窄.通过UPGMA聚类分析,26份品种在遗传相似系数为0.55处可分为2类.③南方薯区主要育成品种的遗传多样性和遗传差异高于长江中下游薯区和北方薯区,北方薯区和长江中下游薯区主要育成品种之间的遗传差异较小,但与南方薯区主要育成品种之间的遗传差异较大.④1990年前甘薯主要育成品种的遗传相似程度高,1990年后育成品种的遗传相似程度依然很高,遗传多样性程度没有明显改变.因此,在未来甘薯遗传改良中,可以通过加强不同薯区育种亲本的交换,逐步改变目前中国育成品种遗传基础狭窄的局面.