应用PCR技术检测空肠弯曲菌及结肠弯曲菌的研究

本研究根据空肠弯曲菌及结肠弯曲菌的16s rRNA基因相同保守序列来设计引物,建立了一种PCR检测方法,该方法具有较强的特异性及灵敏性,其对空肠弯曲菌及结肠弯曲菌的最低检测限度为5 CFU/mL,它无需增菌培养过程可以直接对样品进行检验,在对鸡肉样品空肠弯曲菌及结肠弯曲菌的检测中取得了较好的效果.     

H5N1亚型禽流感病毒核蛋白基因的克隆及分子进化分析

用RT-PCR法,以1株h5N1亚型禽流感病毒RNA为模板,扩增了NP全基因cDNA.将cDNA克隆于pMD18-T载体,并对其进行测序.测序结果表明所克隆的1542个核苷酸的片段包含了核蛋白完整阅读框架,其中编码区为1497个核苷酸,编码498个氨基酸.将其序列与6株A型流感病毒NP基因序列进行比较,各毒株之间NP基因核苷酸序列同源性为92.5%～95.9%,编码的氨基酸同源性为97.0%～98.4%.本研究通过分子进化分析揭示了各毒株间的亲源关系.     

基于Eu~(3+)标记的喹乙醇TRFIA研究

为了评价Eu~(3+)免疫探讨标记喹乙醇克隆抗体的效果,以环化二乙烯三胺五醋酸酐(cy DTPA)为螯合剂,将Eu~(3+)偶联到喹乙醇单克隆抗体(OLA-m Ab)上,制备喹乙醇铕标抗体(Eu~(3+)-OLA-m Ab),并在此基础上进行TRFIA反应条件的优化。结果表明,优化后的直接竞争时间分辨荧光免疫分析(TRFIR)反应条件为包被抗原(OLA-OVA)浓度1.2μg·m L-1、铕标抗体浓度2.0μg·m L-1、CBS浓度0.05 mol·L-1、PBS稀释液0.01 mol·L-1、p H值7.0,采用含5%甲醇的PBS配制喹乙醇标样。反应条件筛选优化后建立标准曲线,其IC50和IC10浓度分别为9.29、0.66 ng·m L-1。以饲料为样品进行添加回收率试验,其回收率处于84.80%~113.60%之间,变异系数小于14%。本研究建立的TRFIA方法具有灵敏度高、稳定性好等特点,为下一步研发喹乙醇TRFIA快速检测试剂盒奠定了基础。     

基于双功能螯合剂NOTA的重金属铜人工抗原的合成与鉴定

为研究杂环类双功能螯合剂在重金属铜人工抗原制备方面的效果,以2-S-(4-氨基苯)-1,4,7三氮杂环壬烷-1,4,7-三乙酸(P-NH_2-Bn-NOTA,简写为NOTA)为双功能螯合剂,采用戊二醛法将重金属铜离子分别与载体蛋白BSA、OVA偶联制备免疫原和包被原,并用合成的免疫原免疫制备免多克隆抗体,建立间接竞争ELISA(ic-ELISA)。结果表明,所建立的ic-ELISA线性回归方程为y=7.8632Ln(x)+9.6765(R2=0.9934),IC50和IC20值分别为168.70、3.72 ng·m L-1。交叉反应试验结果显示,除与锌交叉反应率达16%外,该抗体与其他重金属铁、铅和镉的交叉反应率均小于5.6%。本研究成功合成了重金属铜人工抗原并制备了兔多克隆抗体,为杂环类双功能螯合剂应用于重金属快速检测技术奠定了理论基础。     

赤星病对不同部位烟叶产量及化学成分的影响

为了探究赤星病对烟叶不同部位产量、产值及品质的影响,在烟草成熟期,采集赤星病不同发病程度下部叶、中部叶及上部叶进行烟叶产量、产值及化学成分分析。结果表明,受赤星病为害后,上部叶为害达9级、中下部叶为害达3级时,烟叶产量出现损失。各部位烟叶受赤星病为害达1级时,产值开始下降,与对照相比差异显著,并随着为害的加重,产值下降逐渐增大。下部叶病害级别与总氮、烟碱含量呈极显著强正相关,与总糖、还原糖、淀粉含量呈显著负相关;中部叶与总糖、还原糖、淀粉、总氮、烟碱、钾、氯含量不存在相关性;上部叶与总糖、还原糖含量呈极显著强负相关,与淀粉含量呈显著负相关,与总氮、钾含量呈极显著强正相关。     

烟草野火病防治技术研究

根据烟草野火病的发生特点,选择低毒或营养调控药剂,按独用或混用的方式设置田间试验研究野火病的最佳防治方案。结果表明:在烟草团棵期以前,当野火病零星发生时,按首次20%噻菌铜悬浮剂1 000倍液,第二次1%诺尔霉素水剂1 000倍液+能量金800倍液+斯德考普1 500倍液,第三次20%噻菌铜悬浮剂1 000倍液,均叶面喷雾,每次施药液600 kg/hm~2,间隔期10 d的方式进行处理,能有效控制团棵前野火病的发生。在烟草现蕾以后,当野火病零星发生时,按首次20%噻菌铜悬浮剂+40%菌核净可湿性粉剂,第二次20%噻菌铜悬浮剂,第三次1%诺尔霉素水剂,均稀释1 000倍液叶面喷雾,每次施药液750kg/hm~2,间隔期10 d的方式进行处理,能有效控制现蕾后野火病的发生。     

伽氏疏螺旋体尚志株P66基因的原核表达与鉴定

为获得伽氏疏螺旋体尚志株（B. garinii SZ）的P66蛋白,本研究从培养的螺旋体菌液中提取总RNA,反转录合成第一链cDNA,利用PCR扩增P66基因。将目的片段连接表达载体pET-30a（+）,并转化大肠杆菌表达菌BL21（DE3）,经PCR、双酶切及测序验证正确后,进行IPTG诱导表达和纯化,然后将纯化的融合蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体。SDS-PAGE结果显示,获得约70 ku的表达产物;Western blotting分析表明,表达产物与抗His标签的小鼠单克隆抗体、螺旋体鼠源阳性血清、兔抗P66多克隆抗体均能发生反应,获得的多克隆抗体也可识别天然蛋白。本试验成功表达了B. garinii SZ株P66蛋白,并制备了多克隆抗体,为后续B. garinii SZ株P66蛋白的功能研究奠定了基础。     

不同施氮量、种植密度及灌水时期对高粱产量的影响

研究氮肥用量、种植密度、灌水时期对高粱产量的影响,结果表明:通杂108、通杂126在施氮量为20 kg/666.67 m2时,产量最高;二者在种植密度为8 000株/666.67 m2时产量最高,分别为609.2、530.4 kg/666.67 m2,通杂126种植密度为8 000、8 500株/666.67 m2时产量相差不大;通杂108在抽穗开花期、通杂126在拔节孕穗期灌水产量最高。     

饲用高粱品种品质性状的比较及评价

为筛选出适宜通辽地区种植的饲用高粱(Sorghum bicolor)品种,2011 年对8个饲用高粱品种进行了田间比较试验,系统测定并分析了与动物生产性能相关的粗蛋白、中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维的含量,及鲜草产量、干草产量、干鲜比。结果表明:大力士和甜格雷兹品质性状均优于其他6个品种,且品种间差异均达到极显著水平(P<0.01),通甜1号草产量最高,而品质略低于大力士和甜格雷兹,因此大力士、甜格雷兹适合作青饲利用,通甜1号适合作青贮利用,这3个品种在通辽地区均具有推广价值。     

吉林省梅花鹿副结核病血清流行病学调查

摘 要：调查2012年吉林省梅花鹿副结核病感染现状,为吉林省今后制订梅花鹿副结核病预防控制规划提供科学依据。采集吉林省富有代表性的4个梅花鹿养殖地区的630份血清样本,用ELISA方法进行副结核病血清流行病学调查。吉林省梅花鹿血清中副结核分枝杆菌抗体检测阳性率为18.73%,其中,辽源的梅花鹿副结核病阳性率为25.00 %,为吉林省副结核病之首,而四平的梅花鹿副结核病的阳性率为11.86%,明显低于其他3个地区。通过对梅花鹿在年龄与性别方面进行统计学两两比较分析发现,仔鹿与育成鹿及成年鹿之间均存在显著差异(P<0.05),育成鹿与成年鹿二者之间没有统计学意义(P>0.05),而不同性别鹿群的副结核病阳性率差异性不显著(P>0.05)。吉林省梅花鹿副结核病流行不容乐观,提示广大饲养者及相关部门应该高度重视梅花鹿副结核病的防治工作。