抗毒死蜱单克隆抗体的研制

用与牛血清蛋白(BSA)交联的毒死蜱人工抗原(CHBu-BSA)免疫的BALB/C鼠脾细胞与SP2/0鼠骨髓瘤细胞融合,经筛选和克隆,得到了1株能稳定分泌毒死蜱抗体的单克隆细胞株(1G10),1G10 的抗体类型及亚类均为IgG1, 其轻链为κ链.制备单克隆抗体腹水,腹水的间接ELISA效价在1×10-6以上.该单克隆抗体与毒死蜱特异性结合反应的50%抑制质量浓度为80.8 μg·L-1,与其他毒死蜱结构类似物无交叉反应.     

基于双特异性单克隆抗体的克百威和三唑磷多残留ELISA分析方法研究及在环境样品中应用

采用杂交-杂交瘤技术制备抗克百威和三唑磷的双特异性单克隆抗体并进行纯化,通过对反应模式、工作浓度、包被缓冲液、有机溶剂、离子强度、pH值等条件优选,建立优化的ELISA分析方法,对克百威和三唑磷的线性回归方程分别为Y=20.0091n(x)-9.9293(R2 =0.9959)和Y=19.486In(x)+39.752 (R2=0.9945),抑制中浓度I50分别为20ng·mL-1和1.69ng· mL-1,最低检测限I20分别为4.46ng·mL-1和0.36ng· mL-1.建立的ELISA分析方法对水、土壤等环境样品中克百威和三唑磷的平均添加回收率介于88.4％ ～117％之间,说明所制备的双特异性单克隆抗体和建立的ELISA分析方法可靠,可应用于克百威和三唑磷的多残留免疫分析.     

基于Eu~(3+)标记的喹乙醇TRFIA研究

为了评价Eu~(3+)免疫探讨标记喹乙醇克隆抗体的效果,以环化二乙烯三胺五醋酸酐(cy DTPA)为螯合剂,将Eu~(3+)偶联到喹乙醇单克隆抗体(OLA-m Ab)上,制备喹乙醇铕标抗体(Eu~(3+)-OLA-m Ab),并在此基础上进行TRFIA反应条件的优化。结果表明,优化后的直接竞争时间分辨荧光免疫分析(TRFIR)反应条件为包被抗原(OLA-OVA)浓度1.2μg·m L-1、铕标抗体浓度2.0μg·m L-1、CBS浓度0.05 mol·L-1、PBS稀释液0.01 mol·L-1、p H值7.0,采用含5%甲醇的PBS配制喹乙醇标样。反应条件筛选优化后建立标准曲线,其IC50和IC10浓度分别为9.29、0.66 ng·m L-1。以饲料为样品进行添加回收率试验,其回收率处于84.80%~113.60%之间,变异系数小于14%。本研究建立的TRFIA方法具有灵敏度高、稳定性好等特点,为下一步研发喹乙醇TRFIA快速检测试剂盒奠定了基础。     

基于双功能螯合剂NOTA的重金属铜人工抗原的合成与鉴定

为研究杂环类双功能螯合剂在重金属铜人工抗原制备方面的效果,以2-S-(4-氨基苯)-1,4,7三氮杂环壬烷-1,4,7-三乙酸(P-NH_2-Bn-NOTA,简写为NOTA)为双功能螯合剂,采用戊二醛法将重金属铜离子分别与载体蛋白BSA、OVA偶联制备免疫原和包被原,并用合成的免疫原免疫制备免多克隆抗体,建立间接竞争ELISA(ic-ELISA)。结果表明,所建立的ic-ELISA线性回归方程为y=7.8632Ln(x)+9.6765(R2=0.9934),IC50和IC20值分别为168.70、3.72 ng·m L-1。交叉反应试验结果显示,除与锌交叉反应率达16%外,该抗体与其他重金属铁、铅和镉的交叉反应率均小于5.6%。本研究成功合成了重金属铜人工抗原并制备了兔多克隆抗体,为杂环类双功能螯合剂应用于重金属快速检测技术奠定了理论基础。     

抗克百威单克隆抗体的研制

用与牛血清蛋白(BSA)交联的克百威人工抗原(BFNB-BSA)免疫的BALB/C鼠脾细胞与SP2/0鼠骨髓瘤细胞融合,经筛选、克隆,得到1株能稳定分泌克百威抗体的单克隆细胞株(1E8)。鉴定结果表明,1E8的抗体类型及亚类均为IgG1,其轻链为κ链。制备单克隆抗体腹水,腹水的间接ELISA(酶联免疫吸附分析)效价在1×10-6以上。直接ELISA线性回归方程为y=15.70lg(x)-5.879 5,r2=0.990 4,抑制中浓度IC50=35.1μg.L-1,最低检测限IC20=5.2μg.L-1。该单克隆抗体与克百威特异性结合反应的50%抑制质量浓度为35.1μg.L-1。除丁硫克百威以外与其他克百威结构类似物无交叉反应。     

青枯灵在稻田环境中的残留与消解动态

研究了杀菌剂青枯灵的残留分析方法及其在水稻植株、水样和土壤中的消解动态和最终残留。稻株、谷壳、糙米、水样和土壤经丙酮提取、液液分配及中性氧化铝柱净化，用高效液相色谱法测定了残留量。结果表明：青枯灵在稻株和田水中降解迅速，半衰期小于2d，在土壤中的半衰期5．8d。     

浙江省农业标准化发展现状与对策建议

介绍浙江省农业标准化体系建设发展历程,分析建设现状、特点和存在的问题,并提出对策建议。     

红娘鱼降血压肽的酶解制备工艺优化及酶解产物的抗氧化活性研究

为有效利用红娘鱼制备降血压肽,以红娘鱼鱼糜为原料提取蛋白,并对其进行酶解制备降血压肽。以血管紧张素转换酶ACE抑制率和水解度为指标,通过响应面分析法对酶解红娘鱼鱼糜蛋白制备降血压肽的工艺条件进行优化,并对最优条件下制备的酶解产物进行分子量和抗氧化活性测定。结果表明,碱性蛋白酶是制备降血压肽的最适蛋白酶,响应面法优化制备降血压肽的最佳酶解条件为pH值9、酶与底物的比值(酶底比)1.4%、温度54℃、时间2 h,此条件下酶解制得的降血压多肽ACE抑制率理论值为88%,实际值为89.3%;经高效液相色谱(HPLC)分析可得酶解产物相对分子量<2 000 Da。通过测定酶解产物样品的1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除率、羟自由基(·OH)清除率及还原力判定其体外抗氧化活性,结果表明酶解产物具有较强抗氧化活性。本研究结果为红娘鱼的高值化利用提供了数据支持和理论基础。     

氟磺胺草醚在模拟水生生态系统中的行为特征

采用模拟水生生态系统方法,运用放射性示踪技术研究了14C-氟磺胺草醚在模拟金鱼藻-麦穗鱼-底泥水生生态系统中的分配、消长等行为特征,并进行回归分析,建立了数学模型。结果表明,穴1雪水体中氟磺胺草醚由于沉降、底泥吸附、鱼体摄取及金鱼藻的吸附、吸收而使其在水体中的含量迅速下降并趋于稳定,其消失动态符合单项指数衰减规律,Cw=0.12221e-2.96823t 0.04778;穴2雪底泥对氟磺胺草醚有较强的吸附能力,引入药剂3d内吸附量迅速上升至最高点(0.362mg·kg-1)后下降,5d内就达到吸附动态平衡;穴3雪金鱼藻和麦穗鱼中氟磺胺草醚含量在处理后1d达到最大值(分别为3.169、1.233mg·kg-1),然后逐渐下降至近稳定,其消失动态(1￣25d)同样符合单项指数衰减规律,分别为:Ch=2.76517e-0.28031t 1.03765、Cf=0.76765e-0.11218t 0.45303;穴4雪金鱼藻和麦穗鱼均对氟磺胺草醚有明显的生物富集现象,其浓集系数CF值均在1d内达到最大(分别为59.21、23.20),然后缓慢下降趋于稳定。     

庆大霉素单克隆抗体的研制及ELISA分析方法的建立

用与牛血清蛋白(BSA)交联的庆大霉素人工抗原(GM-BSA)免疫的BALB/C鼠脾细胞与SP2/0鼠骨髓瘤细胞融合,经筛选、克隆,得到1株能稳定分泌抗庆大霉素单抗的杂交瘤细胞株(6H8),经鉴定6H8的抗体类型及亚类均为IgG1,其轻链为κ链.制备单克隆抗体腹水,腹水的间接ELISA效价在1×10-7以上.该单克隆抗体与庆大霉素结构类似物均无交叉反应,具有高度特异性.以制备的单抗建立间接竞争ELISA方法,其线性回归方程为y=16.122ln(x)-2.0143(R2=0.9934),抑制中浓度IC50为25.2μg·L-1,最低检测限IC20为3.9μg·L-1.竞争ELISA方法检测鲜奶中的庆大霉素平均回收率在92％～110％之间.抗庆大霉素单抗的制备和竞争ELISA方法的建立为庆大霉素快速检测奠定了基础.