胡杨PeREM1.3过表达提高烟草耐盐性的机制

目的盐害作为一类非生物胁迫严重危害了农作物的生存以及产量。Remorin作为一类植物特有的蛋白质在植物适应环境过程中具有重要功能。本研究克隆了胡杨remorin蛋白PeREM1.3的编码基因PeREM1.3,并研究PeREM1.3基因在植物耐盐性中的作用。方法笔者将基因构件35S::PeREM1.3转入模式植物烟草中, 在盐胁迫条件下,通过生理生化的方法对表达PeREM1.3的转基因烟草进行基因功能的分析。结果研究显示PeREM1.3蛋白定位于细胞质膜上,其编码基因PeREM1.3的开放阅读框(ORF)长600 bp,编码199个氨基酸。胡杨中PeREM1.3能够响应盐胁迫和渗透胁迫表达上调。结果表明,在烟草中过表达PeREM1.3明显地提高了耐盐性。过表达PeREM1.3的烟草转基因株系中抗氧化物酶如SOD、POD和CAT活性显著提高,降低了活性氧水平,调控活性氧平衡。另外植物抗逆相关基因SOS1、HAK、NHA1、VAG1和PMA4的转录水平显著增高,调控K+/Na+平衡。结论这些结果说明PeREM1.3蛋白通过维持植物的活性氧平衡和K+/Na+平衡来提高植物的耐盐性。      

胡杨谷胱甘肽过氧化物酶PeGPX基因的克隆及转化植株耐盐性分析

胡杨（Populus euphratica Oliv.）具有极强抗盐碱能力.本实验室前期胡杨微阵列芯片数据结果显示：盐胁迫下,胡杨谷胱甘肽过氧化物酶基因（PeGPX）的转录上调,暗示该基因可能对胡杨耐盐性具有一定的作用.为分析GPX对植物耐盐性的贡献,本研究以胡杨为材料,利用RT-PCR方法克隆了胡杨谷胱甘肽过氧化物酶PeGPX基因,并在烟草中过量表达该基因,以分析谷胱甘肽过氧化物酶活性与植物耐盐性的关系.研究结果显示,实验中克隆的cDNA （PeGPX）编码谷胱甘肽过氧化物酶,其ORF为693 bp,其蛋白由231个氨基酸编码.过量表达PeGPX基因的烟草与野生型烟草的耐盐性实验结果显示,野生型烟草植株在加NaCl （200 mmol/L）的MS培养基中生长15 d后,无明显的长高,且不长根;而转基因烟草在同样的加盐培养基上,生长基本没有受到抑制,植株生长状态良好,并且能够长根.光合数据显示,在盐胁迫下过量表达PeGPX基因烟草的净光合速率受到影响明显小于野生型烟草的净光合速率.酶活数据显示,转基因株系GPX酶活与野生型的相比在盐胁迫下活性有非常显著的提高.我们的研究结果说明：过表达PeGPX基因使得烟草的耐盐性得到显著提高,这对深入研究PeGPX基因在胡杨耐盐机制中的作用具有重要的意义.     

胡杨PeAPY1和PePY2在提高植物抗旱耐盐性上的功能解析

胡杨（Populus euphratica Oliv.）是典型的抗旱耐盐树种,广泛用于干旱盐碱地带的造林绿化。本实验室前期研究结果表明,盐胁迫下胡杨腺苷三磷酸双磷酸水解酶（Apyrase）基因（PeAPY）的转录水平上调,表明该基因可能在胡杨的抗盐性功能上发挥作用。已有研究证明APY是水解eATP的关键酶,而eATP是植物细胞重要的信使分子,调控植物的生长发育及抗性反应。本研究以PeAPY过表达拟南芥株系、拟南芥apy1、apy2突变体和野生型拟南芥为实验材料,分析了胡杨PeAPY对植物抗旱和耐盐能力的影响。研究结果表明,PeAPY1和PeAPY2转基因株系的抗旱性明显提高,这可能与PeAPY1和PeAPY2过表达减少了叶片表皮的气孔密度,降低了叶片的失水速率,从而提高了植株的保水能力有关。此外,我们还发现PeAPY1和PeAPY2转基因株系耐盐能力有所提高：在盐胁迫条件下,过表达PeAPY1和PeAPY2转基因植物的种子萌发率和生长、成活率均明显高于突变体apy1、apy2和野生型拟南芥（NaCl处理的浓度分别为0,50 mmol/L,100 mmol/L,150 mmol/L,200 mmol/L）。这可能是由于盐处理条件下,PeAPY通过降低盐诱导的eATP浓度,阻止了eATP诱导的细胞凋亡。综上所述,胡杨PeAPY的过表达能够提高植物对盐胁迫、干旱胁迫的耐受性,PeAPY对eATP浓度调控及其对植物抗逆性的具体机制有待进一步研究。     

细胞壁重构关键酶木葡聚糖内转糖苷酶/水解酶（XTH）的研究进展

细胞壁是目前植物分子生物学研究的热点之一.木葡聚糖(XG)是双子叶植物初生细胞壁中最主要的半纤维素.木葡聚糖内转糖苷酶/水解酶(XTH)是一类催化木葡聚糖分子转移或水解的酶,它能够内切木葡聚糖聚合体,将产生的还原性末端连接到另外一个木葡聚糖链或水分子上,在细胞壁重构、影响植物生长发育方面有重要作用.本文主要综述了XTH结构、功能和影响其功能的因素,概括了目前研究中存在的问题和未来研究方向.     

胡杨叶与根中特异性表达基因的表达谱分析

以2年生胡杨实生苗为研究材料,通过NaCl溶液处理24 h,分别收集NaCl处理后的细嫩白根及叶片,采用CTAB法抽提胡杨盐胁迫下的叶与根的RNA,用基因芯片技术研究胡杨盐胁迫后叶与根中基因的差异表达。经过比对,差异10倍以上的基因共有175个,其中在叶中表达上调的有120个,在根中表达上调的有55个。     

植物组织培养新技术——暴露培养法

本文涉及组织培养领域的一种新技术。它的基本特征是试管苗或脱毒苗生长在特制的敞口容器中。培养基和外植体由一层粉末材料覆盖,它可以有效地阻止微生物污染而不阻止脱毒苗茎叶的生长和钻出粉末层,阻止水分外渗而不阻止氧气渗入。由于茎叶暴露于容器外部,接受自然光的直射和干燥通风等条件的锻炼,试管苗生长矮壮、色绿,不用练苗而移栽成活率很高,其素质接近常规繁殖的幼苗。暴露培养法可以克服传统组培技术由于封闭系统方式而造成的幼苗娇弱,移栽后成活率低以及成本过高等固有缺点。     

高效液相色谱法测定动物可食性组织中莫昔克丁残留量

建立了适用于检测畜肉及内脏中莫昔克丁残留的高效液相色谱法。样品经乙腈提取,加水混合后,C₁₈固相萃取柱净化,氮气吹干。将N-甲基咪唑-乙腈(1+1,v/v)和三氟乙酸酐-乙腈(1+2,v/v)作为衍生化试剂,65 ℃避光反应15 min进行衍生化。以乙腈+水(90+10,v /v)作为流动相,等度洗脱,荧光法测定。结果显示：莫昔克丁在线性范围内呈良好线性关系,相关系数(R^₂)大于0.999,检测限和定量限分别为2 μg/kg和5 μg/kg。该方法在以上各组织中的回收率范围为60.5 % ～ 110 %,其批间、批内变异系数范围为0.62 % ～ 15.8 %。该方法准确性强、灵敏度高,可满足实验室实际工作需求。     

转Na^＋／H^＋逆向转运蛋白（PeNhaD1）基因派间杂种110杨的获得

胡杨Na+/H+逆向转运蛋白基因(PeNhaD1)编码一种质膜Na+/H+逆向转运蛋白,在胡杨细胞拒盐机制中具有重要作用.本研究利用根癌农杆菌(Agrobacterium tumefacience)介导的叶盘法将PeNhaD1基因转入盐敏感且速生的派间杂种110杨(P.deltoidesX P.maximozoiczi‘Eridano')中.经PCR和PCR-Southern检测已获得转PeNhaD1基因的110杨再生植株.     

我国兽用抗菌药物使用调查分析

利用调查和统计数据,对我国兽用抗菌药物生产、使用情况进行了汇总统计和分析,发现我国畜禽养殖中存在规模化程度低、环境设施差、缺乏技术指导和宣传培训等问题,并提出了改变经营模式、提升现代化养殖水平、加强兽用抗菌药物从生产到使用的全程监管、建立和完善兽医服务体系、加大宣传培训和技术指导力度等对策建议。     

高效液相色谱法测定猪肉中氨基比林、安替比林和安乃近代谢物残留量的研究

建立了一种可同时检测猪肉中氨基比林、安替比林和安乃近代谢物4-甲氨基安替比林药物残留的高效液相色谱-紫外检测法。猪肉样品经乙腈提取,加入Na2SO4盐析去杂质,MCX柱净化。色谱柱为Phenomenex Luna C18(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈和水(20∶80),流速1.0 m L/min,检测波长265 nm。结果表明,氨基比林、安替比林和4-甲氨基安替比林在50~2000 ng/m L范围内呈良好的线性关系,R2均大于0.999。方法的最低定量限为20μg/kg。氨基比林、安替比林和4-甲氨基安替比林在20~400μg/kg的浓度添加水平上,其回收率在60%~100%,批内、批间的相对标准偏差小于20%。该方法具有简便快捷、灵敏度高等特点,适用于猪肉中氨基比林、安替比林和安乃近代谢物残留检测。