宏基因组法研究不同堆肥处理下猪粪微生物动态结构特征

试验旨在应用宏基因组测序技术探究两种堆肥处理方式下猪粪中微生物的结构组成与分布特征。试验采集同一粪池中的新鲜猪粪，随机分成添加有效微生物（EM）菌的F组和未添加EM菌的K组，每组粪堆各1堆，堆成圆锥形粪堆，粪堆高1.2 m，底部直径2 m；采集堆肥第0、7、14和21天的粪便样本并提取粪便总DNA，运用宏基因组高通量测序技术，比较F组和K组的微生物多样性（组成及结构）差异，并对功能基因进行注释。结果表明，猪粪便中的细菌共测序获得1 083 607个有效开放阅读框（ORFs）；共鉴定出147个门、118个纲、258个目、593个科、2 343个属和13 193个种；在门水平上，相对丰度前十的细菌界优势菌门有：变形菌门（Proteobacteria）、拟杆菌门（Bacteroidetes）、放线菌门（Actinobacteria）、厚壁菌门（Firmicutes）、疣微菌门（Verrucomicrobia）、绿弯菌门（Chloroflexi）、柔壁菌门（Tenericutes）、浮霉菌门（Planctomycetes）、螺旋体门（Spirochaetes）和酸杆菌门（Acidobacteria）；在属水平上，两组平均丰度值排名前三十五的属分别属于变形菌门、拟杆菌门、厚壁菌门、放线菌门和疣微菌门；通过KEGG功能预测分析，新陈代谢通路是最丰富的，氨基酸代谢通路和碳水化合物代谢通路是包含功能基因数量最多的二级通路。两组的菌群结构多样性差异表明添加EM菌后会促进堆肥前期的菌群变化。     

猪瘟胶体金快速诊断法的研究进展

胶体金免疫层析技术是一种新型的免疫检测技术,具有操作简单、方便快速、特异性强、灵敏度高、无需特殊仪器等优点。本文简要阐述了胶体金技术在检测猪瘟抗原及猪瘟抗体上的应用现状,并提出了该技术目前存在的问题及未来的发展方向。     

番茄产后灰霉病的病原鉴定及生物防治

为探索生物防治番茄产后灰霉病,采用柯赫氏法则从罹病的番茄果实上分离得到菌株FQ-2,基于形态学和rDNA-ITS序列,对该菌株进行病原鉴定,采用小麦内生菌解淀粉芽孢杆菌 B9601-Y2(Y2)和球花石斛内生菌贝莱斯芽孢杆菌DJB5(DJB5)对番茄灰霉病进行生物防治。FQ-2被鉴定为灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea),且Y2和DJB5对番茄产后果实灰霉病均有较好的预防和治疗效果,Y2 1×10⁷ cfu/mL和DJB5 1×10⁸ cfu/mL悬浮剂在处理当天接种FQ-2,10天后的防效分别达88.10%和73.47%。在接种灰霉病菌当天再接种1×10⁸cfu/mL的Y2和1×10⁷ cfu/mL的DJB5,10天后灰霉病的防治效果分别达68.56%和78.74%。研究结果对番茄产后灰霉病的生物防治具有参考作用。     

猪生殖呼吸综合征病毒分子生物学研究进展

猪生殖与呼吸系统综合征是由猪生殖与呼吸综合征病毒(prrsv)诱发的一种接触性传染病,引起母猪流产、死胎、繁殖障碍和仔猪以及生长猪的呼吸道症状.本病自1987年在美国首次爆发后,现以在世界各养猪国家广泛存在.给世界养猪业造成巨大的损失.PRRSV自发现以来,病毒分子生物学研究飞速发展,本文就病原特性、基因组结构与表达、病毒蛋白、病毒变异及分子生物学诊断等方面对其分子生物学研究进展作一综述.     

猪场粪污中大肠埃希菌磺胺类耐药基因型及表型分析

为了检测猪场粪污中大肠埃希菌对磺胺类药物的耐药状况,用美国临床和实验室标准协会(CLSI)推荐的药敏纸片扩散法检测11株猪场粪污中大肠埃希菌对磺胺类药物的耐药性表型,用multi-PCR Kit检测磺胺类药物的耐药基因(sul1,sul2,sul3)。结果表明,11株猪场粪污中大肠埃希菌对磺胺复合物的耐药率为45%,磺胺二甲基恶唑耐药率为45%,磺胺甲基恶唑耐药率为64%。磺胺类药物的Sul 1基因检出率为100%,sul 2基因检出率为90.9%,sul 3基因检出率为36.4%,磺胺类抗生素耐药基因的总检出率为100%。研究结果可为大肠埃希菌的耐药性研究以及磺胺类耐药机制的研究提供科学依据。     

鸡传染性喉气管炎病毒可视化LAMP快速诊断方法的建立和应用

试验旨在建立简易、快速、高效的鸡传染性喉气管炎病毒(infectious laryngotracheitis virus,ILTV)检测和诊断方法。根据GenBank上公布的ILTV TK基因序列,设计检测ILTV的特异性环介导的等温扩增(loop media-ted isothermal amplification,LAMP)技术反应引物,通过对LAMP反应体系和反应条件的优化,以及特异性、敏感性和临床样品的检测,建立了ILTV LAMP检测方法。结果显示,以内引物ILT9-FIP和ILT9-BIP、外引物ILT9-F3和ILT9-B3、环引物ILT9-LB和ILT9-LF为LAMP反应引物,反应温度为66℃时,所建立的LAMP检测方法反应效率最高;所建立的LAMP检测方法能够特异性地检测ILTV(匈牙利株和王岗株),不与新城疫病毒(NDV,B株)、鸡传染性支气管炎病毒(IBV,H52株和H120株)、大肠杆菌、鸡副嗜血杆菌、巴氏杆菌等发生交叉反应,且能够检测到的病毒最低浓度达到0.06pg/μL,其灵敏度是普通PCR方法的100倍;采用建立LAMP方法对50个临床样本进行检测,阳性率为14%,且与PCR检测结果的符合率达96%。本研究建立了特异性强、灵敏度高、操作简单的LAMP检测方法,适用于临床上ILTV的快速检测和诊断。     

坏死梭杆菌亚单位疫苗候选抗原蛋白的筛选、表达及免疫原性分析

试验旨在筛选坏死梭杆菌(Fusobacterium necrophorum,Fn)外膜蛋白(outer membrane protein,Omp)中的候选抗原蛋白,为Fn的亚单位疫苗研究奠定基础。采用Uniprot对Fn Omp序列进行预测,基于预测结果筛选拟表达蛋白,并根据GenBank中登录的Fn Omp相应基因序列设计特异性引物,以QL03株为模板进行PCR扩增、原核表达,以及SDS-PAGE和Western blotting分析,并通过血清杀菌试验和小鼠免疫攻毒保护试验,鉴定重组蛋白的免疫原性,筛选最佳候选蛋白。结果显示,预测得到121个蛋白,顺次命名为1-Fn～121-Fn,根据预测结果筛选出8-Fn、11-Fn、41-Fn、95-Fn和102-Fn 5个候选蛋白,其PCR扩增产物大小分别为672、1 164、570、1 059、729bp。SDS-PAGE和Western blotting分析显示,除8-Fn未表达外,其余4个蛋白均成功表达,大小分别为60、39、59、44ku,命名为P11-Fn、P41-Fn、P95-Fn和P102-Fn,均能与Fn阳性血清反应。血清杀菌试验结果显示,4个重组蛋白均有一定杀菌效果,其中抗P102-Fn血清的杀菌效果最佳,杀菌率可达40.49%。小鼠免疫保护试验结果显示,P11-Fn、P41-Fn、P95-Fn和P102-Fn对小鼠均具有一定的保护效果,其中P102-Fn保护效率最高,达60%。结果表明,P11-Fn、P41-Fn、P95-Fn和P102-Fn均具有良好的免疫原性,其中P102-Fn的免疫原性及诱导机体产生保护免疫反应能力最佳,最有望成为Fn亚单位疫苗的候选蛋白。     

姬松茸多糖抗肿瘤的实验研究

应用细胞培养技术 ,观察了姬松茸多糖对K5 6 2和HL - 6 0细胞系的影响。研究结果表明 ,实验组活细胞数、集落形成明显减少 ,荧光显微镜下所见凋亡细胞显著增加。提示姬松茸多糖具有抗肿瘤效果。为了探讨姬松茸多糖抗肿瘤的机理 ,本实验还应用反义寡聚脱氧核糖核酸技术 ,进一步观察了姬松茸多糖与人端粒酶反义核酸协同诱导HL - 6 0细胞系凋亡的作用 ,实验结果表明 ,姬松茸多糖与反义寡核苷酸联合使用 ,可促进HL- 6 0细胞凋亡。     

杆菌霉素D合成基因对解淀粉芽孢杆菌B9601-Y2抑菌及定殖玉米能力的影响

为了初步解析脂肽类抗生素在解淀粉芽孢杆菌菌株B9601-Y2中的作用机制,本研究通过同源重组敲除B9601-Y2中的杆菌霉素D合成基因,获得了敲除突变体Y2ΔbmyA;通过平板离体对峙实验比较观察了Y2ΔbmyA对尖孢镰刀菌拮抗能力的变化,并动态监测了其在玉米根系组织及根际环境的定殖动态。结果表明：Y2ΔbmyA对平板尖孢镰刀菌的拮抗能力较B9601-Y2减弱了83.53%;Y2ΔbmyA在根际土壤环境中的定殖量较B9601-Y2减少了42.25%,在根系组织内的定殖量较B9601-Y2减少了16.88%。上述结果证明杆菌霉素D合成基因对B9601-Y2菌株的抑菌和定殖能力有重要的影响。     

枯草芽孢杆菌XF-1对十字花科作物体内异硫氰酸苯乙酯含量的影响

利用枯草芽孢杆菌XF-1的发酵液处理十字花科作物大白菜、油菜、红菜苔、大头菜、萝卜、水果萝卜和花椰菜,通过HPLC检测了各作物根部的异硫氰酸苯乙酯含量和黑芥子酶活性.结果表明:未处理的萝卜体内的异硫氰酸苯乙酯含量最高,达2.369 mg/g;经XF-1处理后,各作物根部的异硫氰酸苯乙酯含量均有所提高,以大头菜的提高幅度最大,增长率达122.09％;未处理的水果萝卜体内的黑芥子酶活性最高,达4.587 U/mg;处理后各作物的黑芥子酶活性均有不同程度的提高,以萝卜的增幅最大,增长率达68.33％.说明XF-1可能参与了十字花科作物硫代葡萄糖苷的代谢,从而提高了各作物对根肿病的抗性.