坏死梭杆菌亚单位疫苗候选抗原蛋白的筛选、表达及免疫原性分析

试验旨在筛选坏死梭杆菌(Fusobacterium necrophorum,Fn)外膜蛋白(outer membrane protein,Omp)中的候选抗原蛋白,为Fn的亚单位疫苗研究奠定基础。采用Uniprot对Fn Omp序列进行预测,基于预测结果筛选拟表达蛋白,并根据GenBank中登录的Fn Omp相应基因序列设计特异性引物,以QL03株为模板进行PCR扩增、原核表达,以及SDS-PAGE和Western blotting分析,并通过血清杀菌试验和小鼠免疫攻毒保护试验,鉴定重组蛋白的免疫原性,筛选最佳候选蛋白。结果显示,预测得到121个蛋白,顺次命名为1-Fn～121-Fn,根据预测结果筛选出8-Fn、11-Fn、41-Fn、95-Fn和102-Fn 5个候选蛋白,其PCR扩增产物大小分别为672、1 164、570、1 059、729bp。SDS-PAGE和Western blotting分析显示,除8-Fn未表达外,其余4个蛋白均成功表达,大小分别为60、39、59、44ku,命名为P11-Fn、P41-Fn、P95-Fn和P102-Fn,均能与Fn阳性血清反应。血清杀菌试验结果显示,4个重组蛋白均有一定杀菌效果,其中抗P102-Fn血清的杀菌效果最佳,杀菌率可达40.49%。小鼠免疫保护试验结果显示,P11-Fn、P41-Fn、P95-Fn和P102-Fn对小鼠均具有一定的保护效果,其中P102-Fn保护效率最高,达60%。结果表明,P11-Fn、P41-Fn、P95-Fn和P102-Fn均具有良好的免疫原性,其中P102-Fn的免疫原性及诱导机体产生保护免疫反应能力最佳,最有望成为Fn亚单位疫苗的候选蛋白。     

8株分离自四川、贵州地区猪繁殖与呼吸综合征病毒毒株的全基因组特征分析

本研究旨在了解近年来我国四川、贵州地区猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）的分子流行病学及遗传变异情况,对该地区2016—2018年间采集的8份PRRSV阳性样品进行病毒分离鉴定和全基因组测序,进一步使用RDP4和Simplot生物软件对全基因序列进行重组分析。结果显示,8个PRRSV毒株全基组全长为15 010~15 321 nt,毒株间相似性为80.9%~91.7%。NSP2氨基酸分析结果显示,4个毒株表现出与HP-PRRSV毒株一致的30 aa缺失,另外4株表现出与NADC30毒株一致的131 aa缺失。其中,GZgy17表现为“1+19+29 aa”新型缺失模式。ORF5氨基酸分析显示,3个毒株在33位点出现新型的1 aa缺失。遗传重组分析显示,8个毒株表现出PRRSV-2毒株6种不同谱系（Lineage）间的重组方式,分别如下：1） SCnj16：L8+L1;2） SCxyz17：L1+L5;3） SCya18：L1+L3;4） GZgy17：L8+L3;5） SCcd17和SCN17：L1+L8+L5;6） SCcd16和SCya17：L1+L8+L3。本研究结果表明,我国四川、贵州地区不仅有多种谱系PRRSV毒株并存,其基因组还出现了复杂的遗传重组现象,具有上述复杂基因组的PRRSV毒株在我国的流行状况值得高度关注。     

中药余甘子对猪腹泻病原菌体外抑制作用的研究

猪腹泻病一般由病毒和细菌混合感染引起，严重影响生猪健康，目前主要采用大剂量抗生素来进行治疗，但易产生副作用。寻找中药来替代抗生素治疗猪腹泻病，是生猪养殖业发展的大方向和迫切需求。研究将中药余甘子、诃子用中性去离子水索氏提取4～6 h,螃蟹甲、多刺绿绒蒿用无水乙醇索氏提取6 h,蒸干溶剂，收率分别为10.5%、10%、11%和10%。将余甘子、诃子用水稀释，螃蟹甲、多刺绿绒蒿用5%吐温80水溶液稀释得到试验用药物贮存液，采用试管法测定余甘子及它与其他中药的组合对猪腹泻病原菌(大肠杆菌，猪霍乱沙门氏菌，以及这2种细菌混合菌)的最低抑菌浓度，结果显示：余甘子对猪腹泻病原菌有较强的抑菌作用。诃子、螃蟹甲、多刺绿绒蒿与余甘子的多种药物组合也有较强的抑菌作用，多数能协同余甘子抑制猪腹泻常见病原菌。     

胶体金免疫层析技术在猪病毒病诊断中的应用与研究进展

胶体金技术是一种常见的标记技术,胶体金免疫层析试纸条因具有简便、快速、廉价、易操作、安全、稳定、不需特殊仪器、肉眼即可判断等优点,在动物疫病检测,特别是基层兽医人员以及大批量检测和大面积普查等方面得到了广泛应用,显示出了巨大的发展潜力和广阔的应用前景。本文就胶体金试纸条在猪病快速诊断上的应用现状及发展前景作一简要综述,为我国猪病毒病的诊断与预防控制提供参考,同时对胶体金技术与几种常见检测技术的性能进行了比较,剖析了胶体金技术的优势及发展瓶颈,并对其发展方向进行了展望。     

市售15种猪场消毒剂消毒效果的比较

为评价市售的15种消毒剂的消毒效果,采用悬液定量杀菌试验对15种消毒剂的杀灭能力进行实验室评价,从中选择最有效的3种进行喷雾消毒,检测其杀菌率。结果:15种消毒剂中百毒杀S、百胜-30和新大卫均能够在10 min内100%的杀灭大肠杆菌、金黄色葡萄球菌,而作用10 min对枯草芽孢杆菌黑色变种芽孢的杀灭率分别能达到82.9%,56.8%和59.3%,喷雾消毒后30 min和48 h的杀菌率分别为81.5%,65.1%,80.9%和54.2%,43.5%,55.2%。表明:15种消毒剂中百毒杀S、百胜-30和新大卫的杀灭能力最强,现场消毒后以百胜-30和百毒杀S的杀菌和持续的效果最好。     

不同品种猪感染HP-PRRSV后肺组织间PRRSV受体基因差异表达的研究

为进一步了解藏猪、藏梅猪和大约克夏猪对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（HP-PRRSV） JXA1分离株具有不同易感性的分子机理,本研究建立实时荧光定量RT-PCR方法比较分析藏猪、藏梅猪和大约克夏猪感染JXA1分离株前、感染后4、7和14 d肺脏中HSPG2、SIGLEC1、CD163、VIM和NMMHC-ⅡA 5个PRRSV受体基因的差异表达情况。结果显示,藏猪感染JXA1分离株后4和14 d肺脏中HSPG2的表达量显著高于感染前（P < 0.05）,而感染后7 d HSPG2的表达量显著低于感染前（P < 0.05）,藏梅猪在感染后14 d HSPG2的表达量显著高于感染后7 d（P < 0.05）;藏猪感染后4和14 d肺脏中SIGLEC1的表达量显著高于感染前（P < 0.05）,大约克夏猪感染后4、7和14 d SIGLEC1的表达量均显著低于感染前（P < 0.05）;藏猪和藏梅猪感染后14 d肺脏中CD163的表达量均显著高于感染前（P < 0.05）,大约克夏猪则感染后7和14 d均显著低于感染前（P < 0.05）;藏猪感染后7 d肺脏中VIM的表达量显著高于感染前（P < 0.05）,大约克夏猪在感染后7 d显著低于感染前（P < 0.05）;藏梅猪感染后4 d肺脏中NMMHC-ⅡA的表达量显著高于感染前（P < 0.05）,大约克夏猪在感染后4和14 d NMMHC-ⅡA的表达量显著高于感染前（P < 0.05）。结果表明,5个PRRSV受体基因中,SIGLEC1和VIM基因可能是影响藏猪、藏梅猪和大约克夏猪对JXA1分离株易感性存在差异的潜在关键基因。     

宏基因组法研究不同堆肥处理下猪粪微生物动态结构特征

试验旨在应用宏基因组测序技术探究两种堆肥处理方式下猪粪中微生物的结构组成与分布特征。试验采集同一粪池中的新鲜猪粪，随机分成添加有效微生物（EM）菌的F组和未添加EM菌的K组，每组粪堆各1堆，堆成圆锥形粪堆，粪堆高1.2 m，底部直径2 m；采集堆肥第0、7、14和21天的粪便样本并提取粪便总DNA，运用宏基因组高通量测序技术，比较F组和K组的微生物多样性（组成及结构）差异，并对功能基因进行注释。结果表明，猪粪便中的细菌共测序获得1 083 607个有效开放阅读框（ORFs）；共鉴定出147个门、118个纲、258个目、593个科、2 343个属和13 193个种；在门水平上，相对丰度前十的细菌界优势菌门有：变形菌门（Proteobacteria）、拟杆菌门（Bacteroidetes）、放线菌门（Actinobacteria）、厚壁菌门（Firmicutes）、疣微菌门（Verrucomicrobia）、绿弯菌门（Chloroflexi）、柔壁菌门（Tenericutes）、浮霉菌门（Planctomycetes）、螺旋体门（Spirochaetes）和酸杆菌门（Acidobacteria）；在属水平上，两组平均丰度值排名前三十五的属分别属于变形菌门、拟杆菌门、厚壁菌门、放线菌门和疣微菌门；通过KEGG功能预测分析，新陈代谢通路是最丰富的，氨基酸代谢通路和碳水化合物代谢通路是包含功能基因数量最多的二级通路。两组的菌群结构多样性差异表明添加EM菌后会促进堆肥前期的菌群变化。     

中药(赶黄草+波棱瓜子)提取物对小鼠维生素A 急性中毒早期的治疗效果

[目的]研究中药提取物及其组方对小鼠维生素A急性中毒早期的治疗效果,为动物维生素A急性中毒提供有效的治疗手段,进而促进伴侣动物医疗的健康发展.[方法]选取健康成年昆明种小鼠一次性腹腔注射维生素A(按1500 mg/kg计)建立维生素A中毒致骨骼发育不良综合症小鼠模型,4周后采集血液测定生化指标.将维生素A急性中毒小鼠随机分成6组(T1~T6)进行治疗:T1组为空白对照组(不给药);T2组为10.0 mL/kg赶黄草水粗提物;T3组为1.0 mL/kg波棱瓜子粗提油;T4组为5.0 mL/kg赶黄草水粗提物+0.5 mL/kg波棱瓜子粗提油;T5组为5.0 mL/kg赶黄草水粗提物+0.5 mL/kg波棱瓜子粗提油+1.0 g/kg黄芪多糖;T6组为阳性对照,安宫牛黄丸(1/3粒,约1 g).各给药处理组均连续灌胃给药7 d.在开始给药的第2、4、6和8 d分别采集小鼠静脉血制备血清,用于谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、钙(Ca)、磷(P)和甲状旁腺素(PTH)等血清生化指标测定.[结果]除T1组外,各给药处理组维生素A急性中毒小鼠的血清生化指标均发生明显变化,ALT、AST和ALP活性及Ca和P含量整体上均呈下降趋势,PTH含量则呈上升趋势.综合各项血清生化指标的变化趋势,可确定T5组的小鼠维生素A急性中毒治疗效果最佳,至给药第8 d,维生素A急性中毒小鼠血清ALT活性降至3.78 ng/mL,AST活性降至628.14 pg/mL,ALP活性降至2.35 ng/mL,Ca含量降至3.29 mmol/L,P含量降至1.62 mmol/L,而PTH含量升高到337.95 pg/mL.[结论]赶黄草水粗提物和波棱瓜子粗提油均能有效治疗小鼠维生素A急性中毒,两者联用效果更佳,尤其是与黄芪多糖配伍组合,其作用机理主要是通过修复肝功能及骨组织损伤来实现.