UV-C照射对番茄幼苗生长和保护酶系统的影响

室内条件下，在距番茄幼苗顶端30cm用紫外灯（UV—C）每隔1d、2d和3d照射一次，每次照射5min，到第4片真叶完全展开，分别照射9、6、5次。结果表明，随着UV—C照射次数的增加，即照射间隔天数的减少，番茄幼苗的株高、节间距、叶绿素含量降低，叶片增厚；照射次数在不超过6次时对茎粗无显著影响；幼苗POD、CAT活性和MDA的含量随UV—C照射次数的增加而增加，但SOD活性呈下降趋势。     

茄子SmWRKY65基因克隆及其对青枯病的抗性分析

【目的】通过克隆SmWRKY65(Solanum melongena L.WRKY65)基因并分析其生物信息学与功能,以期探究SmWRKY65对茄子青枯病的响应情况。【方法】以茄子抗病植株(E-31)为试验材料、叶片cDNA为模板,通过PCR技术获得SmWRKY65基因,并利用ExPASy ProtParam tool对其进行生物信息学分析。运用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)的方法对其不同组织部位与抗病、感病材料(E-32)中的响应情况进行分析;通过双酶切法构建亚细胞定位载体;运用病毒诱导的基因沉默(virus induced gene silencing,VIGS)技术构建pTRV2-SmWRKY65载体并侵染茄子抗病植株。【结果】在茄子中成功克隆了SmWRKY65基因,该基因开放阅读框为834个核苷酸序列,编码277个氨基酸残基,在71～131区域具有1个含60个氨基酸的WRKY保守域,定位于细胞核中。时空表达分析发现,SmWRKY65在茄子根组织中的表达量最高,叶中次之,茎中最低;qRT-PCR分析表明,SmWRKY65在茄子抗病和感病材料中均响应青枯病菌的诱导上调表达;VIGS结果表明,与清水和pTRV2空载对照相比,接种青枯病菌后,pTRV2-SmWRKY65沉默植株的叶片表现出明显的萎蔫症状,结合qRT-PCR分析发现,pTRV2-SmWRKY65表达量较对照组明显下降。【结论】SmWRKY65在茄子抗病材料中的表达水平明显高于感病材料,且pTRV2-SmWRKY65植株与对照相比表现为易感症状,说明SmWRKY65沉默后茄子抗青枯病的能力下降,表明SmWRKY65可能涉及茄子青枯病抗性相关过程的调控。     

沁阳市夏大豆荚而不实的原因与预防措施

大豆是沁阳市的主要经济作物,有着悠久的种植历史。大豆种植主要分布在沁阳市柏香镇、王曲乡、紫陵镇、西万镇、西向镇等。2010年以来,沁阳市大豆生产出现了新问题,荚而不实现象时有发生。特别是2013年以后,不少地块表现为形成荚果后,籽粒不能正常形成,荚果空秕,造成严重的经济损失。笔者通过近年的实地调查和走访,总结出夏大豆荚而不实的原因,并提出预防措施。一、原因分析夏大豆荚而不实不是由单一因素造成的,而是由多种因素共同作用的结果。     

AtJAR1基因在拟南芥耐盐性中的功能分析

  目的  茉莉酰氨基酸结合物合成酶(jasmonoyl amino acid conjugate synthase,JAR1)可以催化茉莉酸(jasmonic acid,JA)形成茉莉酸的活性形式茉莉酸异亮氨基酸复合体(jasmonic acid-isoleucine,JA-Ile),从而激活JA信号途径。JA信号途径在介导植物盐胁迫的响应中发挥重要作用,因此,探究AtJAR1在植物耐盐性中的功能对于研究JA信号途径影响植物耐盐性的机制具有重要作用。  方法  运用CRISPR/Cas9基因编辑技术,创建了2个不同的拟南芥Arabidopsis thaliana AtJAR1基因突变体,并对这2个突变体进行地上部生物量的统计分析和JA信号标记基因的表达分析,以确定AtJAR1基因功能缺失。之后,观察分析不同浓度氯化钠和脱落酸(ABA)处理对jar1突变体的种子萌发和幼苗建成的影响,明确AtJAR1基因对拟南芥耐盐性的影响。最后,通过比较分析盐处理前后野生型和突变体的钾离子(K+)和钠离子(Na+)质量摩尔浓度,以及高亲和力K+转运蛋白基因AtHAK5的表达变化情况,初步探究AtJAR1基因在拟南芥耐盐性中的功能。  结果  JA信号标记基因AtVSP1和AtVSP2的表达量大幅下调,表明AtJAR1基因功能丧失。与点突变产生的jar1-1突变体不同的是,这2个突变体表现为前3周生长加快,之后逐渐减缓并出现叶片萎蔫的表型。同时,AtJAR1突变可以缓解盐胁迫和ABA对种子萌发和根系生长产生的抑制作用。此外,盐胁迫下AtJAR1突变可以促进AtHAK5的表达和根系对K+的吸收转运。  结论  JA信号途径可能通过与ABA交互作用影响AtHAK5的表达量,以调节植物根系对K+的吸收转运,进而改变细胞内K+/Na+平衡,最终影响植物耐盐性。图8表2参52     

响应面分析法优化枸杞多糖的提取工艺

本文以枸杞多糖的提取得率为衡量指标,考察了料液比、浸提温度、浸提时间三种因素对枸杞多糖得率的影响,从而优化了枸杞多糖的提取工艺。最终实验得出提取枸杞多糖的最佳工艺条件为：料液比1：27g/mL,浸提温度81益,浸提时间为2.5h。在此条件下,枸杞多糖得率为5.03%。经过对二次响应面的分析,在最佳工艺参数下,得出枸杞多糖提取获得率的二次回归方程。     

用可见光图像法测定林火蔓延速率的误差

图像法在林火蔓延速率测定中应用很广,但多数研究没有给出该方法的测定误差。采用图像法、标杆法和热电偶法对室内点烧实验的蔓延速率进行了测量,以标杆法和热电偶法的结果为基准,给出了图像法蔓延速率测定的误差,并对影响图像法测量精度的一些因子进行了分析。结果表明:1)以标杆法为基准,可见光图像测量的蔓延速率的平均绝对误差为0.035 4 m·min-1,平均相对误差为3.49%;以热电偶法为基准,可见光图像测量的蔓延速率的平均绝对误差为0.034 4 m·min-1,平均相对误差为3.31%。图像法与标杆法和热电偶法无显著差异。标杆法和热电偶法只能测得特定点或部分时段的蔓延速度,可见光图像测量法可以测量多点蔓延速度,因此,图像法比标杆法和热电偶法更具优势,可以替代标杆法或热电偶法。2)拍摄位置对误差影响不显著;风增加了蔓延速率,增加了图像法测量林火蔓延速率的绝对误差,相对误差变化不大。透视范围受拍摄角度的影响较大,随着拍摄角度的减小,图像法测量的误差增大。     

抗大肠杆菌肠毒素卵黄抗体的制备和鉴定

为了研究用不耐热肠毒素B亚基(LTB)和耐热肠毒素(STa)的融合蛋白制备鸡卵黄抗体的方法及其中和作用,试验将LTB和STa的编码基因串联并在大肠杆菌中表达获得了重组蛋白,以重组蛋白为免疫原免疫8月龄海兰蛋鸡制备了卵黄抗体,分别用兔肠段结扎试验和乳鼠灌胃试验进行了卵黄抗体对不耐热肠毒素(LT)和STa的体内中和试验。结果表明:用LTB和STa融合蛋白免疫产蛋鸡可诱导产生抗LTB和STa的卵黄抗体,其中抗LTB效价最高可达1∶8 647,抗STa效价最高可达1∶768;卵黄抗体对LT和STa均有中和作用。说明用融合蛋白作为免疫原制备的卵黄抗体具有抗LT和STa的生物学活性,对仔猪大肠杆菌性腹泻的临床治疗有潜在的应用价值。     

应用DPO-PCR方法特异性检测志贺氏菌

In this study, a dual-priming oligonucleotide (DPO)-based PCR method for specific detection of Shigella was established using ipaH gene of Shigella as the target gene. The results showed that detection sensitivity of the DPO-PCR method was 1.65×10² CFU/mL. Compared with conventional PCR primers, the DPO primers were easily designed, which simplified the design procedure of PCR primers. DPO primers were not sensitive to annealing temperature, which could efficiently amplify the target gene in the annealing temperature range from 50 to 70 ℃. Moreover, due to the special structure of DPO primers, it had a higher specificity than conventional PCR primers, and none nonspecific amplifications were produced in reaction. In the practical application, tests on 133 samples including frozen/fresh meat, fruits and vegetables, fresh milk, eggs and cooked food by the DPO-PCR method showed that 15 samples were Shigella positive, which were in accordance with the testing results using GB method (GB/T 4789.5-2012), showing good practicality and reliability. The DPO-PCR method provided a new tool for fast and accurate detection of Shigella.     

霍乱弧菌DPO-PCR特异性检测方法的建立与应用

采用一种新型的引物设计方法——双启动寡核苷酸引物（dual-priming oligonucleotide,DPO）,以霍乱弧菌mdh基因为靶序列,建立了霍乱弧菌DPO-PCR特异性检测方法,分析了DPO引物退火温度不敏感性、检测灵敏度及特异性,并对检测方法进行了初步应用。灵敏度结果显示,DPO-PCR方法对霍乱弧菌的最低检出限为1.07×10^2 CFU/mL。退火温度不敏感性试验中,与常规PCR引物相比,DPO引物在45～65℃退火温度均能够高效扩增出靶基因片段。特异性结果显示,DPO-PCR方法的特异性比常规PCR方法强,不产生任何非特异性扩增。利用建立的霍乱弧菌DPO-PCR检测方法对采集的550份样本进行检测,检出43份霍乱弧菌阳性样本,经行业标准法（SN/T2425-2010）复检,检测结果相同,表明所建立的DPO-PCR检测方法具有良好的实用性,为霍乱弧菌的快速准确检测提供了新途径。     

基于遥感的冬小麦长势等级与气象因子相关性分析

利用遥感数据,以陕西、甘肃两省为例,探讨了冬小麦不同生育期内不同等级的长势状况及其与气温、降水、日照等气象因子的相关性。将冬小麦的生长发育过程分为7个不同的生育期,借助植被指数NDVI,利用GIS空间分析方法,分析了不同生育期内作物生长发育动态变化状况;探讨了2011—2012年不同生长发育期内,不同等级的冬小麦长势状况与同生育期、前一生育期及生育期内累计温度、降水、日照时数等气象因子的相关性。结果表明,2011—2012年,陕西、甘肃两省冬小麦长势在空间上呈现越冬前较好,越冬期略变差,之后恢复变好的状况,但同时存在时空分布差异。相关分析结果表明,就平均来说,无论冬小麦长势状况如何,冬小麦长势和累计降水之间的相关性都大于同期和前一生育期的相关性,显示了降水在冬小麦整个生育期内的重要性;温度对冬小麦的影响根据冬小麦长势等级的不同而不同;日照方面,不论冬小麦长势等级如何,各种不同等级的长势都和累计日照时数相关关系最大。研究同时表明,长势好和长势差的冬小麦对降水较为敏感,而温度在整体上对长势正常的冬小麦影响较大。