Dual RNA-seq技术及其在宿主-病原体相互作用中的研究进展

利用转录组测序技术(RNA-seq)进行转录组分析是了解病原体入侵宿主分子变化的重要工具,与RNA-seq相比,Dual RNA-seq技术无需分离两物种,只需构建一个转录组文库,便能同时对两个(或多个)研究对象进行测序和分析,能够直观的揭示病原体和宿主相互作用过程中转录组学动态变化。同时还可以通过互作模型图获得物种间基因的调控关系,预测两物种相互作用的机制,被广泛应用到人类疾病和生物感染模型的相互作用研究中。为了解Dual RNA-seq技术及其在宿主-病原体相互作用研究中的前景,本文对Dual RNA-seq在宿主-病原体相互作用研究进展进行综述。     

猪瘟病毒非结构蛋白NS4B与宿主蛋白相互作用的研究进展

猪瘟病毒(CSFV)是一种可感染猪只并引起典型或慢性猪瘟(CSF)的单链RNA包膜病毒,严重影响动物的健康和养猪业的经济发展。CSFV自身编码的结构蛋白和非结构蛋白可与宿主蛋白相互作用,促进病毒自身的复制、翻译和增殖,并影响病毒毒力和免疫反应等。CSFV的非结构蛋白NS4B在病毒生命周期中发挥重要作用,其自身结构上含有多种特定区域靶点,可与多种蛋白发生相互作用;其作为CSFV复制体碳价结构最重要的组成部分,还可被非结构蛋白NS3切割,在细胞内与CSFV自身蛋白或其他宿主蛋白,如核糖体蛋白侧柄亚基P1(RPLP1)、铁蛋白重链(FHC)、Rab蛋白22a(Rab22a)、脂肪酸合成酶(FASN)、线粒体抗病毒信号蛋白(MAVS)、肿瘤易感基因101(Tsg101)蛋白和猪指环蛋白114(pRNF114)等相互作用。本文对CSFV非结构蛋白NS4B的结构功能以及与宿主蛋白发生相互作用的研究进展进行概述,以期为CSFV致病机理研究和感染防控提供理论帮助。     

标志性景观对城市文脉传承的设计体现——以中山岐江公园为例

城市化进程不断加快的过程中,如何传承延续原有的城市文脉,打破"千城一面"的现状,是我们每个设计者在各自不同领域需要去研究的内容。     

中学校园景观规划设计——以郑州市中牟第一高级中学为例

在阐述中学校园景观规划原则、重要性的基础上,以作者曾经就读的中学,即郑州市中牟一高校园景观规划设计为例,从建筑区、宿舍区、操场等特色景观的规划,绿色植物、园林小品等要素的融入,运用寄情、寄景、构图等艺术手法设计充满意境的和谐校园,并渗透环境与青少年素质培养的关系,营造出多元化校园,促进学生素质培养。     

CRISPR/Cas9基因编辑技术在重要猪病毒病防控中的研究与应用

规律成簇的间隔短回文重复序列系统（clustered regularly interspaced short palindromic repeat，CRISPR）是一种广泛存在于古细菌和细菌中，由RNA介导在Cas蛋白协助下发挥作用的获得性免疫系统，目前，已发现的CRISPR系统中以CRISPR/Cas9应用最为广泛，本文主要对CRISPR/Cas9系统的基本原理和研究进展进行概述，着重介绍其在重要猪病毒病防控中的应用，包括改造宿主和改造病毒两方面，该技术为研究病毒致病机制、新型疫苗研发以及抗病育种研究等提供了强有力的工具，对疫病的控制有着深远的影响。     

卷丹的显微及组织化学观察

采用冰冻切片法、徒手切片法,利用亮视野显微镜、荧光显微镜、偏振光和扫描电子显微镜,对卷丹进行显微结构研究;利用荧光和组织化学染色的手段对卷丹进行组织化学研究.结果表明:(1)卷丹鳞叶内表皮和外表皮都由1层紧密排列的长方形细胞构成,外表皮细胞较长,大小为(230±60)μm×(50±10)μm,垂周壁略微弯曲,内表皮细胞大小为(120±30)μm×(70±10)μm,垂周壁微弯曲或浅波状;内表皮和外表皮都分布有少量气孔,无副卫细胞.(2)卷丹鳞叶有12～16个维管束,导管为螺纹导管.(3)薄壁细胞所含淀粉粒较多,都为单粒,卵圆形和长椭圆形,脐点偏心,层纹清晰可见.(4)荧光显微及组织化学染色表明,生物碱、多酚类和脂类物质主要分布在内表皮和外表皮细胞中,而多糖和皂苷类物质在内表皮、外表皮以及叶肉细胞中都有分布.卷丹不同部位的表皮、淀粉粒特征较为一致,维管束数目一定,大小差别较大.组织化学研究结果为百合的加工、评价、鉴定及进一步研究提供了基础.     

蚓粪基质对番茄生长和品质的影响

将餐余蚓粪或猪粪蚓粪与泥炭、珍珠岩、蛭石按不同体积比例分别复配成番茄生长基质,以常规基质作为对照,分析不同基质对番茄生长和品质的影响,筛选出适合番茄生长的蚓粪基质配方,为畜禽粪便和餐余废弃物的资源化利用提供技术支撑。结果表明,猪粪蚓粪或餐余蚓粪复配的生长基质的理化性质优良,均适合番茄生长。综合来看,所有处理中,以40%蚓粪添加量的T5（40%餐余蚓粪+20%泥炭+15%珍珠岩+25%蛭石）和T6（40%猪粪蚓粪+20%泥炭+15%珍珠岩+25%蛭石）处理效果最佳,与CK相比,T5、T6处理的番茄果实单果重分别增加102.84%、95.05%,Vc含量分别增加了76.64%、77.16%,可溶性蛋白含量分别增加了1.27、1.35 mg/g,可溶性糖含量分别增加6.73、10.54 mg/g,T5处理的有机酸含量降低了23.40%。T5处理与T6处理的总体效果相当,可以达到市场对基质的要求,该配方可推荐用于番茄工厂化基质生产。     

猪瘟病毒感染仔猪接种猪瘟疫苗后抗原的跟踪检测

为了解猪瘟病毒感染仔猪免疫猪瘟疫苗后带毒情况,并比较实验室几种猪瘟抗原检测方法的适用性,采用(CSFV)RT-nPCR、猪瘟兔化弱毒疫苗荧光定量RT-PCR(HCLV-FQ-PCR)和CSFV实时荧光定量RT-PCR(CSFV-FQ-PCR)3种检测方法对田间感染CSFV仔猪疫苗免疫前后带毒情况进行定期跟踪检测.结果显示:本实验室建立的CSFV-FQ-PCR灵敏度高于CSFV-RT-nPCR;猪瘟疫苗免疫48 d后,采用HCLV-FQ-PCR方法检测不到血液中的HCLV;猪瘟病毒感染猪免疫疫苗后仍存在持续带毒现象,因此对猪瘟病毒感染猪必须彻底淘汰.     

果桑设施栽培安全生产模式及技术

从果桑大棚设施建设、防冻保温系统设立、果桑园管理和桑园土鸡饲养等方面介绍了果桑设施栽培安全生产模式及技术.该技术模式的应用不反,不仅可以确保果桑树不受冻害,生长适当提早,还可以避雨和改善品质,有利于菌核病的防控.     

Sirt1基因稳定低表达的LMH细胞系构建

为构建Sirt1基因低表达的LMH细胞系,根据鸡Sirt1基因的3′UTR序列设计gSmiR30、gSmiR70和gSmiR91 3个miRNAs,以质粒pLNCX-gSmiRn(n为30、70或91)分别过表达这3个miRNAs 48 h后,依次检测其对CHO-K1细胞中报告载体psiCHECH2-gSirt1-UTR672所表达的荧光素酶活性的影响以及对LMH细胞中Sirt1基因表达的干扰情况;然后选用干扰效果较好的pLNCX-gSmiR30包装的反转录病毒感染LMH细胞,以终浓度1μg·mL~(-1)的G418筛选稳定过表达gSmiR30的LMH-gSmiR30细胞系,荧光定量PCR和Western blot检测Sirt1基因的表达。结果表明:人工设计的3个miRNAs可抑制含靶位点的海肾荧光素酶活性在97%以上;且LMH细胞中Sirt1的mRNA表达水平均能被这3个miRNAs下调40%以上;筛选得到的LMH-gSmiR30细胞中绿色荧光蛋白的表达率在99%以上,细胞内Sirt1基因的mRNA水平下降75%, SIRT1蛋白也明显减少。这一研究成功获得了Sirt1基因低表达的LMH-gSmiR30细胞系,为进一步研究Sirt1基因在鸡肝脏中的功能提供了一种很好的细胞模型。