鸡Apob基因组织表达与CRISPR/Cas9敲除系统的构建

旨在探究Apob基因在鸡肝脂质代谢过程中的功能。本研究对鸡Apob蛋白进行理化性质分析；利用RT-qPCR检测Apob基因在4周龄黄羽肉鸡组织中的表达情况，每组设置3个重复，进行3次平行试验。根据鸡Apob蛋白关键结构域，在Apob基因外显子设计3对sgRNA，构建Cas/gRNA载体；将重组质粒转染DF-1细胞后，利用T7核酸内切酶I （T7 endonuclease I，T7EI）酶切法和TA克隆测序法筛选敲除活性位点并计算敲除效率。利用RT-qPCR检测基因敲除后亚克隆细胞中Apob基因mRNA表达情况。结果表明，鸡Apob的相对分子质量为523.356 ku，平均亲水性为-0.300，为稳定的蛋白质，并且该基因主要在鸡的肝、肾和小肠组织表达。敲除载体转染至DF-1细胞后，T7EI酶切发现，Cas/gRNA6、Cas/gRNA7和Cas/gRNA8三个位点均可发挥敲除活性，TA克隆测序结果表明，三者的敲除效率分别为33.3%、65%和80%。同时，RT-qPCR结果显示，转染Cas9/gRNA7、Cas9/gRNA6、Cas9/gRNA8的细胞中Apob基因mRNA表达水平约分别下调99.96%（P<0.01）、85%（P<0.01）、47%（P<0.05）。综上所述，本研究揭示了鸡Apob基因在组织中的表达特点和蛋白的理化性质；成功构建了鸡Apob基因CRISPR/Cas9敲除载体，并筛选出最佳敲除位点，获得了Apob基因敲除的亚克隆细胞，为进一步探索Apob基因在鸡肝中的功能奠定了基础。     

猪瘟病毒核酸检测国家级能力验证结果分析

对猪瘟病毒核酸的检测是实验室检测猪瘟感染的主要手段。为全面考察动物疫病检测机构对猪瘟病毒核酸的检测能力，国家认证认可监督管理委员会（以下简称“认监委”）组织了A类能力验证项目“猪瘟诊断检测技术”（CNCA-19-A01），该项目由中国兽医药品监察所国家/OIE猪瘟参考实验室（以下简称：参考实验室）承担。参考实验室负责制备了检测样品，并进行随机编号。向每个参试实验室发放4份待检盲样，不限定检测方法，参试实验室对各个盲样进行定性判断，并向参考实验室提供检验结果及原始检验报告。出现“不满意”结果的单位可参加补测一次，若补测结果仍为“不满意”，则表明该实验室暂不具备该参数的检测能力。参加本次猪瘟病毒核酸检测的实验室共有97家，初测满意率为93.81%，初测和补测的总体满意率为98.97%。此次能力验证结果表明，我国90%以上猪瘟检测机构能够提供正确的检测结果，可以满足猪瘟诊断和监测的需求。对不达标机构，通过本次能力验证项目查找出了存在的问题，帮助该单位及时纠正错误，进一步提升猪瘟诊断能力。     

洪泽湖古堰森林公园生态环境初步监测与评价

[目的]揭示洪泽湖古堰森林公园的生态环境基本状况。[方法]选取森林公园内大气和水为质量指标,对洪泽湖古堰森林公园的环境因子进行监测并评价。[结果]洪泽湖古堰森林公园远离城市,空气和水体均没有受到污染,负离子和空气细菌含量等指标优于城区。[结论]洪泽湖古堰森林公园环境总体质量较好。     

设计形式与建筑

着重讨论风景园林中建筑的形式。通过建筑是由形体组块构成这一概念,将建筑形式来源进行扩展,把生活中出现的许多形象和现象作为建筑造型的基础。而人作为自然界中最为优雅韵美的形体,在将其体块化之后更能作为建筑造型的灵感来源之一。     

不同鸡种对鸡白痢沙门菌定植与免疫反应差异分析

试验对鸡白痢沙门菌在鸡肠道内定植及其对鸡免疫性能的影响进行探讨。选取狼山鸡、罗斯鸡各40只,分为攻毒组、空白组,攻毒组口服灌注0.5mL鸡白痢沙门菌(107cfu/mL),观察攻毒鸡群的发病状况,并采集盲肠内容物和血液分别进行菌落数和免疫指标的测定。结果发现,狼山鸡和罗斯鸡在肠道中的载菌量分别为4.94×107cfu/mL和5.18×107cfu/mL。免疫指标方面,狼山鸡中除IgM外,其余指标与空白组差异显著(P0.05),罗斯鸡中IgY、白细胞介素-1β与空白组差异显著(P0.05)。表明这2个鸡种对鸡白痢沙门菌均易感,但狼山鸡免疫反应优于罗斯鸡。     

高效体积排阻色谱检测口蹄疫灭活疫苗中146S抗原含量的疫苗前处理方法比较

为提高高效体积排阻色谱检测口蹄疫灭活疫苗146S抗原含量的准确性、适用性和操作性,分别采用正戊醇、正丁醇和三氯甲烷对9批口蹄疫灭活疫苗进行破乳处理,对三种方法的破乳后水相得率和146S抗原含量的色谱检测结果进行比较。结果表明,破乳后水相得率分别为:正戊醇38%~49%,正丁醇42%~44%,三氯甲烷50%;9批疫苗的色谱结果均检测到146S特征峰,146S含量在0.7~12.5μg/mL,3次测定的相对标准偏差最大值为4.0%,9批疫苗不同前处理方法的检测结果均值具有统计学意义,三氯甲烷组与正戊醇组数据一致性强,正丁醇组测定值偏低。使用三氯甲烷对疫苗进行破乳,不仅操作简便快速,而且破乳水相得率稳定,是最优的破乳方法。实验进一步优化了口蹄疫灭活疫苗146S抗原含量检测的高效体积排阻色谱法,为该方法的科学应用提供了数据支撑。     

诊断试剂的研发

<正>诊断试剂的研发过程,就是对所有可能影响检测结果的因素进行不断完善的方法确认过程。一、方法的可行性1.操作方法的确定。根据已有的材料和技术确定操作方法,并在现有的方法上进行改进。2.对照样本的选择。阳性对照品选强、中、弱三种。3.数据处理方法的确定。确定影响结果稳定性的因素;是否定量(包括相对定量和绝对定量)。     

基于MODIS EVI的陇南山地植被覆盖时空变化特征研究

为了分析2000以来的退耕还林还草工程对高植被覆盖区甘肃省陇南市的影响，本研究基于2000—2010年MODIS EVI数据，通过均值分析、植被覆盖度分析和线性回归分析，对陇南山地连续11年以来的植被覆盖时空变化特征进行研究。结果表明：2000—2010年陇南山地植被覆盖变化总体以0.2%/10 a的增速缓慢上升，低于同期甘肃河东地区、甘肃全省、秦巴山区以及西北地区的植被增长率。受气温、降水等地带性要素分布的影响，其内部存在明显的区域差异性，植被覆盖大体上存在由东南向西北递减的趋势。整个山区植被类型以覆盖度在45%以上的中覆盖、中高覆盖及高覆盖植被为主体，林地所占比例较大。尽管研究时段内植被改善区域显著增加，但高植被覆盖区却存在退化趋势，考虑到陇南市相对脆弱的生态环境，加强植被保护仍将是今后生态建设中不容忽视的内容。     

小鼠可溶性腺苷酸环化酶基因的表达特性

为研究可溶性腺苷酸环化酶（sAC）基因的组织特异性表达及其在不同周龄小鼠睾丸中的表达情况，探讨其在精子发生及获能中的作用，运用RT-PCR法分析小鼠sAC基因的组织表达情况及其发育的时序性变化。结果显示，sAC基因优先表达于睾丸和附睾，表达量随发育周龄的增长而呈增加趋势：于2周龄开始检测到它的表达，随后表达量显著增加至6周龄，再逐渐增长至一个平台期，呈现出发育阶段性，说明sAC在精子形成及获能过程中具有特殊作用。     

猪细小病毒血凝抑制试验抗原、阳性血清与阴性血清的制备与鉴定

猪细小病毒（Porcine Parvovirus,PPV）血凝抑制试验抗原、阳性血清和阴性血清在猪细小病毒制品的效力检验中不可或缺,对猪细小病毒相关生物制品的质量控制至关重要。试验采用PPV 7909株病毒同步接种PK-15细胞制备血凝抑制试验抗原,用制备的抗原乳化后免疫豚鼠制备阳性血清,同时用未免疫的阴性豚鼠制备阴性血清。对抗原、阳性血清和阴性血清进行鉴定,结果表明,制备的PPV血凝抑制试验抗原HA效价达1:512;阳性血清HI效价达1:1024;阴性血清HI效价＜1:8,且特异性均良好。利用制备的血凝抑制试验抗原、阳性血清与不同PPV疫苗株的灭活抗原、阳性血清进行交叉反应试验,结果表明,制备的抗原与阳性血清具备良好的血清学交叉反应性,可用于PPV制品的统一评价。