“二氧化氯泡腾片”对家禽主要病原微生物杀灭效果试验

为了观察“二氧化氯泡腾片”对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、禽流感H9亚型病毒及鸡新城疫病毒的杀菌及杀病毒效果,采用悬液定量杀菌试验和通过固定病毒稀释消毒液法进行实验室观察。结果：二氧化氯5mg／L作用5min即可对大肠杆菌临床分离株产生t00％的杀菌效果。二氧化氯5mg／L作用10min或二氧化氯10mg／L作用5min均能对金黄色葡萄球菌临床分离株产生100％的杀菌效果。2mg／L二氧化氯就能对10砸ID50新城疫病毒有100％的杀灭作用,而1mg／L不能全部杀灭新城疫病毒。禽流感病毒H9亚型对二氧化氯比新城疫病毒敏感,1mg／L二氧化氯即可对10^3EID50禽流感病毒H9有较好的杀灭作用。结论：“二氧化氯泡腾片”是一种方便、高效的消毒剂,在较低的浓度条件下,就能对家禽主要病原微生物有杀灭效果。     

水貂阿留申病毒VP2蛋白单克隆抗体的制备

本研究利用PCR方法从水貂阿留申病毒相关病料中扩增出VP2蛋白部分基因,并进行原核表达,成功获得VP2重组蛋白;利用纯化的VP2重组蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞融合,成功获得3株杂交瘤细胞:1F4F7D9、3E9G3D4和4B8B3F8;分别接种小鼠,间接ELISA检测结果表明,3组实验小鼠腹水的单克隆抗体效价均在106以上。     

表达新城疫HN和F基因重组禽痘病毒的免疫效力测定

将8日龄SPF鸡随机分组.分别接种rFPVHN、rFPVF、rFPVNHF重组禽痘病毒,接种量为每只鸡105PFU,另一组群用La Sota活苗经点眼、滴鼻接种10<'6>EID<,50>.于免疫后6d、12d和18d测定HI和微量中和抗体.结果发现,3种重组病毒均能刺激鸡群产生抗新城疫病毒特异抗体,但抗体产生时间比La Sota活苗缓慢,且抗体滴度亦低.然而共表达HN和F的rFPVNHF免疫鸡群的中和抗体水平明显比rFPVHN和rFPVF组群高.表明rFPVNHF的保护性免疫更优于HN或F单基因重组禽痘病毒.     

人表皮生长因子cDNA的克隆、原核表达和抗体的制备

根据已发表的人表皮生长因子(hEGF)mRNA序列设计引物，上游引物5′端引入山羊β-乳球蛋白信号肽序列。PCR从人肝脏混合单链cDNAs中扩增出hEGF cDNA；测序表明，克隆的hEGF cDNA与已发表的序列完全相同；经Signalp V1．1软件分析，山羊β-乳球蛋白信号肽序列与hEGF cDNA能在预计位点切割。将此cDNA克隆到GEX-6P-1中，经IPTG诱导，在BL21(DE3)大肠杆菌中表达约32ku的GST-hEGF融合蛋白。将此cDAN插到pcDNA-3中，用此重组质粒免疫青紫蓝兔，经6次免疫后获得抗hEGF的多克隆抗体，该抗体能识别GST-hEGF融合蛋白。     

7株鸭肝炎病毒分离株及疫苗株的全基因组序列测定与变异分析

为了分析中国鸭肝炎病毒(DHV)的遗传变异和进化关系,作者测定了中国不同地区分离的7株DHV及1株疫苗株的全基因组序列,并与公布的40株DHV序列进行比较分析.结果发现VP1变异程度较大,高变区主要集中在180-194位和213-219位;不同毒株的潜在N-糖基化位点存在较大差异.多数基因的进化分析均表现出一致的结果,测序的8个毒株均分布在同一个遗传谱系,属基因A型,与基因B型和基因C型遗传距离较远,不在同一分支上.而JYZ02株与R85952株的遗传距离最近,属同一个亚支,提示JYZ02株可能由毒株R85952演化而来.结合氨基酸序列相似性分析和代表毒株的血清交叉中和试验结果,表明近年分离并测序的上述7个毒株未发生抗原变异.从多毒株进化分析结果可以看出,血清1型DHV仍是我国流行的优势血清型.     

鸡传染性支气管炎病毒单克隆抗体的制备及鉴定

用纯化的鸡传染性支气管炎病毒免疫BALB／c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞Ag8．653融合。对杂交瘤细胞及时筛选,阳性孔经3次有限稀释法克隆,成功获得3株能稳定传代并分泌抗鸡传染性支气管炎病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株1F4F7D9、3E9G3D4、48883F8。通过间接ELISA、血凝抑制以及琼脂糖扩散等方法检测,3株单克隆抗体的腹水间接ELISA效价达10^6以上并且具有良好的特异性。     

鸭病毒性肝炎多价卵黄抗体的研制

选取4株不同地区分离的适应鸡胚的鸭肝炎病毒作为疫苗株制备灭活苗,免疫试验鸡制备卵黄抗体。鸡胚中和试验表明,第三次免疫后15天,抗体中和效价(PD50)都在29以上,卵黄抗体保护雏鸭试验显示,本试验制备的卵黄抗体有着显著的预防效果,并大大提高攻毒后雏鸭的存活率。     

山东地区新型鸭呼肠孤病毒致病特点与变异分析

本研究将2011~2018年从山东地区分离到的8株新型鸭呼肠孤病毒进行了毒力和致病性试验,结果显示,8株毒株对鸭胚、鸭胚成纤维细胞、雏鸭的致病性基本一致,鸭胚毒价为10-5.00~10-6.00/0.1 m L,鸭胚成纤维细胞的毒价为10-5.33~10-6.30/0.1 m L;对8株毒株的主要抗原σC蛋白核苷酸和氨基酸序列进行比对分析,结果显示,核苷酸同源性为94.5%~99.6%,氨基酸同源性为95.0%~99.4%;通过绘制遗传进化树发现,与全国其他地区毒株相比,山东地区分离的这8株分离株处于一个独立分支,并且这8株分离株的遗传进化与时间有着密切的相关性,暗示山东地区新型鸭呼肠孤病毒随着时间的推移在不断发生着变异。     

影响新城疫病毒分子变异的因素分析

新城疫是危害我国家禽业的重要疫病,有关新城疫病毒的变异问题成为众多禽病研究者关注的焦点。本文总结了近年来国内外对新城疫病毒分子变异研究的新进展,结合作者多年来的工作积累,对影响该病毒分子变异的关键因素进行了分析。     

小型肉用鸡血管瘤病例报道

正2010年3月份,山东德州饲养小型肉用鸡(又称肉杂鸡或"817"杂交鸡)地区,集中发生了一种以皮肤和内脏血管瘤为特征的疾病,该病在15～30日龄之间多发,死亡率在10%左右,一旦并发其他细菌或病毒性疾病,死亡率则大幅增加。该病在小型肉用鸡中较少发现,具有一定的临床意义。