二氧化氯奶牛乳头消毒剂杀菌效果评价及杀菌机理研究

试验旨在对本实验室研发的用于奶牛乳头消毒的二氧化氯消毒剂进行实验室杀菌效果评价,并对二氧化氯的杀菌机理进行初步研究。采用定量法杀菌试验对二氧化氯奶牛乳头消毒剂进行实验室杀菌效果评价;利用透射电子显微镜观察二氧化氯作用后金黄色葡萄球菌超微结构的改变;利用流式细胞仪测定二氧化氯作用后金黄色葡萄球菌细胞膜通透性的变化。定量法杀菌试验结果显示,当该消毒剂中二氧化氯的含量高于1.2 mg/L时,对无乳链球菌、铜绿假单胞菌的杀灭对数值高于3.00,即杀菌率高于99.9%;二氧化氯含量高于0.6 mg/L时,对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念珠菌杀灭对数值高于3.00,即杀菌率高于99.9%;二氧化氯的含量为0.3 mg/L时,仍能有效杀灭表皮葡萄球菌、停乳链球菌;而二氧化氯含量高于28 mg/L,对于枯草芽孢杆菌的杀菌率才能达到100%。透射电子显微镜超微结构观察结果显示,100 mg/L二氧化氯作用于金黄色葡萄球菌5 min时,细胞膜出现了轻微的皱缩,细胞壁与胞膜之间出现了轻微的空隙,绝大多数细胞仍保持原有形态;作用15 min后,金黄色葡萄球菌形态发生了较明显的变化,细胞膜发生了明显的皱缩,细胞壁与细胞膜完全脱离,细胞质也出现了凝集。流式细胞仪检测金黄色葡萄球菌细胞膜通透性变化发现,二氧化氯处理后金黄色葡萄球菌细胞膜通透性发生了改变,其中含量为50 mg/L二氧化氯作用15 min后细胞膜通透性改变最明显。结合实验室杀菌效果评价结果发现,二氧化氯对细菌细胞膜通透性的改变仅仅是致死细菌的原因之一,二氧化氯对细菌的杀灭机理较复杂,仍需进一步的探索。     

鸡场土壤中大肠杆菌的检测与化学消毒剂筛选

应用平板计数法和大肠菌群最大或然数(MPN)法对44份养鸡场土壤样品污染情况进行测定,结果表明春秋季土壤污染较夏冬季严重;以从养鸡场土壤样品中分离鉴定的大肠杆菌作为指示菌,对戊二醛和二氧化氯的杀菌效力进行了测定,定量悬浮试验结果表明0.01％戊二醛作用30 min、0.02％戊二醛作用5 min、25 mg/L二氧化氯作用10 min,对大肠杆菌的杀灭率均达到100％.以土壤为载体的消毒试验结果表明0.01％戊二醛作用30 min、0.02％戊二醛作用10 min和300 mg/L二氧化氯作用30 min、400 mg/L二氧化氯作用10 min,对大肠杆菌的杀灭率均达到100％,两种消毒剂均具有良好的杀灭效果.     

戊二醛苯扎溴铵溶液对H9N2亚型禽流感病毒的灭活效果分析

采用悬浮杀灭试验,考察戊二醛苯扎溴铵溶液对H9N2亚型禽流感病毒的灭活效果。将戊二醛苯扎溴铵溶液通过不同稀释倍数(1 250、2 500、5 000、10 000、20 000)、在不同作用时间(5、10 min)观察其对H9N2亚型禽流感病毒的灭活效果。结果显示,戊二醛苯扎溴铵溶液在10000倍稀释,与H9N2亚型禽流感病毒作用5 min或10 min,灭活率达99.90%以上;在20 000倍稀释,作用5 min或10 min,灭活率均小于99.90%。表明戊二醛苯扎溴铵溶液在10 000倍稀释与H9N2亚型禽流感病毒(20±1)℃水浴作用5 min,即可对H9N2亚型禽流感病毒达到很好的灭活效果。     

NAS制剂在体外对H5N1、H9N2亚型禽流感病毒的杀灭效果研究

采用Klein—Defors悬浮杀灭方法,考察了那氏（NAS）制剂对H5N1和H9N2亚型禽流感病毒的杀灭效果。将不同浓度的NAS制剂药物组与利巴韦林药物对照组与H5N1亚型和H9N2亚型病毒各分别混合10min和30min。后10倍递进稀释成10个稀释度,接种鸡胚尿囊腔。培养一定时间后采集尿囊液进行血凝试验（HA）,计算NAS制剂对两种亚型禽流感病毒在不同时间的杀灭率。结果表明,以1：40、1：80、1：160、1：320、1：640的稀释浓度与10^7-63 EID50禽流感H5N1亚型病毒液作用10min,病毒杀灭率分别为99．99％、99．99％、32．39％、0、0;作用30min杀灭病毒率分别为100％、99．99％、99．43％、0、0。与10^0.17 EID50 H9N2亚型禽流感病毒液作用10min,其杀灭病毒率分别为99．99％、99．99％、32．39％、0、0;作用30min病毒杀灭率分别为100％、99．99％、90％、0、0。提示NAS制剂对这两种病毒都有较好的杀灭作用,而且杀灭效果与时间有关。     

17种消毒剂对大肠杆菌、沙门菌及金黄色葡萄球菌的杀菌试验

为了评价蛋鸡场常用消毒剂的消毒效果,本研究进行17种消毒剂对大肠杆菌、沙门菌和金黄色葡萄球菌最小杀菌浓度的比较,在此基础上选取9种性价比较高的消毒剂进行定量杀菌试验,比较不同浓度有机物干扰下,9种消毒剂对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的杀菌效果。结果:在无有机干扰物的情况下,戊二醛癸甲溴铵、新欧福、百敌克、月苄三甲氯铵、安立消5 min即可对大肠杆菌与金黄色葡萄球菌杀灭率达到100%。不同浓度的有机干扰物对消毒剂杀菌作用的干扰程度不同,其中新欧福、百敌克、百能、月苄三甲氯铵受有机干扰物影响较小;戊二醛癸甲溴铵抗干扰能力较弱。在同种有机干扰物浓度下,金黄色葡萄球菌比大肠杆菌更难杀灭。结论:月苄三甲氯铵、百敌克、安立消、新欧福性价比较高,抗有机物干扰的能力较强。     

中药对病原体杀灭及对肉鸡生产性能影响研究

用中药复方提取液对H9N2亚型禽流感病毒、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏茼4种病原体进行体外杀灭试验，并进行肉鸡饲养试验，结果显示，该中药提取液按1：640稀释后对病毒的杀灭率仍然达到99％，提取液对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌3种病原菌的MBC为2％-5％（稀释度，V／V），动物试验结果显示，该中药提取液能够显著提高肉鸡出栏均重（P〈0．05），与对照组相比，试验组单栋鸡舍利润平均增加1．585万元。结果表明，该中药提取液对预防疾病、提高肉鸡生产性能具有一定作用，值得推广应用。     

7种常见消毒剂消毒效果与稳定性的比较研究

为了比较试验动物设施内7种常用化学消毒剂的消毒效果及稳定性,试验以大肠杆菌CICC 10389和金黄色葡萄球菌ATCC 6538为指示菌,采用悬液定量杀菌试验对7种消毒剂的杀菌效果和稳定性进行实验室评价。结果表明:7种消毒剂作用5 min能够将大肠杆菌和金黄色葡萄球菌全部杀灭。室温存放至有效期+1 d的5种消毒剂作用5 min的杀灭对数值≥5,符合规定的消毒要求。说明7种消毒剂对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌具有杀灭作用,5种消毒剂室温存放至有效期末仍具有符合规定的消毒作用。     

应用荧光RT-PCR方法检测H7N9亚型禽流感病毒

为了验证荧光RT-PCR方法检测H7N9亚型禽流感病毒的可行性,应用建立的荧光RT-PCR方法检测H7N9亚型禽流感抗原、H9亚型禽流感抗原、H5亚型禽流感抗原、新城疫抗原评估检测方法的特异性,检测不同稀释度的H7N9亚型禽流感抗原,并用建立的方法检测采自三鸟批发市场100份泄殖腔、喉拭子。结果是建立的荧光RT-PCR方法,H7体系能检测出1:10-10抗原稀释度,N9体系能检测1:10-9抗原稀释度,对H9亚型禽流感抗原、H5亚型禽流感抗原、新城疫抗原无交叉反应;检出100份泄殖腔、喉拭子结果均为阴性。结果表明,荧光RT-PCR方法H7N9亚型禽流感病毒具有快速、灵敏、特异的特点,适合对禽类的大规模监测。     

拜特灭毒威对H5亚型禽流感病毒的杀灭试验

禽流感是由正粘病毒科中的H5亚型禽流感病毒(AIV)引起的一种烈性传染病,一旦爆发会给养禽业带来毁灭性的危害.近年来,由于国内外时有从活禽市场检出H5亚型禽流感病毒或发生禽流感等情况,故加强对禽流感的防制工作极为重要.本试验采用长沙拜特生物科技研究所生产的拜特灭毒威对H5亚型禽流感病毒进行灭毒试验.结果表明,拜特灭毒威在1∶4000至1∶15000或1∶4000至1∶20000的浓度范围内与AIV作用5min或10min,对AIV的杀灭率可达99.9%以上;稀释度在1∶8000以下作用5min或1∶10000以下作用10min,杀灭率均为100%.     

枸橼酸碘溶液对4种病原菌的载体消毒效果研究

通过载体定量试验考察枸橼酸碘溶液的消毒效果,同时选择百胜-30溶液作对照。结果表明,在橡胶片载体、室温条件下(20℃左右),枸橼酸碘溶液按1∶500稀释、作用5 min对大肠杆菌杀灭率达99.90%以上;按1∶1000稀释、作用5 min对金黄色葡萄球菌即可起到杀菌作用;按1∶1200稀释,最低作用10 min,杀菌率才能达标;当稀释倍数为1∶1200、作用30 min对马腺疫链球菌才能达到杀菌效果,当药物浓度提高至1∶800以上时,作用10 min杀菌率即可达到99.90%以上;按1∶10稀释、作用1.5 h对蜡样芽孢杆菌杀灭率才达99.90%以上,当药物浓度提高到1∶8及以上时,作用30 min杀灭率才能达标。与受试消毒剂药物相比,百胜-30溶液对大肠杆菌和马腺疫链球菌的杀灭效果好,对金黄色葡萄球菌起作用时间略晚,对蜡样芽孢杆菌的杀灭效果不如枸橼酸碘溶液。两种消毒剂对不同病原菌的载体消毒效果不同。     

重组鸡α-干扰素的表达及其生物活性的初步研究

为获得重组鸡α-干扰素并对其进行生物活性研究,本试验对重组大肠杆菌进行诱导表达,收集重组鸡α-干扰素包涵体后进行复性纯化及免疫印迹试验,并通过测定病毒EID₅₀,在接种H9亚型禽流感病毒、新城疫病毒和传染性支气管炎病毒的鸡胚中进行干扰素抗病毒活性试验,运用微变量细胞病变抑制法进行重组鸡α-干扰素抗病毒效价的测定。结果显示复性后重组鸡α-干扰素的免疫印迹试验成功获得了预期条带,在鸡胚中重组鸡α-干扰素具有显著的抗H9亚型禽流感病毒、新城疫病毒和传染性支气管炎病毒等活性作用。在CEF/VSV细胞系上测定重组鸡α-干扰素的抗病毒效价为1.5×2¹⁰ U/mg左右,高浓度重组鸡α-干扰素具有一定的细胞毒性。结果表明重组鸡α-干扰素蛋白具有免疫原性和抗原性,在鸡胚内具有较好的抑制或杀灭H9亚型禽流感病毒、新城疫病毒和传染性支气管炎病毒的效果,呈广谱性,抗病毒效价较高,为下一步抗病毒制品的创制奠定基础。     

不同浓度格利特消毒剂对鸡粪中H9N2亚型禽流感病毒杀灭效果观察

为验证在有机物存在下格利特(20％戊二醛溶液)消毒剂杀灭禽流感病毒的能力,试验模拟空栏鸡舍和周围环境消毒实际情况,在鸡粪中混入H9亚型禽流感病毒,以接种鸡胚尿囊液中H9亚型禽流感病毒血凝价＜2 log2判为感染阴性,以样品经消毒剂作用后检测不到病毒含量(即0EID50)为病毒完全杀灭(100％杀灭病毒),研究格利特消毒剂杀灭禽流感病毒的效果,结果显示:1∶400以下稀释的格利特消毒剂4℃或25℃作用20 min,均能100％杀灭混入鸡粪中的H9N2禽流感病毒;1∶200稀释的格利特消毒剂25℃作用20 min,能100％杀灭存在于鸡粪和清洁剂中的H9N2禽流感病毒.1∶1600以下稀释的格利特消毒剂25℃作用20 min,均能100％杀灭无鸡粪保护的H9N2禽流感病毒.     

临沂市蒙山草鸡养殖场的免疫抗体监测分析

为了分析山东省临沂市蒙山草鸡养殖场的主要疫病免疫状况,选择10家蒙山草鸡养殖场采集血样、分离血清,通过血凝抑制试验进行新城疫、低致病性禽流感H9亚型和高致病性禽流感H5亚型(Re-8株)的免疫抗体监测。结果表明,临沂市10家蒙山草鸡养殖场高致病性禽流感H5亚型(Re-8株)的免疫效果较好,为100%合格;低致病性禽流感H9亚型和新城疫免疫效果较差,为90%合格,在今后的生产中需要加强对新城疫和低致病性禽流感H9亚型的免疫。     

不同高致病性禽流感疫苗的免疫效果试验

应用重组禽流感病毒灭活疫苗（H5N1亚型,Re-1株）,禽流感-新城疫重组二联活疫苗（rL-H5株）对三组肉鸡进行禽流感免疫效果观察,首免用重组禽流感病毒灭活疫苗（H5N1亚型,Re-1株）,二免用禽流感-新城疫重组二联活疫苗（rL-H5株）。结果表明：接种重组禽流感病毒灭活疫苗（H5N1亚型,Re-1株）的免疫效果比接种禽流感-新城疫重组二联活疫苗（rL-H5株）的效果好;首免用重组禽流感病毒灭活疫苗（H5N1亚型,Re-1株）,二免用禽流感-新城疫重组二联活疫苗（rL-H5株）的效果比仅接种重组禽流感病毒灭活疫苗（H5N1亚型,Re-1株）的效果好。     

戊二醛-癸甲溴铵复合剂对大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌的杀菌作用研究

为评价戊二醛-癸甲溴铵复合剂在不同条件下对大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌的杀菌效果,本研究通过悬液定量杀菌试验探究戊二醛-癸甲溴铵复合剂在不同环境温度（4℃、25℃、37℃）、不同作用时间（1 min,5 min,10 min）以及存在有机干扰物（3%、25%的牛血清白蛋白）等条件下对猪源大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌的杀菌作用。结果显示,在没有有机物干扰时,浓度为167 mg/L的戊二醛-癸甲溴铵复合剂在4℃、25℃、 37℃下均可在5 min内完全杀灭2种受试菌（107CFU）,说明环境温度对该复合剂的杀菌作用影响不明显。当有机物浓度为3%时,该复合剂在10 min内完全杀灭大肠埃希菌的最低浓度为250 mg/L,金黄色葡萄球菌为125 mg/L;有机物浓度为25%时,作用时间不低于10 min,完全杀灭大肠埃希菌的最低浓度为1000 mg/L,金黄色葡萄球菌为1250 mg/L。有机物含量高杀灭相同数量受试菌所需复合剂的量也需要加大、作用时间延长,说明有机干扰物对复合剂的杀菌作用影响较大。本研究结果提示,为达到较好的杀菌效果,建议养殖场在使用戊二醛-癸甲溴铵复合剂时的有效浓度不低于1250 mg/L、作用时间10 min以上时杀菌效果更好。     

亚氯酸钠泡腾片消毒剂的体外抑菌试验及临床应用情况

为了研究亚氯酸钠泡腾片消毒剂对畜禽饮用水及水线的消毒效果,试验以亚氯酸钠泡腾片消毒剂为试验对象,采用细菌杀灭试验、水线清理试验等方法,对亚氯酸钠泡腾片消毒剂杀菌效果及清理水线的效果进行评价,并通过实际临床应用对其杀菌效果进行验证。结果表明:细菌杀灭试验中,7.8μg二氧化氯可杀灭1.25×10~7 cfu大肠杆菌。水线清理试验中,亚氯酸钠消毒剂浸泡前的水线水样细菌含量为2×10~4 cfu/mL;亚氯酸钠消毒剂浸泡过夜后,水线中水样的细菌含量为4.76×10~5 cfu/mL,水线清理中水样的细菌总数为清理前的23.8倍。水线清理后水样的细菌含量为2 cfu/mL。在实际临床应用中,蛋鸡饮用水经水体消毒和水线清理后,鸡群腹泻症状消失,产蛋率恢复。说明亚氯酸钠泡腾片消毒剂对大肠杆菌及蛋鸡水线中细菌生物膜具有良好的杀灭和破坏作用。     

威力劲碘杀对H5和H9亚型禽流感病毒的杀灭作用试验

采用悬浮杀灭实验,以鸡胚感染法,研究威力劲碘杀在1500、11000、12000、13000的系列浓度下,与禽流感病毒亚型H5和H9病毒悬液作用30分钟,对禽流感病毒亚型H5和H9的杀灭实验。1500、11000、12000、13000的威力劲碘杀与H5亚型禽流感病毒作用30分钟,其杀灭率分别为100%、100%、100%、81.67%;与H9亚型禽流感病毒作用30分钟,其杀灭率分别为100%、100%、100%、90.00%。     

强化全程管理，有效防控禽类疾病--普莱柯公司禽病防控论坛集锦

1、H9N2亚型禽流感变异持续存在;2、H9N2亚型禽流感流行区域在不断扩大;3、H9N2亚型禽流感对商品肉鸡危害大;4、H9N2亚型禽流感常与传喉、新城疫或传支混合感染;5、H9N2亚型禽流感常与大肠杆菌病协同发生。     

朗德鹅禽流感病毒的分离与鉴定

用禽流感病毒ELISA试剂盒对某朗德鹅养殖场的病鹅气管粘液进行了检测，发现5份粘液样本均呈禽流感阳性；随后取相应气管组织材料接种于9～11日龄鸡胚分离病毒．发现尿囊液能使鸡红细胞发生凝集，用禽流感病毒H5、H7、H9标准阳性血清和新城疫病毒、传染性支气管炎病毒、传染性喉气管炎病毒、传染性法氏囊炎病毒抗血清作HI试验，结果禽流感病毒H5亚型抗血清的血凝抑制滴度达到2^7，而禽流感病毒H7、H9亚型及其他病毒抗血清无血凝抑制滴度，说明从朗德鹅分离到的病毒为H5亚型禽流感病毒。     

北美H7亚型禽流感病毒RT-PCR检测方法的建立

本研究通过分析NCBI数据库中H7亚型禽流感病毒HA基因序列,根据该基因设计引物,建立了针对北美H7亚型禽流感病毒HA基因的一步法RT-PCR检测方法,并对反应条件进行了优化。该方法可特异地检出北美H7亚型禽流感病毒HA基因,而未检出欧亚分支H7亚型禽流感病毒H7N2和H7N9、其他亚型流感病毒(H1N1、H3N2、H5N1、H5N8和H9N2),以及新城疫病毒和鸡传染性支气管炎病毒;检测方法的灵敏度可达0.1 pg/μL。该检测方法的建立为监测北美H7亚型禽流感病毒提供了良好的技术支撑,可用于外来禽流感病毒的检测。