戊二醛苯扎溴铵溶液对鸡新城疫病毒的杀灭效果研究

考察戊二醛苯扎溴铵溶液消毒剂对新城疫病毒的杀灭效果。参考中华人民共和国农业部《兽用消毒剂技术规范》(1992年版),采用悬浮杀灭试验,以鸡胚感染法,将其通过不同稀释倍数(800、1600、3 200)、在不同时间段(5、10、15、30、60 min)观察其对新城疫病毒的杀灭效果。结果:戊二醛苯扎溴铵溶液在20℃水浴中,1 600倍稀释,作用5min,对鸡新城疫病毒的灭活率在80%以上。结论:戊二醛苯扎溴铵溶液在20℃水浴中,对鸡新城疫病毒的最低有效浓度为1 600倍稀释,该浓度对新城疫病毒的最快有效时间为5 min。     

家禽粪便环境对常用消毒剂灭活H5N6亚型禽流感病毒的影响

为了研究家禽粪便环境对常用化学消毒剂杀灭H5N6亚型禽流感病毒的影响,依照《消毒技术规范》,评估5种消毒剂在粪便环境下对目前我国流行的H5N6亚型高致病性禽流感病毒的杀灭效果。结果:与无粪便环境组相比,家禽粪便对5种消毒剂的消毒效果均造成一定程度的影响,需要提高消毒剂工作浓度。其中:过硫酸氢钾复合物溶液、二氯异氰脲酸钠溶液、戊二醛苯扎溴铵溶液作用浓度需分别提高2.5倍、2倍和4倍(均在说明书最大推荐浓度范围内),方可完全灭活H5N6亚型禽流感病毒。尽管癸甲溴铵溶液与戊二醛癸甲溴铵溶液作用浓度分别需提高8倍和4倍可完全杀灭病毒,但均超出了说明书最大推荐浓度,具有一定的使用风险。本研究对指导养禽场和活禽交易市场在粪便环境下科学合理地使用消毒剂杀灭禽流感病毒提供了参考。     

不同浓度格利特消毒剂对鸡粪中H9N2亚型禽流感病毒杀灭效果观察

为验证在有机物存在下格利特(20％戊二醛溶液)消毒剂杀灭禽流感病毒的能力,试验模拟空栏鸡舍和周围环境消毒实际情况,在鸡粪中混入H9亚型禽流感病毒,以接种鸡胚尿囊液中H9亚型禽流感病毒血凝价＜2 log2判为感染阴性,以样品经消毒剂作用后检测不到病毒含量(即0EID50)为病毒完全杀灭(100％杀灭病毒),研究格利特消毒剂杀灭禽流感病毒的效果,结果显示:1∶400以下稀释的格利特消毒剂4℃或25℃作用20 min,均能100％杀灭混入鸡粪中的H9N2禽流感病毒;1∶200稀释的格利特消毒剂25℃作用20 min,能100％杀灭存在于鸡粪和清洁剂中的H9N2禽流感病毒.1∶1600以下稀释的格利特消毒剂25℃作用20 min,均能100％杀灭无鸡粪保护的H9N2禽流感病毒.     

4种常用消毒剂对H7N9亚型流感病毒灭活效果研究

为了比较常用消毒剂对H7N9亚型流感病毒杀灭效果,依照2002年版《消毒技术规范》,评估过硫酸氢钾复合物粉、聚维酮碘溶液、戊二醛癸甲溴铵溶液、稀戊二醛溶液4种消毒剂在不同浓度下,与H7N9亚型流感病毒作用10 min、30 min和60 min的灭活效果。结果显示,0.2%(w/v)过硫酸氢钾复合物粉溶液作用10 min,0.5%(w/v)聚维酮碘溶液作用30 min,0.1%(v/v)戊二醛癸甲溴铵溶液作用30 min,或0.3%(v/v)稀戊二醛溶液作用30 min,均可将H7N9亚型流感病毒完全灭活。与推荐使用浓度相比,戊二醛癸甲溴铵溶液、稀戊二醛溶液、聚维酮碘可以有效灭活H7N9亚型流感病毒,而过硫酸氢钾复合物粉不能有效灭活H7N9亚型流感病毒。本研究对H7N9亚型流感病毒消毒剂的选用具有指导意义。     

NAS制剂在体外对H5N1、H9N2亚型禽流感病毒的杀灭效果研究

采用Klein—Defors悬浮杀灭方法,考察了那氏（NAS）制剂对H5N1和H9N2亚型禽流感病毒的杀灭效果。将不同浓度的NAS制剂药物组与利巴韦林药物对照组与H5N1亚型和H9N2亚型病毒各分别混合10min和30min。后10倍递进稀释成10个稀释度,接种鸡胚尿囊腔。培养一定时间后采集尿囊液进行血凝试验（HA）,计算NAS制剂对两种亚型禽流感病毒在不同时间的杀灭率。结果表明,以1：40、1：80、1：160、1：320、1：640的稀释浓度与10^7-63 EID50禽流感H5N1亚型病毒液作用10min,病毒杀灭率分别为99．99％、99．99％、32．39％、0、0;作用30min杀灭病毒率分别为100％、99．99％、99．43％、0、0。与10^0.17 EID50 H9N2亚型禽流感病毒液作用10min,其杀灭病毒率分别为99．99％、99．99％、32．39％、0、0;作用30min病毒杀灭率分别为100％、99．99％、90％、0、0。提示NAS制剂对这两种病毒都有较好的杀灭作用,而且杀灭效果与时间有关。     

戊二醛苯扎溴铵溶液对鸡传染性法氏囊病病毒的杀灭效果

为了考察戊二醛苯扎溴铵溶液消毒剂对鸡传染性法氏囊病病毒的杀灭效果,参考中华人民共和国农业部《兽用消毒剂技术规范》(1992年版),采用悬浮杀灭试验,将其通过不同稀释倍数(50、100、200)、在不同时间段(5、10、15、30、60 min)观察其对鸡传染性法氏囊病病毒的杀灭效果。结果:戊二醛苯扎溴铵溶液在20℃水浴中,100倍稀释,作用60 min,对鸡传染性法氏囊病病毒表现出完全的杀灭效果。表明:戊二醛苯扎溴铵溶液在100倍稀释时鸡传染性法氏囊病病毒的杀灭效果良好。     

复方戊二醛消毒剂对鸡禽流感病毒(H9 N2株)杀灭效果的研究

研究了一种复方戊二醛消毒剂对鸡禽流感病毒(AIV H9N2株)的杀灭效果及稳定性.将该消毒剂1:500稀释度的溶液在20℃条件下与等量2×105 EID50AIV(H9N2株)病毒液作用,10 min内可完全杀灭AIV(H9N2株)病毒;该消毒剂1:500稀释度的溶液在室温下放置2 d,仍能保持原有的消毒效果.     

格利特对模拟鸡舍环境中禽流感病毒的杀灭效果

为验证在有机物存在下格利特消毒剂杀灭禽流感病毒的能力,试验模拟鸡舍和周围环境的消毒实际情况,在鸡粪中混入H9亚型禽流感病毒,研究格利特消毒剂(20%戊二醛溶液)杀灭禽流感病毒的效果,结果:1∶100、1∶200和1∶400稀释的格利特消毒剂在4℃或25℃下作用20 min,均能100%杀灭混入鸡粪中的H9N2禽流感病毒;1∶200稀释的格利特消毒剂25℃下作用20 min,能杀灭存在于鸡粪和清洁剂中的100%H9N2禽流感病毒。1∶100、1∶200、1∶400、1∶800、1∶1 600稀释的格利特消毒剂25℃下作用20 min,均能100%杀灭无鸡粪保护的H9N2禽流感病毒。结论:格利特消毒剂能杀灭有鸡粪保护的禽流感病毒。     

一株H9N2亚型禽流感病毒鸡胚培养工艺研究

为了探讨H9N2亚型禽流感病毒在鸡胚上最佳培养工艺,试验采用H9N2亚型禽流感病毒分离株以不同稀释倍数接种不同鸡胚(SPF及普通鸡胚)、不同日龄鸡胚及不同培养时间收获鸡胚尿囊液,比较不同培养条件下制备出的鸡胚尿囊液的产量及病毒效价。结果表明:H9N2亚型禽流感病毒接种无禽流感病毒(H9亚型)HI母源抗体鸡胚的最佳病毒稀释倍数为1×10~(4 )～1×10~5倍,接种带有禽流感病毒(H9亚型)HI母源抗体鸡胚的最佳病毒稀释倍数为1×10~3～1×10~4倍,最佳接种日龄为10日龄,最佳培养时间为96～120 h。说明采用优化的鸡胚培养方法生产H9N2亚型禽流感病毒可以得到高质量、高产量的病毒液。     

过氧化氢溶液对鸡新城疫病毒的杀灭效果试验

为考察过氧化氢溶液对鸡新城疫病毒的杀灭效果,依据中华人民共和国农业部《兽用消毒剂鉴定技术规范》(试行)(1992年版),以鸡胚感染法进行了不同稀释倍数(5、10、20倍稀释)的过氧化氢溶液对新城疫病毒的定量、定性杀灭效果。定量试验结果显示,10倍稀释的过氧化氢溶液与鸡新城疫病毒作用5 min,病毒灭活率为100%,定性试验结果显示,20倍稀释的过氧化氢溶液与鸡新城疫病毒作用60 min,对鸡新城疫病毒的灭活率在80%以上。表明过氧化氢溶液与鸡新城疫病毒作用5min,有效浓度为10倍稀释,其最低有效浓度为20倍稀释,该浓度对新城疫病毒的最快有效时间为60 min。     

戊二醛苯扎溴铵溶液对载体的消毒试验

采用载体浸泡定量杀菌试验,考察戊二醛苯扎溴铵溶液对载体片染菌的杀灭效果。参考中华人民共和国农业部《兽用消毒剂技术规范》(1992年版),观察不同稀释倍数(800、1600、6.25、12.5)在不同作用时间(5、30 min)其对载体片染菌的杀灭效果。戊二醛苯扎溴铵溶液800倍稀释,与载体片上的细菌作用5 min,以及6.25倍稀释,与蜡样芽孢杆菌8008作用30 min,杀菌率均为100%。说明戊二醛苯扎溴铵溶液有效消毒浓度为800倍稀释,灭菌浓度为6.25倍稀释。     

2种消毒剂对猪舍自然菌的消毒效果

为了考察戊二醛苯扎溴铵溶液、复方戊二醛溶液2种消毒剂对猪舍自然菌的现场消毒效果,参考中华人民共和国农业部《兽用消毒剂技术规范》(1992年版),采用戊二醛苯扎溴铵溶液100倍稀释、复方戊二醛溶液150倍稀释,通过擦拭法进行消毒前后表面菌落计数,计算杀菌率,判定其现场消毒效果。结果显示:戊二醛苯扎溴铵溶液100倍稀释,复方戊二醛溶液150倍稀释时,与猪舍自然菌作用60 min,杀菌率达96.45%以上。结果表明:2种消毒剂对猪舍自然菌消毒效果相当,戊二醛苯扎溴铵溶液可以推广使用。     

规模化商品肉鸡主要疫病流行动态

1 禽流感 禽流感在很长时间仍然是养禽业重大传染病,是禽病防控的重点.H5亚型家禽禽流感:H5N1、H5N2、H5N6、H5N8;H9亚型家禽禽流感:H9N2;H7亚型家禽禽流感:H7N7、H7N9. 1.1 病毒理化性质 禽流感病毒是囊膜病毒,对去污剂等脂溶剂比较敏感.对碘蒸气和碘溶液特别敏感.常用消毒剂能迅速破坏其传染性.病毒可在加热、极端的pH、非等渗和干燥的条件下失活.禽流感病毒可以在自然环境中,特别是凉爽和潮湿的条件存活很长时间.粪便中病毒的传染性在4℃条件下可以保持长达30～50天,20℃时为7天,60℃、20分钟可以灭活病毒.     

应用荧光免疫层析法检测H7亚型禽流感病毒

为了验证荧光免疫层析法检测H7亚型禽流感病毒的可行性,采用荧光免疫层析法分别对标准抗原和临床样品进行检测,评价该方法的特异性、敏感性、稳定性和方法的适用性。结果为H7亚型流感病毒荧光免疫层析试纸条能够检出H7N9、H7N2亚型禽流感抗原阳性,对其他抗原检测结果为阴性;能检出H7N9、H7N2亚型禽流感病毒抗原(血凝效价1:512)1 000倍的稀释度;检测10次H7N9亚型禽流感抗原的变异系数为1.12%,差异不显著;检测临床100份样品结果均为阴性。结果表明,应用荧光免疫层析法检测H7亚型禽流感病毒操作简便、试验时间短、不受人为因素干扰,适合市场、养殖场大规模的监测或检疫。     

重组禽流感二价灭活疫苗（H5+H7）有效抑制H7N9亚型禽流感病毒在鸡肺脏中的复制

从2013年至2017年上半年,H7N9亚型流感病毒已经引发五波疫情,且出现高致病性变异毒株。禽流感为高度接触性传染病,通过气溶胶进行传播的风险性较高。为探究H7N9亚型禽流感病毒能否在经H5+H7二价灭活苗免疫鸡的肺脏中有效进行复制,本研究选取H5+H7二价灭活苗对2周龄SPF鸡以0.3m L/只的剂量进行免疫,并在免疫14 d测定抗体滴度后以H7N9亚型禽流感病毒对免疫组与空白组SPF鸡点眼滴鼻方式攻毒,3d后剖杀采集肺脏进行病毒分离鉴定,结果显示免疫鸡肺脏中不含H7N9亚型禽流感病毒,而空白组SPF鸡能分离鉴定出H7N9亚型禽流感病毒。重组禽流感二价灭活苗(H5+H7)能有效抑制H7N9亚型禽流感病毒在鸡肺脏中的复制。     

应用荧光RT-PCR方法检测H7N9亚型禽流感病毒

为了验证荧光RT-PCR方法检测H7N9亚型禽流感病毒的可行性,应用建立的荧光RT-PCR方法检测H7N9亚型禽流感抗原、H9亚型禽流感抗原、H5亚型禽流感抗原、新城疫抗原评估检测方法的特异性,检测不同稀释度的H7N9亚型禽流感抗原,并用建立的方法检测采自三鸟批发市场100份泄殖腔、喉拭子。结果是建立的荧光RT-PCR方法,H7体系能检测出1:10-10抗原稀释度,N9体系能检测1:10-9抗原稀释度,对H9亚型禽流感抗原、H5亚型禽流感抗原、新城疫抗原无交叉反应;检出100份泄殖腔、喉拭子结果均为阴性。结果表明,荧光RT-PCR方法H7N9亚型禽流感病毒具有快速、灵敏、特异的特点,适合对禽类的大规模监测。     

常用消毒剂对H3N2猪流感病毒的杀灭效果

为了比较4种常用消毒剂对猪流感病毒的杀灭效果,通过采用鸡胚感染试验和Klein-Defors悬浮灭活试验,研究了戊二醛、氢氧化钠、聚维酮碘、复合消毒剂等4种常用消毒剂在不同浓度下,与H3N2猪流感病毒作用5 min和10 min的杀灭率。结果:戊二醛1∶20 000的稀释液、氢氧化钠1∶1 000的稀释液、聚维酮碘1∶50的稀释液、复合消毒剂1∶20 000的稀释液能将病毒100%杀灭。因此,复合消毒剂和戊二醛的杀灭效果较为显著,其他依次是氢氧化钠、聚维酮碘。     

某地区养殖户家禽禽流感的实验室诊断

为了防止禽流感的大规模暴发,减轻对人类健康的影响,本试验采用荧光免疫层析法对某地区养殖户的100羽患病鸡进行诊断。结果显示,通过H5亚型流感病毒荧光免疫层析试纸条检测,该地区的100羽疑似患病鸡样本中,H5N1、H5N2亚型禽流感抗原检出阳性,而H9N2亚型禽流感抗原、H6N6亚型禽流感抗原结果为阴性;能检出H5N1、H5N2亚型禽流感病毒抗原100倍的稀释度;10次检测H5N1亚型禽流感抗原的变异系数为0.95%(P<0.05),差异不显著。此次诊断表明,该地区存在H5N1和H5N2型禽流感,不存在其他血清型的禽流感。     

不同高致病性禽流感疫苗的免疫效果试验

应用重组禽流感病毒灭活疫苗（H5N1亚型,Re-1株）,禽流感-新城疫重组二联活疫苗（rL-H5株）对三组肉鸡进行禽流感免疫效果观察,首免用重组禽流感病毒灭活疫苗（H5N1亚型,Re-1株）,二免用禽流感-新城疫重组二联活疫苗（rL-H5株）。结果表明：接种重组禽流感病毒灭活疫苗（H5N1亚型,Re-1株）的免疫效果比接种禽流感-新城疫重组二联活疫苗（rL-H5株）的效果好;首免用重组禽流感病毒灭活疫苗（H5N1亚型,Re-1株）,二免用禽流感-新城疫重组二联活疫苗（rL-H5株）的效果比仅接种重组禽流感病毒灭活疫苗（H5N1亚型,Re-1株）的效果好。     

应用适配体捕获建立H5N1亚型禽流感病毒拉曼光谱快速检测技术

基于表面增强拉曼散射(surface enhanced Raman scattering, SERS)和适配体捕获相结合技术，建立1种H5N1亚型禽流感病毒快速检测方法。本实验室筛选得到2条针对H5N1亚型禽流感病毒具有良好的特异性和灵敏度的适配体，与磁珠偶联建立针对H5N1亚型禽流感病毒捕获试剂，通过对捕获体系进行原位还原生成纳米银颗粒增强拉曼信号，建立了原位、快速、无损的H5N1亚型禽流感病毒拉曼光谱快速检测技术。结果表明：H5N1亚型禽流感病毒在1 058 cm^-1处有特异性拉曼峰谱，该方法具有良好的特异性、灵敏性和稳定性。该方法的最低检测限达到原病毒液稀释的10¹⁰倍。利用本方法可在10 min内快速检测出待测样本中是否有H5N1亚型禽流感病毒的存在，能够在大体积、低浓度样品中快速检测出目标病原，满足H5N1亚型禽流感病毒临场快检的需求。