潍坊地区肉鸡致病性大肠杆菌的血清型鉴定及药敏试验

从山东潍坊地区不同鸡场采集病料,经生化试验和血清型鉴定了95株大肠杆菌,78株为致病性大肠杆菌,它们覆盖了14种血清型,其中O78、O2、O15、O11优势血清型。对这些致病性大肠杆菌进行药敏试验,受试菌的平均耐药率为40.6%,同时多重耐药现象普遍。在21种受试药物中,高敏的药物有4种,分别为头孢噻肟钠、磷霉素钠、氟苯尼考、头孢曲松钠。这一结果对指导本地区肉鸡大肠杆菌病防治具有参考价值。     

金华地区仔猪致病性大肠杆菌的血清型鉴定及药敏试验

为了调查金华地区仔猪大肠杆菌的耐药性及流行血清型,从金华地区21个猪场采集96份仔猪大肠杆菌病病料进行病原菌的分离和生化鉴定, 结果分离到大肠杆菌79株,其中致病性大肠杆菌68 株,对68 株致病性大肠杆菌进行了8 种抗生素敏感性试验, 发现对丁胺卡那霉素、氟苯尼考、头孢噻呋最敏感, 庆大霉素、红霉素、环丙沙星等抗菌药虽然有一定效果,但大多是低敏感或中度敏感,而对氨苄青霉素 、诺氟沙星则基本耐药。对分离的68 株致病菌进行了血清型鉴定表明,共有O13,O48,O54,O98,O146,O149,O161等7 种血清型, 其中O13,O54,O98为优势血清型。     

利用SUMO表达系统高效表达猪O型口蹄疫病毒VP0、VP1、VP3基因

根据GenBank中公布的猪O型口蹄疫病毒(foot and mouth disease virus,FMDV)全基因合成了FMDV结构蛋白前体蛋白P1基因,同时设计了扩增FMDV结构蛋白VP0、VP1和VP3基因的引物。以P1基因为模板,分别经PCR扩增获得FMDV VP0、VP1和VP3基因。扩增产物克隆于Blunt载体中,酶切后将目的片段连接到原核表达载体SUMO中,构建重组表达质粒SUMO-VP0、SUMO-VP1和SUMO-VP3,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)plysS进行诱导表达。经SDS-PAGE电泳可见融合蛋白均获得高效表达,融合蛋白表观分子质量分别约为55、48和40 ku。在IPTG浓度为1.0 mmol/L,温度为37 ℃,诱导5 h时融合蛋白表达量最大。Western blotting结果表明,融合蛋白均可被FMDV阳性血清识别,反应原性良好。     

5株传染性支气管炎病毒分离株的鉴定和血清分型

从四川、重庆和广东3个不同地区,不同时间发病的肉鸡中分离出5株病毒．通过鸡胚发育试验、NDV干扰试验、动物回归试验和感染后鸡血清中抗体水平变化确定这5株病毒均为传染性支气管炎病毒．血清中和试验表明,这5株病毒血清型与北京分离的A2株一致,而与H52、H120、M41、T和Holte株不同．该研究结果证实了鸡传染性支气管炎病毒类4／91毒株在我国华南和西南地区的流行．     

非洲马瘟病毒分型RT-PCR检测方法的研究

为验证所引进9个血清型的非洲马瘟病毒,并同时对其分型鉴定方法有所探索,根据参考文献设计位于AHSV基因组L2片段的型特异性分型引物,用RT-PCR及测序方法进行实验研究。抽提所引进9种血清型的RNA,经RT-PCR扩增,各引物均有特异性扩增,经进一步的核苷酸序列测定及分析,证实所扩增片段均为非洲马瘟病毒L2基因相应位置片段;同时对AHSV分型RT-PCR检测方法进行了改进优化研究。实验证实分型引物对各RNA均有特异扩增,所引进9个血清型为正确血清型,并建立了适合实验室条件的AHSV分型鉴定方法。     

重庆地区表观健康猪中猪链球菌的检测

本研究旨在调查重庆地区表观健康猪的猪链球菌带菌情况,并揭示健康猪群携带猪链球菌的公共卫生学意义。随机采集重庆市17个区县(市)定点屠宰场表观健康猪的腭扁桃体1 360份,进行猪链球菌的分离鉴定,并对致病性较强的1、2、7、9、14型及1/2型进行分型与毒力因子分析。结果共分离到225株猪链球菌,分离率为16.54%;检出猪链球菌2型4株,猪链球菌7型3株,猪链球菌9型3株,猪链球菌1/2型1株;毒力因子谱分析发现多数(10/11)分离株缺失部分毒力因子,但也存在具有全部已知毒力因子的强毒株,且在国内首次检出小片段mrp型猪链球菌1/2型1株和7型2株。结果提示,重庆地区健康猪群带菌现象普遍,且流行菌株具有与国外不同的特点,对屠宰场工作人员健康造成威胁。     

Biological characterization of French Potato virus Y (PVY) isolates collected from PVY‐susceptible or ‐resistant tobacco plants possessing the recessive resistance gene va

Improved tobacco cultivars introgressed with alleles of the recessive resistance va gene have been widely deployed in France to limit agronomical consequences associated with Potato virus Y (PVY) infections. Unfortunately, necrotic symptoms associated with PVY have been reported on these cultivars suggesting that PVY is able to overcome the resistance. A field survey was performed in France in 2007 to (i) estimate the prevalence of PVY in tobacco plants showing symptoms and (ii) characterize PVY isolates present in susceptible and va‐derived tobacco cultivars. A serological typing procedure, applied to 556 leaves collected from different French tobacco growing areas, was performed using polyclonal antisera raised against different viral species including PVY. Viral species were detected in 80·8% of leaves and PVY was present in 83·5% of infected samples. However, statistical analysis confirmed that the probability of a tobacco plant being infected with PVY is reduced in va hosts. Eighty‐six PVY isolates were mechanically inoculated on one susceptible and three va‐derived tobacco cultivars used as indicator hosts to define virulence of these isolates against alleles 0, 1 and 2 of the va gene. Both qualitative and quantitative analyses showed that 55 PVY isolates were able to overcome the three va alleles. Moreover, the monitored biological diversity of PVY isolates was higher in the susceptible tobacco hosts than in the va‐derived ones. This study helps to understand consequences of the deployment of the va gene in tobacco on diversity and virulence of PVY isolates.     

鹅源致病性大肠杆菌O86K61 和O44K74亚型的分离与鉴定

从湛江养鹅场发生的疑似大肠杆菌病病死鹅无菌采集病料,分离鉴定出8株大肠杆菌,其中,O86K61 4株,O44K74 3株,1株未定型,上述菌株均不产生内毒素;药敏试验结果表明,大部分菌株对阿米卡星高度敏感,对恩诺沙星、先锋霉素、磺胺嘧啶、诺氟沙星、强力霉素呈交叉耐药;对万古霉素、新霉素、呋喃唑酮中度敏感;对阿莫西林、链霉素、卡那霉素、庆大霉素、四环素不敏感。上述结果提示,同一发病鹅场存在着多种致病性大肠杆菌的血清型,并存在多重耐药。     

猪D型产毒素多杀性巴氏杆菌毒素分段基因的原核表达

根据GenBank已发表的产毒素多杀性巴氏杆菌（T＋Pm）toxA基因序列（AF240778）设计1对引物,从猪源D型T＋Pm中扩增出toxA基因片段（3858 bp）,再根据toxA基因序列设计3对引物,分别扩增出ZQ（1084 bp）、ZH（1092 bp）、HM（906 bp）3个分段基因,将其克隆至原核表达载体pET32a,转入大肠杆菌BL21中进行融合表达。经SDS-PAGE和West-ern blotting检测分析,发现ZQ、HM基因的表达产物以包涵体形式存在,大小分别为75、50 kDa,ZH基因不表达。动物试验结果表明,HM重组蛋白具有良好的免疫原性、反应原性及一定的生物学活性,而ZQ重组蛋白没有免疫原性、反应原性及生物学活性。通过间接ELISA的方法检测抗毒素的阳性猪血清,结果表明,HM重组蛋白较天然蛋白具有更高的特异性。     

亚洲1型口蹄疫病毒L蛋白缺失株的构建及其生物学定性

为确定口蹄疫病毒(FMDV)L蛋白缺失对其生物学特性的影响,本研究在已建立的Asia1型FMDV反向遗传操作平台基础上,利用融合PCR方法缺失L蛋白基因编码区,构建了缺失L蛋白的重组Asia1型FMDV(rFMDV-ΔL)。拯救病毒的一步生长曲线结果表明,rFMDV-ΔL与亲本病毒相比在BHK-21细胞中的复制水平下降10倍,乳鼠毒力试验表明rFMDV-ΔL的毒力比亲本毒株下降6倍。另外,rFMDV-ΔL在BHK-21细胞上产生病变的速度明显变慢,形成蚀斑的时间延长,致乳鼠死亡所需时间也比亲本毒株明显延长。本研究是关于亚洲1型FMDVL蛋白结构与功能研究的首次报道,为亚洲1型FMDVL蛋白结构与功能的研究奠定了基础。