转Bt基因抗虫棉卡那霉素田间鉴定技术研究

对转基因抗虫棉不同时期、不同叶片对卡那霉素不同浓度的反应及其与棉花抗虫性的关系进行了较系统的研究.结果表明,选取4 000 mg·L-1的卡那霉素液在棉花苗期、蕾期涂抹棉株倒二片平展叶最适宜,田间卡那霉素反应与田间棉铃虫发生实况结果吻合率高.说明棉花田间抗卡那霉素反应能够准确检测转基因抗虫棉,可以作为一种快速简便的田间检测转基因抗虫棉的方法.     

卡那霉素对棉花胚性愈伤组织生长发育的影响

卡那霉素对棉花胚性愈伤组织的增殖、胚胎发生及发育均有一定的抑制作用,但不同浓度的卡那霉素对棉花胚性愈伤组织的生长发育作用程度不同,低浓度较弱,高浓度较强;胚性愈伤与体细胞胚生长发育的不同阶段对卡那霉素的敏感性有所不同。在棉花遗传转化过程中,卡那霉素浓度不能低于５０ｍｇ·Ｌ－１,胚性愈伤的继代培养时间应控制在３０ｄ左右。     

番茄外源基因转化系统的研究

本文结合反义ＡＣＣ基因的番茄中的导入,就番茄外源基因转化系统建立中的几个问题做了研究。结果表明,转基因番茄的组织培养比普通番茄更复杂和困难,需要对其培养基的激素配比做系统研究,以选择更适合的培养基,抗生素的使用要掌握好剂量,在番茄的子叶上以５０ｍｇ／Ｌ为宜;叶盘法转化番茄子叶时采用的菌液浓度及处理时间对转化也有很大的影响,以农杆菌过夜培养液用ＭＳ液体培养基稀释１０倍,浸泡时间为５ｍｉｎ为宜;转基因     

两种抗生素对阿拉巴马花烛植株再生的影响

花烛（Anthurium andraeanum Lind）是世界第二大热带盆栽花卉,其转基因育种具有巨大的应用前景。以 花烛为材料,研究不同浓度卡那霉素和潮霉素对阿拉巴马花烛植株再生的影响,结果表明;卡那霉素和潮霉素均能 促使外植体严重褐变死亡,同时,二者对愈伤组织和芽的诱导具有明显抑制作用;当以叶片或叶柄为转化受体时,选 择压以100 mg/L 卡那霉素或20 mg/L 潮霉素为宜;当以愈伤组织为转化受体时,选择压以150 mg/L 卡那霉素或40 mg/L 潮霉素为宜;两种抗生素对生根亦具有抑制作用,选择压则以150 mg/L 卡那霉素或40 mg/L 潮霉素为宜。     

Efficient production of transgenic plants by Agrobacterium-mediated transformation of cassava (Manihot esculenta Crantz)

An efficient and reproducible method was developed for Agrobacterium-mediated transformation of embryogenic suspension cultures of cassava. LBA4404(pTOK233), containing the nptII, hph and gus marker genes, was used in the experiments. Chemical selection by means of kanamycin was used to establish 1037antibiotic resistant callus lines, of which 526 showed GUS expression. Of the 241 callus lines that were transferred to maturation medium 219formed somatic embryos. Thirty-seven of the 38 lines that were transferred to germination medium produced plants. GUS-positive plants could be obtained from 31 lines; in 14 of those lines 100% of the produced plants were GUS-positive, the remaining 17 lines yielded GUS-positive plants at an average of 72%. The transgenic nature of these plants was confirmed by Southern blot analysis. This revised version was published online in July 2006 with corrections to the Cover Date.     

卡那霉素对棉花下胚轴愈伤组织生长的影响

以三个具有不同特点的棉花新品系为试材的研究表明，卡那霉素对棉花下胚轴的愈伤组织形成和增殖均有明显的抑制作用，随其浓度的增加，愈伤组织形成的频率降低，增殖的倍数减少；当浓度增加到１００ｍｇ·Ｌ－１时，愈伤组织严重褐化，其正常生长受到完全抑制；下胚轴形态学上端切段较下端切段更易受卡那霉素的影响     

鸭疫里默氏杆菌50S L27转座子插入突变株的生物学特性分析

为了鉴定鸭疫里默氏杆菌中与卡那霉素抗性相关的基因,本研究采用构建Yb2株转座子随机突变库结合卡那霉素抗性平板来筛选相关抗性基因。先以Yb2株为受体菌,携带质粒pEP4351的大肠杆菌BW19851(pEP4351)为供体菌,构建转座子Tn4351随机突变库。用含红霉素和卡那菌素的TSA进行筛选,得到卡那霉素耐药性降低的突变株DK-2;然后采用基因组步移的方法鉴定表明,转座子插入基因组上编码核糖50S L27亚基基因;再将携带野生株Yb2的50S L27基因的大肠杆菌-鸭疫里默氏杆菌穿梭表达载体pRES-50S L27导入突变株DK-2,构建得到了回复菌株cDK-2。结果表明:50S L27基因缺失对其生长无明显的影响,而DK-2突变株对卡那霉素、新霉素和利福平的敏感性均增强。本研究为进一步解析鸭疫里默氏杆菌50S L27亚基的功能奠定了基础。     

悬铃木遗传转化过程中选择压力的确定

以二球悬铃木(Platanus acerifolia)的下胚轴和离体叶片为材料,研究了植物遗传转化过程中常用的2种选择剂卡那霉素(Kan)和除草剂(PPT)对其不定芽分化的抑制作用,同时试验了2种选择剂对试管苗生根的影响。结果表明,Kan和PPT对悬铃木下胚轴和离体叶片的不定芽分化及试管苗生根均表现出较强的抑制作用,其中12.5-20.0 mg/L Kan或2.0 mg/L PPT能完全抑制叶片外植体正常的不定芽分化,50 mg/L Kan或1.0 mg/L PPT可完全抑制下胚轴的不定芽分化;Kan和PPT抑制试管苗生根的选择浓度分别为50 mg/L和4.0 mg/L。试验确定了以悬铃木的下胚轴和叶片为转化受体时不同筛选阶段Kan和PPT的选择压力,为其基因工程改良奠定了基础。     

卡那霉素对黄河蜜子叶苗生长的影响

卡那霉素对黄河蜜试管子叶苗生长影响表现为减少毛根发生、主根根长、株高、单叶面积、单株生长量及增加主根根粗,而且随卡那霉素浓度增加,影响作用增强。在P<0.05的显著性水平上,卡那霉素对毛根发生、主根根长、株高、单叶面积、单株生长量产生抑制的起始有效浓度分别为25～75 mg/L、50 mg/L、50～100 mg/L、50～100 mg/L、25 mg/L,在此浓度范围内,与对照相比,平均每株毛根发生量、平均主根根长、平均株高、平均单叶面积、平均单株生长量分别减少19.985～25.741条、4.651 cm、3.986～5.651 cm、0.731～0.952 cm2、0.1 g。对主根根粗产生影响卡那霉素起始有效浓度为25～50 mg/L(P<0.05),在此浓度范围内,主根平均直径比对照增加0.011～0.012 cm。试验确定对幼苗生长产生显著影响的卡那霉素有效浓度为50～100 mg/L。     

黄瓜(Cucumis sativus L.)离体再生和转化体系的优化

以黄瓜4d苗龄子叶节和农杆菌GV3101为实验材料,对再生体系和转化体系条件进行优化。再生部分,将培养基中的6-BA和ABA设立浓度梯度,并添加适量的AgNO3,进行再生情况对比,得最佳配方MS+1.5mg/L 6-BA+1.0mg/L ABA+2.0mg/L AgNO3,可直接诱导出芽,最短45d获得完整植株。转化部分,根据敏感性试验确定选择培养卡那霉素(kan)筛选压,并运用gus瞬时表达法对预培养时间、侵染时间、共培养时间和抗氧化剂的添加等影响转化效率的因素进行优化。结果表明,50mg/L kan筛选压即可筛选出阳性株;预培养时间1～2d,侵染时间20～30min,共培养3d时转化效率较高;抗氧化剂的加入可显著提高转化效率。对该转化体系进行验证,PCR结果初步表明外源基因成功整合入黄瓜基因组中。