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以苦荞种子为材料,经热变性、硫酸铵盐析后制成苦荞胰蛋白酶抑制剂(TBTI)粗品,然后用离子交换层析及亲和层析的不同洗脱体系对其进行纯化。结果发现:亲和层析法操作简单、纯化效率高。十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)显示为一条带。分子量约为12 kDa~15 kDa。 相似文献
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辣根过氧化物酶的分离制备和纯化 总被引:4,自引:0,他引:4
从辣根块茎分离和纯化了辣根过氧化物酶(HRP),纯化程度包括匀浆、加热、硫酸铵分级沉淀、丙酮分级沉淀和CM-23阴离子交换层析。纯化的HRP的K4值为2.5×10^5,RZ值值3.00,酶的比活406U/mg蛋白。它的SDS-PAGE显示一条带,酶亚基分子量为40KD,等电聚焦电泳呈现三条带,酶不舔生染色呈现多条带,表明有同工酶存在。对酶的分离纯化作了一些改进,如加氨水保持PH值,加入5mmol/ 相似文献
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杂交粳稻亲本种子的提纯技术 总被引:2,自引:0,他引:2
分别应用“成对株系冷藏法”和“花培提纯法”对上海市主要杂交粳稻亲本进行了提纯。成对株系冷藏法针对杂交粳稻BT型不育系特点 ,将多年繁殖的原种来源于同一提纯世代 ,减少因繁殖世代增加而导致不育系育性的降低 ;花培提纯法通过杂交粳稻三系亲本分别花药培养 ,经过单倍体再加倍而加速三系纯化速度。通过提纯的寒丰A、寒丰B、82 0 4A、82 0 4B、申 4A、申 4B 3 0个株系 ,平均纯度达 99.80 %~ 99.86%。经花培提纯的不育系不育株率 10 0 % ,不育度 99.97% ,恢复系亲本纯度达到 99.99%。 相似文献
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苹果茎沟病毒的分离纯化及血清学检测 总被引:9,自引:0,他引:9
从苹果样品中分离到苹果茎沟病毒(ASGV),汁液摩擦接种该病毒可侵染昆诺藜(Chenopodium quinoa)、苋色藜(C.amaranticolor)、心叶烟(Nicotiana glutinosa)、灰藜(C.niurale)、菜豆(Phaseolus vulgaris "pinto")和西方烟(N.accidentalis"37B")。在昆诺藜叶片汁液中,该病毒体外存活期为3d左右(25℃),热钝化点60~65℃(10min),稀释限点10#+(-4)。提纯病毒在-20℃下,存活期为6个月以上。提纯病毒液A260/A280=1.18。病毒粒子呈线状,大小为620~680nm×11~12nm。衣壳蛋白分子量为31.0kD。用提纯病毒免疫大耳白兔,所获抗血清用于检测提纯病毒样品和感染ASGV的昆诺藜叶片,其效价毛细管微量沉淀反应法为1:512,酶联免疫吸附法为1:10#+4以上。用该抗血清可检测出感染ASGV的苹果试管苗和田间生长植株叶片。 相似文献
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对东方粘虫Mythimna separate(Walker)中肠V-ATPase H亚基基因(VATPH)进行克隆、原核表达及纯化。首先采用RT-PCR技术克隆基因,再构建原核表达载体(pET15b-VATPH)并转入E.coil BL21(DE3),经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactoside,IPTG)诱导表达,用Ni-NTA柱及S-200分子筛纯化,最后进行SDS-PAGE分析。结果表明,pET15b-VATPH可高效表达V-ATPase H亚基,纯化后可获得单一条带且分子质量约为55ku的重组蛋白。该结果为进一步研究V-ATPase H亚基的晶体结构,药物小分子与H亚基大分子的相互作用,尤其是以H亚基为筛选模型创制新农药奠定基础。 相似文献
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