猪流行性腹泻和猪传染性胃肠炎二重RT-PCR检测方法的建立及应用

为了建立猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的快速鉴别诊断方法,试验根据GenBank中已发表的PEDV和TGEV的相关基因序列,设计合成特异性引物,分别进行单项PCR最佳反应条件的摸索;确定最佳反应条件后建立PEDV和TGEV的二重RT-PCR检测方法,并进行特异性分析;同时采用单项RT-PCR和二重RT-PCR法检测临床样本,比较两种方法的检出率。结果表明:试验成功建立了PEDV和TGEV的二重RT-PCR检测方法,经最佳退火温度摸索,二重RT-PCR法的最佳退火温度为58.1℃;经特异性分析,二重RT-PCR法对PEDV和TGEV具有很好的特异性;临床样本的检测结果显示,二重RT-PCR法与单项RT-PCR法检出率基本吻合。说明试验建立的PEDV和TGEV的二重RT-PCR检测方法可用于猪传染性胃肠炎和猪流行性腹泻病的快速鉴别诊断。     

环介导等温扩增技术快速检测猪流行性腹泻病毒

为建立一种快速、灵敏的检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)的环介导等温扩增(LAMP)检测方法,本研究针对PEDV的NP基因设计LAMP引物,对反应体系优化并进行特异性及敏感性等试验.结果表明,该方法在65℃下恒温扩增60 min,经SYBR Green Ⅰ染色后仅肉眼观察即可判定结果.该方法特异性好,与传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒、猪瘟病毒及大肠杆菌等无交叉反应,对重组质粒最低检测限度为16拷贝/μL,灵敏度高于普通PCR.该LAMP检测方法特异性强,灵敏度高,操作方便,适于临床检测PEDV.     

欧洲型PRRSV的分离鉴定及其ORF5基因序列分析

采自福建省规模化猪场的疑似病料进行PRRSV分离鉴定,采用RT-PCR方法扩增PRRSV ORF5全基因并进行序列测定分析。从采集的病料中成功分离2株PRRSV,2株分离毒株ORF5与Gen Bank中选择的参考毒株比较发现,其核苷酸同源性为82.5%~90.6%,氨基酸同源性为80.6%~91.5%。通过序列进行系统进化分析均显示分离毒株属于欧洲型PRRSV,ORF5基因与LV相比变异较大,应加大对欧洲型PRRSV的监控。     

银杏叶提取物对肉仔鸡免疫器官指数及消化道局部体液 免疫球蛋白含量的影响

为研究银杏叶提取物(EGB)对肉仔鸡免疫器官指数及消化道局部体液免疫球蛋白含量的影响,选用360只1日龄健康AA肉用母雏,随机分成5组,每组6个重复,分别饲喂添加0、0.15%、0.20%、0.25%EGB或90 mg.kg-1金霉素的玉米-豆粕型日粮,试验期为42 d。结果表明,添加0.20%、0.25%EGB可显著提高42日龄肉仔鸡脾脏指数、胸腺指数和法氏囊指数(P<0.05),提高胆汁和肠液IgA、IgG、IgM含量(P<0.05),并且作用效果好于金霉素组(P<0.05)。可见,在该试验条件下,日粮中添加0.20%、0.25%EGB可促进肉仔鸡免疫器官的生长发育,提高消化道局部黏膜的体液免疫反应水平。     

银杏叶提取物对断奶仔猪小肠黏膜免疫屏障的影响

旨在研究银杏叶提取物(EGB)对断奶仔猪小肠黏膜免疫屏障的影响。将80头25日龄的"杜×长×大"三元杂交断奶仔猪随机分为2组,每组4个重复,每个重复10头;对照组饲喂基础日粮,试验组在基础日粮中添加0.2%EGB;试验期为28 d;测定断奶仔猪小肠黏膜免疫相关细胞数量、黏膜免疫球蛋白含量和细胞因子含量。结果表明,与对照组相比,日粮中添加0.2%EGB可显著提高断奶仔猪十二指肠、空肠和回肠上皮内淋巴细胞和杯状细胞数量(P0.05),显著提高仔猪十二指肠、空肠和回肠黏膜Ig A、IL-2、IL-4、IFN-γ含量(P0.05)。本试验表明日粮中添加0.2%EGB可提高断奶仔猪小肠黏膜免疫屏障功能。     

猪瘟E2基因多克隆抗体的制备及其特性分析

以CSFV FJ-1株为模板对猪瘟E2基因的主要抗原表位进行PCR扩增,得到大小为370bp的目的片段,将其连接到pET-32a表达载体,转化BL21后利用IPTG诱导其表达,SDS-PAGE和Western blot分析表明,目的蛋白成功获得表达,大小约33.5ku融合蛋白。利用Ni-NTA agarose纯化蛋白、重组蛋白与弗氏完全佐剂充分乳化后免疫新西兰兔,多克隆抗体效价经间接ELISA检测可高达1∶6400。Western blot结果表明该重组蛋白具有良好的反应原性,试验结果表明已成功获得猪瘟E2基因的多克隆抗体且能识别CSFV FJ-1毒株。     

未干扰黑土土壤微生物群落垂直分布特征

采用稀释平板法和Biolog-ECO微平板检测法,以山杨天然次生林土壤为对象,研究了典型黑土区未经开垦干扰黑土0~150 cm土层范围内土壤微生物群落的垂直分布特征。结果表明:(1)土壤微生物总数、细菌和真菌数量随土壤深度增加呈减少趋势,以0~10 cm土层数量最高,分别为4.10×106cfu g-1干土、4.05×106cfu g-1干土和5.04×104cfu g-1干土;而放线菌数量随土壤深度的增加表现为先减后增的趋势,最高值出现在30~50 cm土层,可达0.94×104cfu g-1干土。(2)在培养168 h时,土壤微生物碳源平均颜色变化率(AWCD)的变化范围为0.09~1.21,并表现出随土壤深度增加而逐渐减小的趋势。(3)土壤微生物群落功能多样性指数同样表现为随土壤深度增加而逐渐减小的趋势,且丰富度指数、Shannon-Weiner指数、Simpson指数和McIntosh指数的变化范围分别为0~27、0.46~3.17、0.33~0.95和0.09~8.19。(4)初步确定氨基酸类、羧酸类和多聚物类碳源是未经开垦干扰黑土土壤微生物利用率较高的碳源类型。研究结果为科学评价典型黑土区土壤生境质量退化与恢复过程中微生物特征的变化提供了本底值参考。     

妊娠母猪"大栏群养智能管理"动物福利养殖模式生产情况初报

2015-2016年,对2617头"大栏群养智能管理"和3269头"限位栏饲养"的妊娠母猪生产情况,进行观察对比.结果表明,二种方式的顺产率(试验组92.44%vs.对照组90.33%)和流产率(试验组1.63%vs.对照组3.90%)差异显著(<0.05),其余指标差异均不显著(>0.05);产道疾病构成死亡淘汰的主要原因,其中试验组为51.72%(15/29),对照组为97.50%(39/40).此外,妊娠母猪实施大栏群养智能管理,母猪更为舒适、 健康,也直观上体现了动物福利.     

建设现代农业产业开发区 助力农业农村经济发展——关于设立阳曲现代农业产业开发区调查分析报告

阳曲县作为太原都市区的重要组成部分,其得天独厚的农业条件和优越的生态环境为现代都市休闲农业、生态康养等产业提供了坚实的基础,并且随着近年来多条城际快速路的建设,阳曲县与太原市的联系日益紧密,未来阳曲县都市休闲农业和生态康养等新兴产业的发展必将为太原市域产业的发展注入新的活力、开拓新的空间。     

液体培养法与qPCR法对检测猪鼻支原体灵敏度比较

为了比较《中国药典》已收录但相当耗时的液体培养法和未收录但相对快速的荧光定量PCR(qPCR)法对支原体检测的灵敏度，试验分别在猪鼻支原体生长的对数期（48 h）、稳定期（96 h）和衰亡期（144 h）取样，将样品10倍系列稀释后，使用液体培养法和qPCR法对各个稀释度进行检测（两种方法的样品加入体积分别为0.5 mL和5μL），以比较二者的灵敏度。结果显示：在存活支原体占比高的对数期和稳定期，液体培养法比qPCR法的检测灵敏度高约100倍；而在死亡支原体占比大幅增加的衰亡期，结果则相反，qPCR法反而比液体培养法的检测灵敏度高约1 000倍。当把对数期样品高速离心浓缩约100倍后再用qPCR法检测，其检测灵敏度比浓缩之前提高了约100倍。上述结果表明：影响液体培养法和qPCR法相对灵敏度的主要因素是各自体系中不同的样品加入体积和样品中存活支原体的比例，而由于前一因素导致的两种方法灵敏度的差异，可以通过高速离心浓缩的方法缩小，使两种方法的相对灵敏度基本相同。