重组绵羊pEGFP-PRNP质粒构建及真核细胞转染

构建了携带绵羊朊蛋白基因（PRNP）的重组真核转染质粒,通过脂质体转染试剂将其转染至神经胶质瘤细胞（C6）,以期为进一步研究绵羊朊蛋白的生理功能和从细胞水平研究朊蛋白疾病的发病机制奠定基础。采用PCR扩增目的基因序列,纯化后将其克隆到带有增强型绿色荧光蛋白（EGFP）报告基因的真核表达载体pEGFP-N1中,对重组质粒pEGFP-PRNP做酶切鉴定。而后采用阳离子脂质体转染法将重组质粒转染到C6细胞,荧光显微镜观察。经鉴定,绵羊PRNP基因已克隆到真核表达载体pEGFP-N1中,成功地构建了重组pEGFP-PRNP质粒,并可稳定地在C6细胞中表达。本研究为外源朊蛋白在细胞中表达提供了平台,为进一步在细胞水平研究朊病毒疾病奠定了基础。     

常见猪病临床和病理剖检诊断要点

本文将自己多年在兽医临床实践中的经验和体会报告如下。     

日粮阴阳离子差对母猪钙代谢及相关指标的影响

选用58头2～7胎的大白母猪,随机分成对照组(30头)和试验组(28头)两个处理.对照组为玉米-豆粕型日粮,试验组日粮在对照组日粮的基础上,添加了阴离子盐添加剂.研究日粮的阴阳离子差(dietary cation-aniondifference,DCAD)对母猪钙代谢及相关血液及尿液指标的影响,对照组日粮和试验组日粮的阴阳离子差分别为85.1mEq/kg和-136.5 mEq/kg.结果表明,各阶段试验组母猪血浆钙浓度在数值上高于对照组:试验组血磷浓度在妊娠100 d和分娩后第2天显著高于对照组(P<0.10);各阶段血镬浓度试验组显著或极显著高于对照组(P<0.10或P<0.01);在妊娠86 d到分娩后第2天,试验组的母猪血液甲状旁腺素增加量显著高于对照组(P<0.10).试验组母猪尿液pH值极显著降低(P<0.01);在妊娠86 d和100 d,试验组母猪尿液钙含量均极显著高于对照组母猪(P<0.01);尿液镁含量极显著或显著高于对照组母猪(P<0.01或P<0.10);分娩前的试验组母猪尿液磷含量极显著或显著高于对照组(P<0.01或P<0.10).这表明日粮阴阳离子差可以调节妊娠后期和分娩期母猪的血钙及其他电解质的平衡.     

香型高产杂交水稻新组合宜香1313

宜香1313系四川省宜宾市农科所用自育籼粳交强优恢复系宜恢1313与优质不育系宜香1A组配而成的香型杂交稻新组合。2003—2004年参加四川省区试,平均产量8.33 t/hm2,比汕优63增产5.73%,2005年通过四川省品种审定。该组合丰产稳产,米质较优,抗性较好,有较强的适应性,广泛适用于中国南方稻区种植。     

3种肝损伤模型的组织病理学特征观察

1材料与方法 1．1动物与试剂 1．1．1动物SD大鼠：雌雄各半，体重170～180g，合格证号：SCXK（京）2002—0003，SPF级，北京维通利实验动物技术有限公司提供。     

北京市犬类疫病流行现状调查与防疫对策

20 0 2年 1月至 2 0 0 2年 10月 ,对北京市城四区散养犬和四个郊县内的四个养犬场进行临床发病情况调查 ,采用了PCR诊断技术、胶体金诊断技术、血相分析等化验手段 ,对 40 7个病犬诊断分析 ,结果表明 :40 7个发病犬中 ,病毒病占 45 .95 % ,寄生虫病占8.6% ,皮肤真菌感染发病占 11.3 % ,共确诊疫病 3 8种 ,由此可见 ,犬类传染病严重威胁着犬业的健康发展。     

朊蛋白基因在奶牛生殖系统不同组织中的表达量测定

为了研究疯牛病能够垂直传播的理论基础,我们采用PrP基因做目的基因,GAPDH基因做内参照的相对荧光定量RT-PCR方法,对目的基因和内参基因分别构建标准重组质粒,制备标准曲线,利用标准曲线对采集雌雄奶牛生殖系统的12个不同组织PrP基因表达进行定量。试验结果表明雌雄奶牛的生殖系统各部分组织都有PrP基因表达,其中雄性奶牛的睾丸、附睾和输精管呈现高的表达量,分别为1.16±0.0010、1.81±0.0056、0.68±0.0038;前列腺、精囊腺和尿道球腺呈现中等表达量,分别为0.47±0.0018、0.25±0.0007、0.28±0.0007;阴茎呈现低的表达量为0.18±0.0017;雌性奶牛的子宫、子宫阜呈现高的表达量,分别为2.53±0.0008、1.75±0.0098;卵巢和输卵管呈现中等表达量,分别为1.55±0.0038、1.45±0.0064;阴道呈现低表达量为0.57±0.0036。本研究为阐释PrP基因在奶牛生殖系统的正常表达和正常的生理功能,以及为确定生殖系统在疯牛病垂直传播中的地位和其分子机理奠定了基础。     

疯牛病和羊痒病Western blotting检测方法的建立

以朊蛋白单抗AH6和碱性磷酸酶标记的马抗鼠酶标二抗建立了疯牛病和羊痒病的Western blotting检测方法。对Western blotting各种反应条件进行摸索。并确定了最佳工作条件，结果表明：匀浆缓冲液为RIPA时的最佳反应条件包括浓缩胶电泳电压为恒压90V，分离胶电泳电压为恒压160V，转印的最佳电压和时间为恒压100V1．5h；封闭液为3％BSA时，封闭15min，封闭效果最好；AH6的最佳稀释度为1：4000。4℃下孵育过夜。马抗鼠二抗的最佳稀释度1：1000，室温下孵育30min。采用已确立的反应条件对样品进行检测并与Prionics-Check WESTERN进口试剂盒的检测结果比较，发现其敏感性为100％，特异性为99．4％．与进口试剂盒（100％，100％）无显著差异，这为国产试剂盒研制提供了条件。     

免疫治疗朊病的前景

神经元的死亡被认为是朊病的特点，这是由于细胞表面的唾液酸糖蛋白由正常的含有大量α螺旋的结构变成了异常的β折叠丰富的、具有蛋白酶抗性的结构。最近的研究结果表明，朊病的复制可以被抗PrP的单克隆抗体所抑制，能延长朊病毒的潜伏期，这增加了人们用抗体来治疗朊病的信心。     

应用HACCP体系思想开展肉类企业进口卫生注册评审

20世纪60年代出现的HAC-CP理论,到近期风靡世界的“食品安全源于农场”的理念;从风险分析为政府食品安全决策提供依据,到