水貂细菌病的病原分离·鉴定及药敏试验

[目的]调查水貂细菌病的病原种类及其耐药性,以更好地预防水貂细菌病.[方法]从山东某水貂场采集病料,通过病原分离和生化试验等方法对细菌进行了分离与鉴定,并在此基础上进行了药敏试验.[结果]分离菌鉴定为埃希氏菌、克雷伯菌、哈夫尼菌、志贺氏菌、成团泛菌、耶尔森菌和沙门氏菌.药敏试验结果表明所有分离株对头孢西叮、头孢他啶、头孢吡肟均敏感,对其他药物表现出不同程度的耐药性.[结论]水貂发生细菌病后,应尽可能通过药敏试验筛选敏感药物,避免盲目用药.     

毛皮动物细菌病流行病学调查及耐药分析

为调查毛皮动物细菌病的流行现状及耐药状况,对患病毛皮动物进行病理剖检、细菌分离培养、生化鉴定和药敏试验。结果,共分离出51株11种致病菌,分别为大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、肠杆菌、变形杆菌、枸橼酸杆菌、巴氏杆菌、绿脓杆菌、嗜血杆菌、耶尔森氏菌、志贺杆菌、肺炎双球菌。多数细菌对磷霉素钠、先锋V、头孢噻肟钠、庆大霉素、硫酸链霉素敏感,对氨苄西林、青霉素、四环素、林可霉素表现出耐药性。其结果可为毛皮动物细菌病的防治奠定基础。     

含CpG序列PRRSV SD2 E基因真核表达载体质粒构建及表达

为了提高猪生殖与呼吸综合征病毒山东株(PRRSV SD2株)基因免疫的效果,将PRRSV SD2 E基因插入哺乳动物表达载体PVAX1中,构建出PVAX1-E质粒。再将已筛选出的CpG-ODN序列通过在其两端的粘性酶切末端定向插入含PVAX 1-E的真核表达载体,构建含CpG基因序列真核重组表达质粒CpG-pVAX 1-E。将重组质粒转染COS-7细胞,经RT-PCR检测E基因mRNA的转录和间接免疫荧光试验(IFA)证实:CpG-pVAX 1-E可表达PRRSV GP5蛋白。试验结果为进一步研究PRRSV SD2 ORF5动物免疫反应奠定基础。     

PCV2、PPV、PRV、PRRSV和CSFV复合PCR的应用研究

采用建立的PCV2-PPV-PRV-PRRSV-CSFV复合PCR检测方法,对山东省不同地区送检的32份临床疑似病料进行PCR检测。结果表明:32份样品中,PCV2、PPV、PRV、PRRSV和CSFV感染的阳性率分别为25.00%、0%、34.38%、71.88%和3.13%;共检出25份阳性病料,阳性率为78.13%,其中PRV-PRRSV双重感染的比例为31.25%,PCV2-PRV-PRRSV三种病原体混合感染的比例为25.00%;用单项PCR检测作对照,结果两者符合率为100%,表明该复合PCR检测方法具有较高的敏感性,可以作为临床上猪圆环病毒2型感染、猪细小病毒病、猪伪狂犬病、猪繁殖与呼吸综合征和猪瘟的病原学快速诊断方法。     

PCV2和猪伪狂犬病弱毒疫苗体外共接种对猪PBMC中IL-2及IL-6 mRNA表达的影响

将猪圆环病毒2型（PCV2）与猪伪狂犬病弱毒疫苗（PRV）体外单接种和共接种仔猪外周血单个核细胞（PB-MC）,采用real-time PCR技术定量检测接种后不同时间PBMC细胞因子IL-2和IL-6的mRNA表达水平,以分析PCV2对PRV免疫反应的影响。结果显示,PRV接种组PBMC中IL-2与IL-6的mRNA表达均出现显著上调（P〈0.05）,PCV2接种组IL-2与IL-6的mRNA表达在接种后的部分时间也出现显著上调,但PCV2与PRV共接种组的IL-2与IL-6的mRNA表达较PRV组均出现显著下调,表明PCV2能够抑制PRV促进猪PBMC中IL-2与IL-6的mRNA表达上调作用,提示PCV2可能会对PRV的免疫反应产生不利影响。     

T4噬菌体的组装、感染及细胞裂解

为深入开发利用T4噬菌体展示系统及T4噬菌体的临床细菌病治疗,应用现代各种分子生物学手段,在蛋白分子和组成结构上对T4噬菌体颗粒的各个重要组成部分进行分析,例如头部、尾部和尾板,描述了其蛋白构成和各种影响因子,并着重介绍了在噬菌体装配中最为重要的DNA的包装。同时针对噬菌体T4的感染与超感染免疫性和感染所导致的细胞裂解和裂解抑制等方面,介绍了这些现象发生的分子机制和影响因素。以期对T4噬菌体的分子装配和侵染机制有更为深刻的了解。     

鸡补体C3d与禽流感病毒M2融合蛋白的原核表达与反应原性分析

为表达禽流感病毒M2蛋白与单拷贝及双拷贝鸡补体C3d的融合蛋白,本实验分别将单拷贝和双拷贝的鸡补体因子C3d基因同禽流感病毒M2基因5'端连接,再将串联基因定向克隆到pET-32a表达载体中进行诱导表达,表达产物用SDS-PAGE和western blot分析。结果表明,表达的2个融合蛋白大小分别约为64ku和97ku,以包涵体形式存在。Western blot分析结果显示,2种重组蛋白可被M2多克隆抗体识别,表明2种重组蛋白具有反应抗原性,为研制以鸡补体C3d为分子佐剂的禽流感新型疫苗奠定了基础。     

腹泻驴驹与健康驴驹粪便微生物多样性比较分析

为了探究腹泻驴驹与健康驴驹粪便微生物多样性及结构组成差异，筛选出腹泻驴驹的特异性菌群，试验采集同等饲养条件下的腹泻驴驹和健康驴驹的粪便样本各5份，利用16S rRNA高通量测序技术，对腹泻驴驹和健康驴驹粪便在微生物多样性方面(结构和组成)存在的差异进行比较。结果表明：腹泻驴驹粪便微生物的多样性小于健康驴驹(P>0.05)。与健康驴驹相比，在门水平上，厚壁菌门相对丰度显著减少(P<0.05),且梭杆菌门仅出现在腹泻驴驹粪便中；在属水平上，腹泻驴驹粪便微生物中拟杆菌属相对丰度明显升高。说明腹泻驴驹与健康驴驹在粪便微生物多样性方面存在显著差异，厚壁菌门相对丰度减少及拟杆菌属相对丰度增加可能是驴驹腹泻的重要原因。     

鸡胚源大肠杆菌的分离鉴定及其致病性和耐药性分析

为了解鸡胚来源大肠杆菌的致病性和耐药性情况，本试验对山东省某白羽肉鸡孵化场6个不同批次种蛋孵化后随机抽检的174枚啄壳未出壳死胚的卵黄和胎粪进行了大肠杆菌分离。通过细菌培养、形态观察、生化试验方法鉴定大肠杆菌；通过小鼠攻毒试验和毒力基因PCR检测确定大肠杆菌分离株的致病性；利用纸片扩散法药敏试验检测大肠杆菌分离株的耐药性。结果显示，共分离鉴定大肠杆菌28株；小鼠攻毒试验结果显示，27大肠杆菌分离株对小鼠的致死率达到了50.0%以上，其中有24株超过了83.0%;在检测的14种毒力基因中，papA、papC、eaeA和vat四种基因未检出，fimC检出率最高(85.7%),另外9种毒力基因检出率介于3.6%～64.3%;菌株的致病性与携带的毒力基因数量大致呈正相关；耐药性检测结果显示，大肠杆菌分离株对10种抗菌药物具有不同程度的敏感性，耐药率介于17.9%～89.3%。结果表明，本试验分离的鸡胚源大肠杆菌绝大多数具有致病性，对临床常见抗菌药物存在不同程度的耐药。本试验结果为种鸡场加强大肠杆菌垂直传播的管理和控制以及临床用药的选择提供了参考依据。